Technique de prélèvement sanguin et mesure de la glycémie

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Criblage phytochimique

Il s’agit de tests qualitatifs qui permettent d’identifier les différentes familles chimiques contenues dans l’extrait. Ces tests sont basés sur l’utilisation des réactifs spécifiques pour chaque famille chimique. La présence de la famille correspondante est caractérisée par une réaction de précipitation ou de coloration (FONG H.H.S. et coll., 1977) (Tableau I).
Pour exprimer la quantité relative des différentes familles chimiques détectées, les signes suivants ont été utilisés :
– : Absence de la famille chimique recherchée.
 : Présence en très faible teneur.
+ : Présence en faible teneur.
++ : Présence en teneur moyenne.
+++ : Présence en forte teneur.

Préparation et administration de l’extrait

L’extrait a été dissout dans de l’eau distillée, et administré chez les animaux par voie orale. Il a été administré dans un volume de 10 ml d’eau par kg de poids corporel (DIEHL H.K. et coll., 2001).

Technique de prélèvement sanguin et mesure de la glycémie

Pour doser la glycémie, une goutte de sang a été prélevée au niveau de la veine mandibulaire. Cette veine a été piquée à l’aide d’une lancette stérilisée fournie avec le glucomètre ‘One Call Plus©’. La goutte de sang qui coulait a été recueillie sur une bandelette réactive du glucomètre. Cette bandelette a ensuite été insérée dans le glucomètre et la glycémie s’affiche sur l’écran digital de l’appareil. Le saignement a ensuite été arrêté par une pression sur la zone de la piqûre (JANET H., 2000).

Étude de l’effet de l’extrait RAF03 sur la glycémie de base

Des souris mises à jeun pendant de 12 h ont été utilisées. Ces animaux ont été réparties en quatre lots : un lot témoin, et trois lots traités avec l’extrait. Les souris du lot témoin ont reçu 10 ml/kg d’eau distillée, tandis que les souris des autres lots ont reçu l’extrait RAF03, dissout dans de l’eau distillée, par voie orale dans un volume de 10 ml/kg (DIEHL H.K. et coll., 2001).
Une goutte de sang a été prélevée au niveau de la veine mandibulaire de chaque animal, puis la glycémie de tous les animaux a été mesurée à T0, ensuite les animaux du lot témoin ont reçu de l’eau distillée et de l’extrait aux doses respectives de 50, 100 et 200 mg/kg pour les 3 autres lots. La glycémie a été de nouveau mesurée à 30 min, 60 min, 90 min, 120 min et 150 min après l’administration de l’extrait et de l’eau distillée (SY G. et coll., 2008).

Étude de l’effet de RAF03 sur l’hyperglycémie passagère

Les souris à jeun pendant 12 h ont été utilisées. Elles ont été divisées en 4 lots de 3 souris : un lot témoin, et 3 lots traités avec l’extrait à différentes doses, administré par voie orale. L’extrait a été dissout dans de l’eau distillée et administré dans 10 ml/kg d’eau.
Un prélèvement sanguin a été effectué au niveau de la veine mandibulaire des souris afin de mesurer leur glycémie de base. Ensuite, les animaux du lot témoin ont reçu 10 ml/kg d’eau distillée, tandis que les animaux des autres lots ont reçu l’extrait RAF03 aux doses respectives de 50, 100 et 200 mg/kg par voie orale dans un volume d’eau de 10 ml/kg (DIEHL H.K. et coll., 2001).
Trente minutes après l’administration de l’extrait et de l’eau distillée, une solution de glucose 4 g/kg a été administrée chez chaque animal dans un volume de 10 ml/kg (DIEHL H.K. et coll., 2001). Un échantillon sanguin a été prélevé au niveau de la veine mandibulaire de chaque animal 30, 60 et 90 min après la surcharge glucosée (SY G. et coll., 2008). Ensuite le taux de glucose dans ces échantillons a été mesuré à l’aide d’un glucomètre ‘One Call Plus©’.

Étude de l’activité de RAF03 sur l’hyperglycémie chronique

La méthode la plus commune pour provoquer une hyperglycémie chronique expérimentale est de détruire les cellules ß pancréatiques avec de l’alloxane ou de la Streptozotocine (SUAREZ C., 1990). Dans notre étude, une solution d’alloxane a été injectée par voie intrapéritonéale à la dose de 150 mg/kg dans 10 ml/kg d’eau distillée (SUAREZ C., 1990).
Des souris mises à jeun pendant 12 h ont été utilisées, puis leur glycémie de base a été mesurée. Ensuite, l’alloxane a été administrée chez tous les animaux, et 48 heures après l’administration de l’alloxane, la glycémie de ces animaux a été mesurée. Les souris dont la glycémie était supérieure à 6,66 mmol/l ont été sélectionnées pour la suite des tests. Ces animaux ont ensuite été répartis en 2 groupes : 1 lot témoin et 1 lot traité avec l’extrait. Les animaux du lot témoin ont reçu 10 ml/kg d’eau distillée, et les animaux du second lot ont reçu l’extrait à la dose à la dose de 200 mg/kg par voie orale dans 10 ml/kg d’eau distillée une fois par jour, pendant 7 jours (SUAREZ C., 1990). Ensuite la glycémie a été mesurée après 1 h, 24 h, 72 h, 5 jours et 7 jours.

Analyse statistique et expression des résultats

Les résultats ont été exprimés sous forme de moyenne plus ou moins écart type réduit ( ?̅ ± e.s.m.). Le test ‘’t’’ de Student a été utilisé pour comparer les moyennes. La valeur de p < 0,05 a été considérée comme significative.

Effet de l’extrait RAF03 sur la glycémie de base

Après avoir administré l’extrait RAF03 par voie orale chez les souris normoglycémiques, la glycémie diminue. Elle varie en fonction de la dose administrée. Celle des animaux témoins reste constante pendant le temps d’observation, elle est égale à 4,95  0,39 mmol/l. Chez les souris traitées avec l’extrait à la dose 50 mg/kg, cette glycémie diminue à 4,13  0,12 mmol/l à la 60ème minute (T60). Tandis qu’avec la dose de 100 mg/kg, la glycémie est minimale à la 90ème minute (T90), elle passe de 4,95  0,39 mmol/l à 2,97  0,15 mmol/l. Enfin, à la dose de 200 mg/kg, la glycémie diminue de 4,95  0,39 mmol/l à 2,17  0,12 mmol/l à la 120ème minute (T120) (Figure 1).

Effet de l’extrait RAF03 sur l’hyperglycémie passagère

Une surcharge de glucose de 4 g/kg entraine une hyperglycémie temporaire chez la souris. Le prétraitement des souris par l’extrait RAF 03 diminue le pic hyperglycémique de ces souris. Trente minutes après l’administration de la solution glucosée, la glycémie est égale à 13,9  0,7 mmol/l chez le lot témoin, contre 12,17  0,61 ; 11,67  0,96 et 10,70  0,85 mmol/l chez les souris traitées avec l’extrait aux doses respectives de 50, 100 et 200 mg/kg (P < 0,05) (Figure 2).

Effet de l’extrait RAF03 sur l’hyperglycémie chronique

Une hyperglycémie chronique a été provoquée chez les souris en injectant de 150 mg/kg d’alloxane par voie intra péritonéale. Quarante-huit heures après cette injection, la glycémie de toutes les souris augmente à 22,3  0,26 mmol/l. Cette hyperglycémie diminue progressivement chez les animaux traités avec l’extrait RAF 03 à 200 mg/kg. Après sept jours de traitement, la glycémie du lot témoin reste constante, avec une valeur de 22,3  0,26 mmol/l alors que celle du lot traité diminue à 7,73  0,85 mmol/l (P < 0,05) (Figure 3).

Table des matières

LISTE DES SIGLES ET DES ABREVIATIONS
I. INTRODUCTION
II. MATÉRIELS ET MÉTHODES
A. PARTIE CHIMIQUE
1. Préparation de l’extrait
2. Criblage phytochimique
B. PARTIE PHARMACOLOGIQUE
1. Animaux d’expérimentation
2. Préparation et administration de l’extrait
3. Technique de prélèvement sanguin et mesure de la glycémie
4. Étude de l’effet de l’extrait RAF03 sur la glycémie de base
5. Étude de l’effet de RAF03 sur l’hyperglycémie passagère
6. Étude de l’activité de RAF03 sur l’hyperglycémie chronique
7. Analyse statistique et expression des résultats
III. RÉSULTATS
A. PARTIE CHIMIQUE
1. Rendement de l’extraction
2. Résultats du criblage phytochimique
B. PARTIE PHARMACOLOGIQUE
1. Effet de l’extrait RAF03 sur la glycémie de base
2. Effet de l’extrait RAF03 sur l’hyperglycémie passagère
3. Effet de l’extrait RAF03 sur l’hyperglycémie chronique
IV. DICUSSION
V. CONCLUSION
RÉFÉRENCES

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