SURVIE DU CORPS JAUNE ACCESSOIRE

EXAMEN ECHOGRAPHIQUE DES OVAIRES

L’examen échographique des ovaires a été réalisé par voie transrectale au moyen d’un échographe portable (Tringa, ESAOTE Pie Medical, Poisy, France) équipé d’une sonde linéaire de 7,5MHz. Chacun des examens a été réalisé selon le même mode, par le même manipulateur sur les bovins attachés au cornadis après la traite du matin une fois la ration distribuée, après exploration préalable par palpation transrectale de l’appareil génital. Les différentes structures présentes ont été identifiées selon les critères décrits par Kähn (1994). Les structures ovalaires ou rondes à paroi fine et dont le contenu anéchogène ne dépasse pas 2cm de diamètre ont été identifiées comme des follicules. Les structures ovalaires d’échogénicité tissulaire, grossièrement granuleuse, se différenciant nettement du stroma ovarien, plus clair, ont été identifiées comme des corps jaunes. Lorsque l’échographie montrait au sein de ce même type de structure une collection de liquide anéchogène de diamètre inférieur à 2cm, cette structure a été identifiée comme un corps jaune cavitaire. Lorsque cette cavité anéchogène dépassait les 2cm de diamètre avec une paroi de plus de 3mm, cette structure a été identifiée comme un kyste lutéal. Les kystes lutéaux ont été différenciés des kystes folliculaires par l’épaisseur et le type d’échogénicité de leur paroi, les kystes folliculaires ont également une cavité contenant un liquide anéchogène de plus de 2cm de diamètre, mais, leur paroi est très fine (moins de 3mm) et apparaît plus échogène que celle des kystes lutéaux.

Les diamètres de la plus grande structure folliculaire et de la plus grande structure lutéale présentes sur les deux ovaires ont été mesurées. Les mesures ont été réalisées en traçant la droite passant par le centre de la structure et en mesurant par la fonction ad hoc de l’échographe la distance séparant les deux faces externes de la paroi les plus éloignées. Les images ont été enregistrées dans la mémoire numérique de l’échographe puis identifiées par le numéro de la vache et la latéralisation de l’ovaire. Les fichiers ont été ensuite transférés sur ordinateur sous logiciel d’exploitation Bitmap (Microsoft, Issy les Moulineaux, France). Les résultats ont ensuite été enregistrés sous forme de tableau via le logiciel Excel (Microsoft, Issy les Moulineaux, France), afin d’obtenir des données par jour ainsi que par vache. Les données enregistrées étaient le type de structure présente sur chaque ovaire (follicule, corps jaune, kyste folliculaire et lutéal) ainsi que son diamètre. Pour les follicules, seul le diamètre du plus gros follicule présent a été enregistré. Pour les kystes, le diamètre du kyste ainsi que celui de sa cavité ont été enregistrés. La date de lyse du corps jaune a été fixée au jour de la disparition totale à l’échographie du corps jaune accessoire, disparition faisant suite à la diminution du diamètre de ce dernier observée au cours des jours précédents.

DOSAGE DE LA PROGESTERONE

Les prélèvements sanguins ont été réalisés à la veine coccygienne sur tube sec (Vacutainer, Becton-Dickinson, Franklin Lakes, New Jersey, Etats Unis). Les tubes ont été centrifugés dix par dix dès le retour de l’exploitation à 12,000 g pendant 150 secondes. Le sérum a ensuite été prélevé au moyen d’un micro-pipeteur afin d’obtenir 2 aliquots qui ont ensuite été congelés à une température de -20°C dans deux congélateurs différents. Des sérums témoins ont été dosés simultanément aux sérums du protocole afin de pouvoir contrôler l’absence de variabilité entre chaque lot de dosage. Afin de réaliser ces sérums témoins, 50 mL de sang ont été prélevés sur un veau pré-pubère de deux semaines afin d’obtenir un sérum avec une concentration nulle en progestérone. Le dosage de progestérone a ensuite été réalisé par ELISA automatisé et détection par chemiluminescence (Elecsys 2010 Hitachi Boeringher®, Reims, France) munie de kits Progestérone II ® (Roche, Neuilly sur Seine, France). Un seul des deux aliquots réalisés pour chaque tube a été décongelé, d’abord à température ambiante puis au bain marie à 37°C. Les sérums décongelés ont ensuite été homogénéisés, puis répartis en deux échantillons de 300microlitres, échantillons sur lesquels les dosages ont été effectués. La moyenne de ces deux concentrations a ensuite été prise en compte.

SELECTION DES VACHES ENTRANT DANS L’ETUDE

L’étude s’est déroulée du 20 Octobre au 5 Décembre 2008 à l’EARL de Bissy à Bonnelles dans les Yvelines (78830). Les vaches recrutées étaient des vaches laitières multipares de race Prim’Holstein, entre 34 et 75 jours post-partum, non encore inséminées. Les vaches étaient réparties en trois lots : un dans lequel ne se trouvent que des vaches malades et deux autres lots constitués en fonction de la production (lot 1 et lot 2). 42 vaches ont été initialement examinées : un examen des ovaires a été réalisé par échographie transrectale. Seules les vaches présentant un follicule de plus de 10mm de diamètre et/ou un corps jaune de diamètre supérieur à 20 mm ont été incluses dans l’étude (tableau 1). Ainsi, 27 vaches sont entrées dans le protocole. Leur production laitière moyenne pour la lactation en cours lors de l’étude était de 12034±2682 litres. Leur état corporel a été noté (tableau 1).

PROTOCOLE EXPERIMENTAL

Le jour de l’inclusion les vaches ont reçu une injection intramusculaire de 100 microgrammes de buséréline (2,5mL de RECEPTAL, Intervet Schering Plough, Beaucouze, France). Sept jours plus tard, ont reçu une injection intramusculaire de 0,5mg de cloprosténol (2mL d’ESTRUMATE Intervet Schering Plough, Beaucouze, France). Deux jours plus tard, chacune des vaches a subi une échographie par voie transrectale de ses deux ovaires avec pour but la latéralisation du follicule pré-ovulatoire (tableau 2). Suite à l’échographie, les 27 vaches ont reçu une injection intramusculaire de 100 microgrammes de GnRH. Deux jours après la deuxième injection de buséréline (J1), les vaches ont été échographiées afin de contrôler la disparition du follicule pré-ovulatoire, la disparition du follicule étant synonyme d’ovulation ce qui n’était pas le cas pour cinq vaches.

Une fois l’ovulation provoquée, un suivi échographique des vaches ayant ovulé a été réalisé à J4, J6, J8, J9, J10, J11 et J12 afin de suivre la première vague folliculaire ainsi que l’émergence de la seconde (figure 1). Les vaches n’ayant pas ovulé ont été exclues de l’étude. Les follicules présents ont été mesurés à chaque examen. A J12, 1500 UI d’hCG (CHORULON®, Intervet Schering Plough) ont été injectées par voie intramusculaire. A J14, une échographie ovarienne a été réalisée pour observer la lutéinisation du follicule et la formation d’un corps jaune accessoire. La croissance puis la lutéolyse du corps jaune secondaire ont été suivies à J18, J20, J22, J24, J26, J30, J32, J34, J36. Les dernières échographies avaient également pour but d’observer une ovulation prouvant la reprise d’un cycle une fois le corps jaune secondaire lysé (figure 1).

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Table des matières

LISTE DES TABLEAUX
LISTE DES FIGURES
INTRODUCTION
PREMIERE PARTIE : MATERIEL ET METHODES
I/. EXAMEN ECHOGRAPHIQUE DES OVAIRES
II/. NOTATION DE L’ETAT CORPOREL
III/. DOSAGE DE LA PROGESTERONE
IV/. SELECTION DES VACHES ENTRANT DANS L’ETUDE
V/. PROTOCOLE EXPERIMENTAL
VI/. ANALYSE STATISTIQUE
DEUXIEME PARTIE: RESULTATS
I/. INDUCTION DE L’OVULATION
II/. STATUT OVARIEN DES VACHES A J12
III/. FORMATION ET ACTIVITE DU CORPS JAUNE ACCESSOIRE
a) Echographies
b) Progestéronémie
IV/. SURVIE DU CORPS JAUNE ACCESSOIRE
TROISIEME PARTIE : DISCUSSION
CONCLUSION
BIBLIOGRAPHIE
ANNEXES