Soutenance mémoire
Le principe de la validation des procédures analytiques est aujourd’hui largement, répandu dans tous les domaines d’activités ou des mesures sont réalisées. Le champ d’application de la validation analytique s’étend à toute procédure d’analyse utilisée dans le contrôle de la matière première, le développement galénique, le contrôle en cours de fabrication, le contrôle des produits intermédiaires et finis et les essais de stabilité de tous les produits pharmaceutiques. La validation analytique est fondée sur une analyse statistique basée sur un certain nombre de critères aboutissant à des méthodes analytiques permettant de donner des résultats fiables. Au cours de ce travail nous allons valider la technique de dosage du clonazépam qui est un médicament anxiolytique appartenant à la classe des benzodiazépines. Le dosage de cette molécule qui s’inscrit dans le cadre du suivi thérapeutique adapté par le laboratoire du Centre Hospitalier Hassan II est effectué par chromatographie liquide à haute performance de détecteur à barre diode. Dans le présent rapport nous présentons d’abord, le laboratoire d’analyse (Lieu de stage) ensuite une étude bibliographique qui portera sur les benzodiazépines et la méthodologie de validation analytique. Dans la partie expérimentale, nous évaluons la validité de la méthode d’analyse du clonazépam (Rivotril) par HPLC, en générant plusieurs modèles statistiques dans l’objectif de choisir le modèle adéquat pour pouvoir en fin calculer les différentes critèrs de validation et de déterminer le domaine de validité de la méthode.
Présentation du centre hospitalier Hassan II Fès (CHU)
Le CHU Hassan II de Fès est considéré comme un fleuron du secteur de la santé au Maroc. Il permet la formation théorique et pratique des futurs Professionnels médicaux, personnels paramédicaux, et chercheurs en sciences de la santé.
Présentation du laboratoire central des analyses médicales (LCAM)
Le Laboratoire Central d’Analyses Médicales offre une gamme élargie d’analyses médicales introduites pour la première fois au niveau régional et national.
BENZODIAZEPINES
Définition
Les benzodiazépines (BZD) sont une classe des composés chimique formés d’un cycle de diazépine fusionné avec un cycle de benzène. Elles forment une classe de médicaments psychotropes utilisés dans le traitement de l’anxiété, de l’insomnie, de l’agitation psychomotrice, et des convulsions. Elles sont efficaces, très bien tolérées et ne présentent que peu d’effets secondaires.
Historique
En 1952, la seule molécule anxiolytique disponible était le méprobamate (Equanil), mais l’arrivée des benzodiazépines dans les années 60 a marqué un tournant dans la prise en charge des états anxieux. La première benzodiazépine introduite fut le chlordiazepoxide (Librium) (1961) relayée en 1964 par le diazépam (Valium), qui reste la référence. Depuis, plus de deux mille molécules ont été synthétisées et les benzodiazépines représentent actuellement une des classes thérapeutiques les plus employées en médecine humaine. Toutes les benzodiazépines ont une action, anxiolytique , anticonvulsivante , myorelaxante et amnésiante .
Structure générale
Toutes les benzodiazépines ont une Structure chimique identique, ils comportent trois parties importantes :
➢ Un cycle benzène (benzo): cycle A.
➢ Deux atomes d’azote (diaza) : cycle B.
➢ Un cycle azoté à 7 atomes (azépine) : cycle C.
Propriétés physicochimiques des benzodiazepines
Propriétés physiques
Les benzodiazépines se présentent sous la forme de poudres cristallines blanches ou légèrement jaunâtres, inodores et de saveur amère .
Propriétés chimiques
Les benzodiazépines sont très peu solubles dans l’eau, mais parfaitement solubles dans des solvants organiques comme le chloroforme, l’éthanol et l’éther. Leurs sels sont solubles dans l’eau. Ce sont des bases, forte pour le chlordiazépoxide, faibles pour les autres composés ce qui permet leur dosage par potentiomètrie.
Acide gamma amino-butyrique ou GABA
✔ présent dans les neurones où il est synthétisé à partir de l’acide glutamique, sous l’influence de l’acide glutamique décarboxylase (GAD) utilisant le phosphate de pyridoxal comme cofacteur.
✔ Stocké dans les granules des terminaisons pré-synaptiques et libéré dans la fente Synaptique
✔ Agit sur des récepteurs spécifiques de type GABAA et GABAB situés sur la fibre post synaptique.
✔ Le GABA exerce ses effets par l’intermédiaire de deux types de récepteurs : le récepteur GABA A, le plus connu, et le récepteur GABA B. (Des récepteurs GABA C ont été décrits récemment).
Récepteurs et effets GABA-A
Sous la dénomination de récepteur GABA-A, on désigne un complexe macromoléculaire qui, en plus des sites de fixation du GABA, comporte des sites de fixation
➢ des benzodiazépines
➢ des barbituriques
➢ de certains stéroïdes
Le récepteur GABA-A est constitué de 5 sous-unités glycoprotéiques (Principale type (2 α 1, 2β2, γ2)), disposées en couronne de telle façon qu’elles ménagent entre elles un canal permettant le transfert des ions de part et d’autre de la membrane neuronale. Chaque sous-unité est constituée de:
➢ Domaine extra-mb = fixation du GABA et d’autres molécules.
➢ Domaine hydrophobe membranaire = qui définit le pore.
Il s’agit d’un récepteur-canal, perméable préférentiellement aux ions Cl- .
L’ouverture du récepteur-canal perméable aux ions Cl- est commandée directement par le GABA qui est le médiateur essentiel. La fixation de deux molécules de GABA entraîne son ouverture, la pénétration des ions Cl- entraine une hyperpolarisation cellulaire de la membrane du neurone. Cependant, un excès de GABA désensibilise le récepteur. Au niveau du système nerveux, L’influx intracellulaire de chlore entraîne une hyperpolarisation de la membrane qui inhibe l’activité neuronale. L’augmentation de la fréquence d’ouverture du canal chlorure, laissant entrer des ions Cl- est à l’origine d’effets inhibiteurs, et sa diminution, à l’origine d’effets opposés.
Mode d’action
Les benzodiazépines se lient uniquement au récepteur GABA-A, et augmentent la fréquence d’ouverture des canaux chlorés, alors que les barbituriques augmentent la durée d’ouverture de ces canaux. L’action des benzodiazépines est indirecte, comme le montre leur absence d’effets GABAergiques en l’absence de GABA. Elles potentialisent l’action du GABA sur les récepteurs GABA-A en augmentant la probabilité d’ouverture du canal en réponse au GABA et en augmentant l’affinité du GABA pour son récepteur.
Symptomatologie
Troubles neurologiques : vont de la simple somnolence, à la torpeur , au coma. On peut observer des troubles visuels tels qu’une diplopie , une dysarthrie , des vertiges, une ataxie , un délire et hallucination. La rapidité d’installation du coma et sa profondeur dépendent de l’âge, de la quantité ingérée, des antécédents du patient (insuffisance respiratoire…), et de l’éventualité d’une prise associée (alcool, médicament…).
Dépression respiratoire : la dépression respiratoire est très rare, et souvent très modérée.
Effet vasoplégiant : les troubles vasoplégiques sont modérés. Ils se traduisent le plus souvent par une hypotension artérielle et rarement par une bradycardie sinusale.
Troubles de la mémoire : ils sont prolongés pour les benzodiazépines à demie vie longue, à type d’amnésie de fixation, parfois d’amnésie antérograde .
|
Table des matières
I. Introduction
II. Présentation du centre hospitalier Hassan II Fès (CHU)
Partie bibliographique
I. BENZODIAZEPINES
1. Définition
2. Historique
3. Structure générale
4. Classification des benzodiazépines
5. Propriétés physicochimiques des benzodiazepines
5.1 Propriétés physiques
5.2 Propriétés chimiques
6. Acide gamma amino-butyrique ou GABA
7. Récepteurs et effets GABA-A
7.1 Mode d’action
8. Doses toxiques
9. Clonazépam
9.1 Définition
9.2 Pharmacotoxicologie
9.2.1 Absorption
9.2.2 Distribution
9.2.3 Excrétion
9.3 Symptomatologie
9.4 Traitement symptomatique
П. Validation analytique
1. Méthode analytique
2. Cycle de vie d’une méthode analytique
3. Validation analytique
4. Normes et guidelines de validation
5. Critères de validation
5.1 Spécificité / sélectivité
5.2 Sensibilité
5.3 Linéarité
5.4 Justesse
5.5 Fidélité
5.6 Fidélité et justesse
5.7 Limite de détection LDM
5.8 Limite de quantification
5.9 Robustesse
6. Validation analytique basée sur le profil d’exactitude et la notion de l’erreur
totale
6.1 Profile d’exactitude
6.1.1 Etapes d’établissement du profil d’exactitude
6.1.2 Fonctions de réponse
6.1.3 Calcule des critères de validation
6.1.4 Construction graphique et interprétation
Partie pratique
I. Dosage du clonazépam
1. Méthode
1.1 Principe
1.2 Matériel et réactifs
1.3 Mode opératoire
1.4 Résultats
II. Validation statistique de la méthode du dosage du clonazépam
1. Spécificité / sélectivité
2. Profile d’exactitude
2. 1 Choix du matériau de validation
2. 2 Choix du domaine de validation
2. 3 Plan expérimental
2.3.1 Plan d’étalonnage
2.3.2 Plan de validation
2. 4 Sélection des limites d’acceptation
2. 5 Choix du modèle d’étalonnage le plus adéquat
2.6 Calcul des critères de la validation
2.6.1 Calcul des concentration retrouvées après correction
2.6.2 Calcul de la justesse
2.6.3 Calcul de a fidélité
2.6.4 Calcul des intervalles de tolérance
2.7 Profil d’exactitude après correction
3. Calcul de la limite de quantification et de détection
III. Conclusion
Télécharger le rapport complet
