Variabilité analytique de la mesure de la créatinine

Variabilité analytique de la mesure de la créatinine

Schéma expérimental général

Cette étude a visé à contrôler si les laboratoires des cliniques vétérinaires donnaient des résultats comparables pour les analyses de biochimie vétérinaire, en se fondant sur l’exemple de la mesure de la concentration plasmatique de la créatinine, l’analyte le plus fréquemment dosé.
Le protocole général d’étude a donc été le suivant :
1/ mise au point d’un questionnaire relatif au fonctionnement du laboratoire des cliniques
2/ sélection des spécimens de contrôle
3/ sélection des cliniques
4/ collecte des données du questionnaire et mesure de la créatininémie dans les deux spécimens de contrôle
5/ traitement des données collectées

Elaboration du questionnaire

La mise au point du questionnaire a reposé sur les objectifs suivants : documenter le matériel utilisé, les utilisateurs, l’entretien, les procédures de contrôle et de maintenance de façon à permettre une éventuelle interprétation d’anomalies observées. être suffisamment bref pour être acceptable préserver l’anonymat de chacune des cliniques visitées pour le traitement des résultats mais permettre une réponse individuelle vers chaque clinique.Pour répondre à ces objectifs, le questionnaire présenté en Annexe 1 a été utilisé. Il a été systématiquement rempli par la même personne (EC) pour limiter l’éventuelle variabilité d’informations qualitatives, codé par cette personne qui a gardé tous les originaux et n’a transmis que des documents anonymes.
Le questionnaire a été organisé en quatre parties :
Caractéristiques de la clinique: identité du contact et coordonnées de la clinique, numéro d’anonymat, taille de la structure, activité dominante (canine, bovine, équine), éventuelle spécialisation en biologie de l’un des vétérinaires.
Renseignements sur l’analyseur : marque, date d’achat, aspect extérieur, modalité de réalisation des contrôles de qualité et de l’entretien.
Modalités d’utilisation des réactifs : conservation, date de péremption, manipulation, mise à température ambiante.
Technique de dosage de l’opérateur : observée et côté par EC.
Spécimens de contrôle
Il a semblé utile de comparer l’exactitude des différents analyseurs sur deux spécimens différents, ayant des concentrations en créatinine :
– 1 – voisine du seuil de décision « normal » vs. « pathologique » ;
– 2 – anormalement mais moyennement élevée.
Cela visait à mettre en évidence d’éventuelles erreurs d’interprétation médicale de résultats inexacts, surtout pour l’échantillon de contrôle 1.
Le spécimen N°1 était un lot de sérum de contrôle VetTrol®Control (Idexx, lot B5801). Ce sérum lyophilisé d’origine bovine, de concentration cible = 137 μmol/L a été conservés au congélateur jusqu’à utilisation (péremption : 31 Août 2007). Chaque flacon a été reconstitué selon les indications du fabricant [73], permettant de disposer de 3 mL de spécimen N°1. Le sérum a été ensuite réparti en aliquotes de 0,5 mL puis recongelé pendant au maximum une semaine.
Le spécimen N°2 était une série d’aliquotes congelées (500μL) d’un pool de plasmas héparinés de chiens, chats, bovins et chevaux de la plasmathèque du Laboratoire de Biochimie Médicale des Cliniques de l’ENVT.
Les spécimens présentant des signes visibles d’hémolyse, d’ictère ou de lipémie ont été écartés. Le pool de plasma a ensuite été centrifugé pour supprimer les caillots de fibrine formés lors de la décongélation. Puis ce pool de plasma a été « dopé » par addition de créatinine anhydre (fabricant : Sigma n°C4255, lot 035KO168) pour atteindre une concentration moyenne de 250 μmol/L. La concentration finale en créatinine du spécimen N°2 (261 μmol/L) a été déterminée en effectuant la moyenne de cinq mesures successives réalisées avec le Vitros®250.
Pour chaque utilisation, une aliquote a été décongelée à température ambiante, homogénéisée par retournements et centrifugée 5 min à 3000 g pour éliminer les éventuelles traces de fibrine. Les deux spécimens ont ensuite été conservés avant utilisation pendant au maximum 10 heures, réfrigérés en caisse isotherme à environ 4°C. Ces précautions ont été jugées suffisantes pour garantir la stabilité des spécimens [20] [50].
Un fois par semaine, la concentration en créatinine des deux spécimens de contrôle a été mesurée avec l’analyseur Vitros®250 afin de contrôler la stabilité des spécimens.
Collecte des données
Le choix des cliniques vétérinaires n’a pas été totalement aléatoire car cela aurait nécessité des déplacements trop importants, incompatibles avec le temps et le budget disponibles. Il a dépendu : des zones géographiques situées au voisinage des activités professionnelles ou familiales ; en l’occurrence, n’ont été contactées que des cliniques vétérinaires situées dans un rayon approximatif de 30km autour de Toulouse, Pau, Dijon, Avignon, Poitiers, Millau. de l’acceptation des cliniques de chacune de ces zones.
Toutes les cliniques répertoriées dans l’annuaire Roy ont été contactées par téléphone pour : expliquer le but du travail, demander la participation d’un des vétérinaires pour remplir le questionnaire et la participation de la personne faisant les analyses dans la clinique si elle était différente, obtenir un rendez-vous.
Cent trente huit cliniques vétérinaires ont été contactées. Les cliniques ne disposant pas d’analyseur de biochimie ont été écartées de l’étude, soit 23/138 cas (17%). Dans les cliniques équipées, le taux d’acceptation a été assez élevé : 99/115 soit 86% de réponses favorables (71% des cliniques contactées). Certaines cliniques possédant plusieurs analyseurs, les dosages ont parfois été effectués sur chacun d’eux. Lors des rendez-vous, il a été impossible de faire les essais dans 1 cas. En bilan, l’enquête a permis de collecter des informations complètes sur 104 analyseurs.

Table des matières

TABLE DES ILLUSTRATIONS
TABLE DES ANNEXES
INTRODUCTION
PREMIERE PARTIE : ETUDE BIBLIOGRAPHIQUE
I) Variabilité analytique en biologie médicale
A. Caractéristiques métrologiques des techniques analytiques
1. La précision
2. L’exactitude
a) Concept d’erreur systématique
b) Concept d’erreur totale
3. La spécificité analytique
4. La robustesse
B. Principes généraux du contrôle de qualité
1. Définir le niveau de qualité à atteindre
2. Un outil simple : le graphique de contrôle qualité
II) Variabilité analytique de la mesure de la créatinine
A. Des méthodes de dosage aux caractéristiques métrologiques variables
1. Méthodes colorimétriques
a) La méthode de Jaffé.
b) Autres méthodes colorimétriques
2. Méthodes enzymatiques
a) Méthodes utilisant la créatininase
b) Méthodes employant la créatininase et la créatinase
c) Méthodes utilisant la créatinine déaminase
3. Méthodes en « chimie sèche »
4. La Chromatographie Liquide Haute Performance (CLHP)
B. Caractéristiques des analyseurs de biochimie des cliniques vétérinaires
DEUXIEME PARTIE : MATERIEL ET METHODES
I) Schéma expérimental général
II) Elaboration du questionnaire
III) Spécimens de contrôle
IV) Collecte des données
V) Traitement des données
TROISIEME PARTIE : RESULTATS
I) Résultats du questionnaire
A. Caractéristiques des cliniques vétérinaires rencontrées 
1. Taille des cliniques vétérinaires
2. Secteur d’activité des cliniques vétérinaires
B. Informations recueillies sur les analyseurs testés
1. Analyseurs rencontrés
2. Ancienneté de l’appareil et aspect extérieur
3. Contrôle qualité
4. Nettoyage/maintenance
C. Modalités d’utilisation des réactifs
D. Technique de dosage de l’opérateur
1. Personne réalisant les mesures
2. Manipulation des spécimens
3. Paramètres pris en compte pour interpréter la créatininémie
II) Résultat des mesures de la créatininémie
A. Stabilité des spécimens de contrôle sur l’analyseur Vitros
B. Résultats des dosages
1. Résultats bruts
2. Résultats en fonction des équipements
3. Résultats en fonction de la personne réalisant les mesures
4. Résultats selon les modalités de réalisation du contrôle de qualité
5. Résultats selon les modalités de réalisation de l’entretien
6. Résultats selon la technique de dosage
QUATRIEME PARTIE : DISCUSSION 
I) Méthodologie
A. Choix des cliniques vétérinaires
B. Collecte des données du questionnaire
1. Nombre de cas trop faible pour certains modèles d’analyseurs
2. Problème d’évaluation de la « mise à température ambiante » des réactifs
II) Fonctionnement du laboratoire des cliniques vétérinaires
A. Technique de mesure de l’opérateur 
1. Mauvaise conservation des réactifs
2. Utilisation de réactifs périmés
3. Réactifs non ramenés à température ambiante
4. Manipulation approximative de la pipette
B. Paramètres pris en compte pour interpréter la créatininémie
1. Caractéristiques du sérum
2. Intervalles de référence parfois inadaptés
C. Pas de spécialisation du poste
D. Des contrôles de qualités négligés
E. Méconnaissance de la réalisation pratique du nettoyage
III) Résultats des mesures
A. Exactitude et distribution des mesures de la créatininémie
B. Valeurs non transférables d’un appareil à l’autre
C. Des procédures de dosage à améliorer
IV) Proposition pour la réalisation pratique du contrôle qualité
A. Choix du spécimen de contrôle
B. Déterminer une gamme de valeurs acceptables
C. Se fixer des règles de contrôle
CONCLUSION
BIBLIOGRAPHIE
ANNEXE

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