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Rรฉpartition gรฉographique du groupe sanguin ABO(H)
Au niveau mondial, le groupe sanguin O(H) est le plus frรฉquent (45%). Les groupes A, B et AB sont rรฉpartis selon les frรฉquences suivantes : 40%, 11% et 4% respectivement. La rรฉpartition gรฉographique des 4 groupes sanguins diffรจre toutefois largement selon la situation gรฉographique et lโethnie des populations. Le groupe O(H) est le plus frรฉquent en Amรฉrique du Sud, dans certaines rรฉgions dโAfrique et en Australie12. Le phรฉnotype A, qui est plus frรฉquent dans les populations caucasiennes (43-45%), lโest beaucoup moins dans les populations dโorigine asiatique ou africaine (20-25%)12-13.
Synthรจse des antigรจnes ABO(H)
Les antigรจnes A et B correspondent ร lโoligosaccharide final dโune structure polysaccharidique qui est amenรฉ et fixรฉ par lโenzyme correspondante (enzyme A pour lโantigรจne A, et enzyme B pour lโantigรจne B) ร la substance H. Ces enzymes appartiennent ร la famille des GT, catalysant le transfert dโun monosaccharide ร partir dโun oligosaccharide activรฉ (donneur) vers un accepteur. Cโest la nature de cet antigรจne final qui dรฉfinit le groupe sanguin. Pour le groupe O(H), la cascade de glycosylation sโarrรชte ร lโantigรจne H. Dans ce cas, lโantigรจne du groupe O(H) est lโantigรจne H terminal. Il faut rappeler que pour le groupe A, deux sous-groupes dโenzymes sont diffรฉrenciรฉes (A1 et A2).
Structure et expression des glycosyltransfรฉrases
Structure
Les GT, protรฉines transmembranaires de type II de 42 kDa sont constituรฉes de 354 acides aminรฉs pour les enzymes B et A1 (21 acides aminรฉs supplรฉmentaires pour A2), et de 117 acides aminรฉs pour la forme tronquรฉe du groupe O(H). Les GT sont organisรฉes en deux domaines reliรฉs par le site actif. La partie N-terminale intracytosolique, renferme, le site de liaison au donneur dโoligosaccharide activรฉ. La partie C-terminale, intra-luminale, comprend le site de liaison au disaccharide accepteur21 (Figure 5).
Expression
Les GT sont exprimรฉes, ร lโรฉchelle cellulaire, aux niveaux du rรฉticulum endoplasmique et de lโappareil de Golgi oรน ont lieu les รฉtapes de glycosylation et de modifications post-traductionnelles des protรฉines (Figure 6). Lโรฉtape initiale de la synthรจse des antigรจnes des groupes ABO(H) consiste ร ajouter un monosaccharide sur le prรฉcurseur protรฉique ou lipidique. Pour les glycoprotรฉines par exemple, il sโagit soit dโune N-glycosylation (ajout dโun N-acรฉtyl-glucosamine ร une asparagine), soit dโune O-glycosylation (ajout dโun N-acรฉtyl-galactosamine ร une thrรฉonine ou une sรฉrine). La N-glycosylation dรฉbute dans le rรฉticulum endoplasmique et sโachรจve dans lโappareil de Golgi, alors que la O-glycosylation prend place dans le Golgi. Une รฉtape dโรฉlongation est ensuite entreprise par lโajout sรฉquentiel de motifs disaccharidiques. Une รฉtape subterminale de glycosylation est indispensable pour aboutir ร lโexpression des antigรจnes A, B et O(H). Elle fait intervenir une๏ ๏ก(1,2) fucosyltransfรฉrase (codรฉe par le gรจne FUT1) qui catalyse la fixation dโun fucose sur le prรฉcurseur oligosaccharidique amenant ainsi ร lโexpression de lโantigรจne H22. Ce dernier forme, dans une รฉtape ultime, un prรฉcurseur commun aux GT responsables de la synthรจse des antigรจnes A et
B. Lโ๏ก(1,3) N-acรฉtylgalactosamine transfรฉrase, codรฉe par lโallรจle A, catalyse lโajout dโune N-acรฉtylgalactosamine ร lโantigรจne H formant ainsi lโantigรจne A. La๏ ๏ก(1,3) galactosyltransfรฉrase, codรฉe par lโallรจle B, transfรจre un galactose sur lโantigรจne H crรฉant ainsi lโantigรจne B. En revanche, chez les personnes portant un allรจle O(H), la GT est non fonctionnelle, les รฉrythrocytes exposent donc uniquement lโantigรจne H.
Les prรฉcurseurs oligosaccharidiques
La nature des prรฉcurseurs oligosaccharidiques diffรจre en fonction de leur origine. On distingue 5 types de prรฉcurseurs oligosaccharidiques servant de substrats pour lโaction de la ๏ก(1,2) fucosyltransfรฉrase. Cette action aboutit ร la synthรจse de lโantigรจne H qui est dit du๏ mรชme type que le disaccharide de base. La majoritรฉ des prรฉcurseurs oligosaccharidiques รฉrythrocytaires sont de type 2-23, provenant soit du mรฉsoderme comme les globules rouges soit de lโectoderme comme lโรฉpiderme. Lโactivitรฉ de la๏ ๏ก(1,2) fucosyltransfรฉrase est conditionnรฉe par le type de prรฉcurseur rencontrรฉ. Par exemple, chez les porteurs dโun allรจle A1, lโ๏ก(1,3)N-acรฉtylgalactosamine transfรฉrase est capable de transformer la substance H de type 324-25 en antigรจne A1, ce qui est impossible pour lโenzyme codรฉe par lโallรจle A2. Ce facteur de modulation de lโactivitรฉ GT serait ร lโorigine, entre autres, de la diffรฉrence de la densitรฉ antigรฉnique A entre les hรฉmaties A1 et A2.
Expression des antigรจnes ABO(H)
Au niveau รฉrythrocytaire, 80% des รฉpitopes ABO(H) sont exposรฉs par les glycoprotรฉines transmembranaires band 326, la band 4.5 et la glycoprotรฉine RhAG. Ces antigรจnes nโont pas รฉtรฉ retrouvรฉs au niveau de la glycophorine A.
Lโexpression de ces antigรจnes nโest pas exclusive aux รฉrythrocytes. En effet, ils ont รฉgalement รฉtรฉ identifiรฉs ร la surface des plaquettes27, des lymphocytes et aussi au niveau dโautres glyco-et lipoprotรฉines, plasmatiques et tissulaires. Les travaux dโOโDonnell et al. en 2001 ont montrรฉ quโau niveau plasmatique, lโantigรจne H est exprimรฉ ร la surface du VWF et subit les mรชmes actions de glycosylation amenant ร lโexpression des antigรจnes du groupe ABO(H)28. Les types de glycosylation de cet antigรจne H et le nombre dโรฉpitopes H portรฉs par le VWF sont capables de moduler les taux plasmatiques de VWF circulant. Dโautres glycoprotรฉines plasmatiques comme lโ๏ก2-macroglobuline29-27 et la L-sรฉlectine soluble30, lโรฉlastase1 pancrรฉatique sรฉcrรฉtรฉe dans le tube digestif31, lโantigรจne carcinoembryonique32, lโรฉpiderme humain, les tissus du systรจme nerveux et de multiples tissus et organes expriment รฉgalement les antigรจnes du groupe ABO(H).
Gรฉnotype/Phรฉnotype sรฉcrรฉteur
Depuis plusieurs dรฉcennies (1932), nous savons que les antigรจnes ABO(H), portรฉs par les globules rouges, peuvent รชtre sรฉcrรฉtรฉs sous forme soluble dans les muqueuses digestives, respiratoires, gรฉnito-urinaires, les larmes et le lait maternel. Ce phรฉnotype dit ยซ Sรฉcrรฉteur ou Seยป est retrouvรฉ chez 80% de la population. Les autres individus sont dits ยซ non-sรฉcrรฉteurs ou se ยป. Le phรฉnotype Se est conditionnรฉ par lโaction dโun autre isotype de lโenzyme๏ ๏ก(1,2) fucosyltransfรฉrase, codรฉ par le gรจne Se (ou FUT2) localisรฉ sur le chromosome 19 en position 19q13.3)33. Les produits des deux gรจnes : FUT1 (gรจne H) et FUT2 (gรจne Sรฉcrรฉteur) exprimรฉs dans des tissus diffรฉrents possรจdent des prรฉcurseurs oligosaccharidiques distincts. Lโ๏ก(1,2) fucosyltransfรฉrase codรฉe par le gรจne FUT1 prend comme substrats les prรฉcurseurs de type 2 et 4 alors que lโenzyme codรฉe par FUT2 rajoute le plus souvent, un oligosaccharide ร un prรฉcurseur de type 1 et 334.
Dรฉtermination du groupe sanguin ABO(H)
En routine, la dรฉtermination du groupe sanguin ABO(H) est rรฉalisรฉe suivant deux รฉtapes prรฉsentรฉes en Figure 7. La premiรจre repose sur lโidentification ou non des antigรจnes A et B ร la surface des hรฉmaties au cours dโune รฉpreuve globulaire (Beth-Vincent) en mettant les hรฉmaties en prรฉsence dโanti-A, dโanti-B et dโanti-AB. Une รฉpreuve sรฉrique (Simonin) fait suite ร lโรฉpreuve globulaire. Elle consiste ร faire interagir le sรฉrum du sujet avec des hรฉmaties portant des antigรจnes ABO(H) connus, permettant de mettre en รฉvidence la prรฉsence ou lโabsence ยซ rรฉguliรจre ยป dโagglutinines ยซ naturelles ยป anti-A et/ou anti-B dans le sรฉrum35. Ces agglutinines sont des anticorps dirigรฉs contre les antigรจnes absents des globules rouges. Les sujets de groupe O(H) dont les hรฉmaties nโexposent ni lโantigรจne A ni lโantigรจne B prรฉsentent, au niveau sรฉrique, les deux agglutinines rรฉguliรจres anti-A et anti-B. Par exemple, les hรฉmaties de groupe AB vont agglutiner en prรฉsence dโanti-A, dโanti-B et dโanti-AB et aucune agglutination ne sera observรฉe en mettant le sรฉrum en prรฉsence dโhรฉmaties A, B ou AB.
Groupe sanguin ABO(H) en pathologie
Les รฉtudes phylogรฉnรฉtiques montrent que les groupes sanguins sont trรจs anciens et quโils ont รฉvoluรฉ pendant des millions dโannรฉes. Tout au long de leur รฉvolution, les groupes sanguins ont รฉtรฉ le siรจge de multiples variations gรฉnรฉtiques tout en restant trรจs conservรฉs ร travers les gรฉnรฉrations36. Cela suggรจre que les antigรจnes des groupes sanguins auraient un rรดle important dans la survie de lโespรจce. Lโintรฉrรชt en mรฉdecine transfusionnelle, dans le domaine des greffes dโorganes ou de moelle et leur rรดle dans la maladie hรฉmolytique du nouveau-nรฉ sont bien รฉtablis. Les connaissances sur les groupes sanguins en pathologie se sont multipliรฉes. En pathologie cancรฉreuse, une modification de lโexpression antigรฉnique ABO(H) est rapportรฉe. Par exemple dans le cas des cancers du pancrรฉas et du colon, ร lโรฉtat prรฉcancรฉreux, la surexpression et la synthรจse de nรฉoantigรจnes37-38 parfois incompatibles avec le groupe sanguin du patient favoriseraient la progression vers le cancer. Une diminution voire une disparition des antigรจnes ABO(H)39 est observรฉe รฉgalement dans les hรฉmopathies malignes et les tumeurs solides facilitant la migration tumorale en diminuant lโapoptose. Des รฉtudes dโassociation ont รฉgalement montrรฉ que les sujets de groupe O(H) sont moins ร risque de dรฉvelopper une pathologie cancรฉreuse, suggรฉrant une possible valeur pronostique des antigรจnes du groupe sanguin dans le cancer40.
Dโautres รฉtudes ont รฉgalement รฉtabli lโexistence dโune association entre les groupes sanguins ABO(H) et la susceptibilitรฉ ou la rรฉsistance ร de nombreux agents infectieux. Une รฉtude observationnelle rรฉcente de 2017 a trouvรฉ une association entre le groupe sanguin A et lโinfection par le VIH ou le virus de lโhรฉpatite B41. En revanche, le groupe sanguin O(H) semble รชtre un facteur protecteur contre ces infections. Les groupes sanguins non-O(H) ont รฉtรฉ associรฉs ร la progression de lโinfection par le virus de lโhรฉpatite C vers la fibrose hรฉpatique avec un odds ratio (OR) de 1,8 avec un Intervalle de confiance (IC) ร 95% ร 1-2,9 ; p=0,4)42.
Les anticorps naturels anti-A et anti-B seraient capables de neutraliser des agents infectieux exposant les antigรจnes du groupe sanguin. Par exemple, les groupes B et O(H) seraient plus rรฉsistants face ร une infection par la variole que les individus des groupes A ou AB43. Par ailleurs, les antigรจnes ABO(H) faciliteraient lโadhรฉsion et lโinvasion de certains agents pathogรจnes en leur servant de rรฉcepteurs comme dans le cas de lโinfection ร Hรฉlicobacter pylori44, agent responsable de la formation et la pรฉrennisation des ulcรจres gastro-duodรฉnaux.
De faรงon intรฉressante, les groupes O(H) sont plus ร risque de dรฉvelopper un ulcรจre gastro-duodรฉnal. Un des mรฉcanismes expliquant cette observation serait que lโantigรจne H, fucosylรฉ, exprimรฉ ร la surface des cellules รฉpithรฉliales gastriques serait ร lโorigine de lโadhรฉsion dโHรฉlicobacter pylori ร la muqueuse gastrique et favoriserait ainsi la formation de lโulcรจre45.
Cette facultรฉ des antigรจnes ABO(H) ร รชtre des facteurs protecteurs ou dรฉlรฉtรจres contre certaines infections pourrait expliquer, en partie, leur conservation ร travers lโรฉvolution.
Le groupe sanguin ABO(H) est aussi dรฉcrit comme un facteur de risque de pathologies complexes comme le diabรจte de type I qui est plus frรฉquent chez les sujets de groupes A ou AB46 et dans certaines maladies auto-immunes comme la spondylarthrite ankylosante47 plus frรฉquente dans la population des non-sรฉcrรฉteurs et la MTEV.
Relation maladie thrombo-embolique veineuse et groupe sanguin ABO(H)
Lโimplication du groupe sanguin ABO(H) dans la MTEV remonte ร plus de cinquante ans. Cโest enย 1969 que lโรฉquipe de Jick dรฉcrivait , pour la premiรจre fois, une augmentation du risque thrombotique dans un groupe de patients non-O(H) prรฉsentant une TVP en cours de traitement anticoagulant en comparaison avec des donneurs de sang indemnes de MTEV48. Les rรฉsultats de cette รฉtude pilote ont รฉtรฉ par la suite confirmรฉs par de nombreuses รฉtudes et รฉlargis ร dโautres catรฉgories de patients. En 1995, Koster et al., ont pu observer dans une รฉtude cas-tรฉmoins, un risque de TVP deux fois plus รฉlevรฉ chez les patients de groupes non-O(H) par rapport au groupe O(H)49. Ce risque รฉtait multipliรฉ par un facteur quatre quand une mutation du facteur V Leiden se surajoutait50-51. Cette potentialisation du risque de TVP souligne le caractรจre complexe de la MTEV. En effet, la MTEV est une maladie multifactorielle, cโest-ร -dire que, son apparition et son รฉvolution dรฉpendent de facteurs gรฉnรฉtiques, de facteurs environnementaux et de leurs interactions3.
Ces dix derniรจres annรฉes, les approches ยซ pangรฉnomiques ยป, dites GWAS pour Genome Wide Association Study, sont devenues un outil incontournable dans lโidentification de nouveaux facteurs de risque gรฉnรฉtiques de la MTEV. A ce jour, plus dโune dizaine de polymorphismes ont รฉtรฉ rapportรฉs comme associรฉs ร une augmentation du risque de MTEV. Lโeffet de ces variants sur le risque de MTEV est trรจs modรฉrรฉ. Parmi eux, le facteur gรฉnรฉtique le plus ร risque de MTEV est un SNP du gรจne du facteur XI : lโallรจle mineur est associรฉ ร une augmentation de 35% du risque de MTEV (OR=1,35 ; IC95%=1,22-1,34)47. Cette approche a permis de confirmer le rรดle du groupe sanguin ABO(H) dans la MTEV. En effet, une mรฉta-analyse de 12 GWAS a mis en รฉvidence une augmentation du risque de MTEV de 55% pour les groupes non-O(H) par rapport au groupe O (OR=1,55 IC95% (1,48-1,63))52. De plus, le risque attribuable au groupe sanguin non-O(H) dans la MTEV est รฉvaluรฉ ร 30%, soit presque le double du risque attribuable au facteur V Leiden (17%)53. Malgrรฉ ces avancรฉes considรฉrables, lโimplication du groupe sanguin ABO(H) dans le dรฉveloppement de la MTEV est loin dโรชtre totalement rรฉsolue. Lโhypothรจse la plus probable est que le groupe sanguin, en modifiant lโexpression et donc les niveaux dโaction des GTA et B, modifierait le degrรฉ de glycosylation du VWF et modulerait ainsi sa clairance et/ou son clivage par la mรฉtalloprotรฉase ADAMTS1354-55. Plus le VWF serait glycosylรฉ, plus il serait protรฉgรฉ de lโaction de lโADAMTS13 et, par consรฉquent, sa demi-vie dans la circulation serait allongรฉe.
Des analyses de liaison ont montrรฉ que le groupe sanguin agirait directement sur les taux de VWF56. Le groupe sanguin se prรฉsenterait donc comme le dรฉterminant gรฉnรฉtique des taux du VWF. Dโautre part, le VWF transporte et protรจge le facteur VIII (FVIII) de la protรฉolyse, et maintient ainsi stables les taux plasmatiques de ce facteur. Le VWF constitue donc le dรฉterminant principal des taux plasmatiques du FVIII56 dont des taux รฉlevรฉs (>150 %) sont connus pour รชtre un facteur de risque de MTEV. En effet, il a รฉtรฉ montrรฉ quโune augmentation des taux plasmatiques de FVIII multipliait par 5 le risque de survenue de MTEV49-57. Chez les groupes non-O(H) et non- A2, les concentrations de FVIII sont plus รฉlevรฉes par rapport aux groupes O(H) et A2. Les taux les plus รฉlevรฉs ont รฉtรฉ observรฉs dans le groupe AB. Les personnes de groupe O(H) ont des taux de VWF et de FVIII 25 ร 30% moins รฉlevรฉs que les groupes non-O(H)28 ; et les groupes A2 ont des taux comparables aux groupes O(H). Dans une รฉtude conduite chez des individus indemnes de MTEV, Shima et al. ont dรฉmontrรฉ que les porteurs dโune seule copie de lโallรจle O(H) (gรฉnotypes BO et AO), avaient des taux de VWF significativement moins รฉlevรฉs que les porteurs des gรฉnotypes AA, AB et BB58. Par ailleurs, des รฉtudes de jumeaux ont dรฉmontrรฉ que 66% de la variation des taux de VWF serait dโorigine gรฉnรฉtique, et que 30% de cette variation serait expliquรฉe par le locus ABO(H)59.
Des donnรฉes contradictoires suggรฉrant un rรดle du statut sรฉcrรฉteur/non-sรฉcrรฉteur dans la MTEV sont dรฉcrites dans la littรฉrature.
Lโรฉtude prospective menรฉe par Ohira et al. montre que lโassociation entre le groupe sanguin ABO(H) et la MTEV persiste aprรจs ajustement sur les taux de facteurs VIII ou de VWF60. Cependant, lโhypothรจse la plus communรฉment admise dans la littรฉrature est que lโeffet du groupe sanguin ABO(H) sur la MTEV se fait via les variations des taux de VWF (qui dรฉterminent ร leur tour les taux plasmatiques du FVIII). Selon OโDonnell et al., le taux dโantigรจnes H disponibles ร la surface du VWF serait le dรฉterminant principal du taux de VWF plasmatique61. Cette รฉtude rapporte aussi lโexistence dโune large variabilitรฉ du niveau dโexpression des antigรจnes H sur le VWF au sein dโun mรชme groupe sanguin. Cette variabilitรฉ des taux dโantigรจnes H serait due ร une variabilitรฉ des activitรฉs des diffรฉrentes GT intervenant dans les รฉtapes initiales aboutissant ร la synthรจse de cet antigรจne. Au sein du groupe A1, la diffรฉrence dโactivitรฉ GT pourrait รชtre multipliรฉe dโun facteur 3 et induirait une modification du niveau dโexpression de lโantigรจne A sur le VWF. Ces donnรฉes suggรจrent que lโactivitรฉ GT, et donc le niveau de glycosylation du VWF, seraient soumis ร des facteurs de variation extรฉrieurs aux polymorphismes du groupe sanguin ABO(H) 61. Soutenant cette hypothรจse, les porteurs du groupe sanguin gรฉnotypique A1A1 prรฉsenteraient le mรชme risque de MTEV que les porteurs du gรฉnotype A1O malgrรฉ des taux plus รฉlevรฉs de VWF et de FVIII61. Lโensemble de ces donnรฉes suggรจrent que des facteurs diffรฉrents du VWF, pourraient expliquer lโassociation retrouvรฉe entre le groupe sanguin ABO(H) et la MTEV. Lโactivitรฉ GT pourrait moduler dโautres acteurs clรฉs de lโhรฉmostase comme la GpIb plaquettaire et la L-sรฉlectine soluble ou encore lโ๏ก2macroglobuline exprimant lโantigรจne H. Lโactivitรฉ GT pourrait donc รชtre un facteur de risque de MTEV plus pertinent que le groupe ABO(H).
Sรฉlection des cas
Les patients inclus dans notre รฉtude sont issus de la population MARTHA (MARseille THrombosis Association study). La population MARTHA est composรฉe de patients caucasiens, non apparentรฉs (hommes et femmes) ayant prรฉsentรฉ un antรฉcรฉdent documentรฉ de MTEV (TVP et/ou EP) en lโabsence de facteur de risque majeur de MTEV (dรฉficits en inhibiteurs, homozygotie pour le facteur V Leiden ou pour la mutation du facteur II G20210A, SAPL) et ayant consultรฉ au Centre dโExploration des pathologies Hรฉmorragiques et Thrombotiques (CEHT) de lโHรดpital de La Timone ร Marseille entre janvier 1994 et aoรปt 2008.
Un รฉpisode thrombotique รฉtait considรฉrรฉ comme documentรฉ sโil remplissait au moins un des deux critรจres suivants : i) diagnostic par imagerie, cโest-ร -dire par un รฉcho-doppler veineux et/ou phlรฉbographie (TVP) et/ou tomodensitomรฉtrie thoracique et/ou scintigraphie pulmonaire (EP) ii) traitement anticoagulant bien conduit, pour une durรฉe d’au moins 3 mois.
Les patients sans prรฉlรจvement sanguin disponible nโont pas รฉtรฉ inclus dans cette รฉtude.
Sรฉlection des tรฉmoins
Les tรฉmoins ont รฉtรฉ sรฉlectionnรฉs parmi les donneurs de sang qui se sont prรฉsentรฉs ร lโEFS-AM entre fรฉvrier 2015 et dรฉcembre 2015. Au cours de lโentretien de ยซprรฉ-donยป, un mรฉdecin consultant รฉvalue et apprรฉcie avec le donneur les contre-indications potentielles au don du sang (Annexe 1). Les donneurs sรฉlectionnรฉs (hommes et femmes), sans antรฉcรฉdent personnel de maladies cardiovasculaires ni de MTEV รฉtaient รฉligibles pour participer ร notre รฉtude. Seuls les donneurs ayant un prรฉlรจvement sanguin exploitable (quantitรฉ suffisante de sang, conservation correcteโฆ) ont รฉtรฉ retenus.
Recueil des donnรฉes cliniques
Pour les tรฉmoins, le recueil de donnรฉes a eu lieu au cours de lโentretien prรฉalable au don du sang au sein de lโEFS-AM. Le recueil des donnรฉes cliniques des cas a รฉtรฉ effectuรฉ au cours dโune consultation spรฉcialisรฉe par un mรฉdecin du CEHT ร lโaide dโun questionnaire standardisรฉ. Une base de donnรฉes informatique a รฉtรฉ constituรฉe et mise ร jour ร partir de lโensemble des donnรฉes recueillies lors des consultations pour chaque patient, par un des mรฉdecins du CEHT. Lโextraction de ces donnรฉes a permis la sรฉlection des patients inclus dans ce travail, ainsi que la collecte de variables cliniques et biologiques.
Variables cliniques
Variables anthropomรฉtriques
Lโรขge au moment du prรฉlรจvement ayant servi au dosage de lโactivitรฉ GT ainsi que la taille et le poids ont รฉtรฉ recueillis pour les cas et les tรฉmoins. LโIMC a รฉtรฉ calculรฉ selon la formule de Quetelet. La prรฉsence dโun traitement anticoagulant au moment du dosage de lโactivitรฉ GT a รฉtรฉ renseignรฉe chez les cas.
Variables caractรฉrisant la MTEV
Localisation et circonstances de la MTEV
Les รฉpisodes de MTEV ont รฉtรฉ classรฉs selon les localisations de lโรฉpisode thrombotique : TVP isolรฉe des membres infรฉrieur ou supรฉrieur, EP (isolรฉe ou compliquant une TVP), ou TVP dโautre localisation. Ces derniรจres regroupaient les thrombophlรฉbites cรฉrรฉbrales, les thromboses des veines rรฉnales, de la veine cave, des veines jugulaires, des veines mรฉsentรฉriques, rรฉtropรฉritonรฉales ou pelviennes. Les รฉpisodes ont par ailleurs รฉtรฉ classรฉs en ambulatoires ou provoquรฉs. Un รฉpisode รฉtait dit provoquรฉ si une situation ร risque de MTEV รฉtait retrouvรฉe : chirurgie dans les 3 mois prรฉcรฉdant la MTEV, immobilisation de plus de 7 jours, grossesse/post partum et autres situations regroupant les traumatismes, les voyages de longue durรฉe (trajet en voiture > 10 heures, trajet en avion > 5 heures).
Autres variables
Lโรขge au moment de la MTEV, le tabagisme actif et le traitement hormonal chez les femmes au moment de la MTEV (aucun, ลstro-progestatif, progestatif seul, traitement substitutif de la mรฉnopause) ont รฉgalement รฉtรฉ recueillis chez les patients.
Variables biologiques
Pour chaque participant, un prรฉlรจvement de sang a รฉtรฉ effectuรฉ ร la fin de chaque consultation (au CEHT pour les cas et ร lโEFS-AM pour les tรฉmoins). Des tubes citrates (plasmas) et EDTA (ADN) ont รฉtรฉ prรฉlevรฉs. Aprรจs une รฉtape de centrifugation des tubes citrates ร la vitesse de 2500g / minute pendant 10 minutes, le plasma a รฉtรฉ aliquotรฉ, congelรฉ et stockรฉ ร – 80ยฐC. Lโacide dรฉsoxyribonuclรฉique (ADN) gรฉnomique a รฉtรฉ extrait ร partir des รฉchantillons en tubes EDTA.
Mesure des taux plasmatiques de VWF, du FVIII
Les taux plasmatiques de VWF et de FVIII ont รฉtรฉ mesurรฉs ร partir de plasmas citratรฉs congelรฉs, respectivement par une mรฉthode immuno-turbidimรฉtrique (STAยฎ LIATESTยฎ VWF, DiagnosticaStago) et une technique chronomรฉtrique (STAยฎ IMMUNODEF VIII, DiagnosticaStago). Ces mesures ont รฉtรฉ effectuรฉes au sein du Service dโHรฉmatologie Biologique ร lโHรดpital de la Timone selon le mรชme protocole pour lโensemble de la population dโรฉtude.
Mesure de lโactivitรฉ glycosyltransfรฉrase
Le dosage plasmatique de lโactivitรฉ des GTA et B a รฉtรฉ effectuรฉ par le laboratoire de biologie des groupes sanguins (EFS-AM) selon les recommandations dโOโDonnell et al28. Briรจvement, 30๏ญL de plasma sont incubรฉs dans un volume final de 100๏ญL contenant de lโATP (5mM), du MnCl2 (14mM pour GTA et 21mM pour GTB), de lโacide 2-(N-morpholino) ethanesulfonique (MES) 50mM pH 6,5 pour GTA et pH 7 pour GTB, dโun accepteur le 2โ-fucosyllactose (105๏ญM), et dโun oligosaccharide spรฉcifique tritiรฉ (25๏ญM) sous forme dโUDP-[3H]-N-acรฉtylGalactosamine pour lโactivitรฉ GTA et dโUDP-[3H]-Galactose pour lโactivitรฉ GTB. Le mรฉlange rรฉactionnel est incubรฉ ร 37ยฐC pendant 2 heures puis la rรฉaction est arrรชtรฉe par ajout de 400ยตL dโeau. Le produit de synthรจse radiomarquรฉ est purifiรฉ par sรฉlection nรฉgative sur une rรฉsine รฉchangeuse dโanion (AGยฎ1-X8). La radioactivitรฉ produite (tรฉmoin du transfert de lโoligosaccharide spรฉcifique) est mesurรฉe en dรฉsintรฉgration par minute par un compteur de scintillation. La radioactivitรฉ mesurรฉe est proportionnelle ร lโactivitรฉ GT. Les mesures dโactivitรฉ ont รฉtรฉ rรฉalisรฉes en duplicat. Les analyses statistiques portent sur la moyenne de ces deux mesures. A chaque manipulation de dosage des GT, des participants de groupes O(H) ont รฉtรฉ utilisรฉs comme contrรดles nรฉgatifs. Les mesures de radioactivitรฉ observรฉes chez ces individus de groupe O(H) gรฉnรจrent du bruit de fond qui correspond essentiellement ร ยซ une activitรฉ de dรฉgradation ยป. Dans la suite de lโรฉtude, nous parlerons plutรดt dโactivitรฉ de dรฉgradation que de bruit de fond pour dรฉsigner les mesures obtenues chez les porteurs de groupe O(H). Dans la suite du manuscrit, les dosages dโactivitรฉs GT sont reportรฉs en dpm pour 30ยตl.
Gรฉnotypage du groupe sanguin ABO(H)
La dรฉtermination des groupes sanguins des patients a รฉtรฉ obtenue par gรฉnotypage des polymorphismes rs8176719, rs1053878 et rs8176743 du locus ABO. Le gรฉnotypage a รฉtรฉ rรฉalisรฉ par la technologie de courbes de fusion et de sondes dโhybridation sur Lightcycler, (Roche Diagnostics, Indianapolis). La combinaison de ces 3 polymorphismes a permis de dรฉterminer les groupes sanguins selon le Tableau 1. Ces polymorphismes permettent de dรฉfinir 4 haplotypes, nommรฉs allรจles dans la littรฉrature (afin dโรชtre en harmonie, nous les appellerons allรจles bien que ceux-ci soient des haplotypes).
Comparaison des activitรฉs glycosyltransfรฉrases A et B entre les cas et les tรฉmoins
Nous avons ensuite comparรฉ les activitรฉs GT entre cas et tรฉmoins.
Nous avons alors mis en รฉvidence des activitรฉs GTA (14%, p<10-4) et GTB (13%, p=0,0004) plus faible chez les cas que chez les tรฉmoins (Tableau 8). Ces diffรฉrences restaient significatives aprรจs ajustement sur lโรขge au moment du prรฉlรจvement et le sexe (p1<10-4 et p1=0,0004 ; respectivement). Par ailleurs, ces associations restaient significatives aprรจs ajustements additionnels sur les taux de FVIII (p2<10-4), de VWF (p3<10-4) et sur le groupe sanguin (p4<10-4 pour lโactivitรฉ GTA et p4=0,0006 pour lโactivitรฉ GTB). Lorsque nous avons exclu les patients qui ne prenaient pas de traitement antiagrรฉgant ni anticoagulant, les rรฉsultats รฉtaient comparables (p4<10-4 pour lโactivitรฉ GTA et p4= 0,007 pour lโactivitรฉ GTB). Pour ne pas alourdir les rรฉsultats, nous avons choisi de ne pas les prรฉsenter dans ce travail.
N : effectif; moy ยฑ ET : moyenne ยฑ รฉcart-type; dpm : dรฉsintรฉgration par minute; p: valeur brute ; p1: valeur ajustรฉe sur รขge au moment du prรฉlรจvement + sexe + IMC; p2: valeur ajustรฉe sur รขge au moment du prรฉlรจvement รขge + sexe + FVIII ; p3: valeur ajustรฉe sur รขge au moment du prรฉlรจvement + sexe + VWF; p4 : valeur ajustรฉe sur รขge au moment du prรฉlรจvement + sexe + groupe sanguin; p5 : valeur ajustรฉe sur รขge au moment du prรฉlรจvement + sexe + groupe sanguin et prise en compte du facteur dโinteraction entre le groupe ABO(H) et le statut cas- tรฉmoins.
Lโactivitรฉ GTA a รฉtรฉ mesurรฉe chez 105 tรฉmoins et 85 cas de groupe O(H). Cette mesure correspond essentiellement ร une activitรฉ de dรฉgradation du substrat radioactif, les individus de groupe O(H) ne possรฉdant pas dโenzyme fonctionnelle. Cette activitรฉ de dรฉgradation รฉtait diffรฉrente entre les cas et les tรฉmoins (1088 ยฑ 262 dpm/30๏ญl vs 999 ยฑ 1053 dpm/30๏ญl ; p<10-4). Pour tenir compte de cette diffรฉrence, nous avons introduit ร dans notre modรจle un facteur dโinteraction entre le groupe ABO(H) et le statut cas-tรฉmoins. Aprรจs prise en compte de cette diffรฉrence dโactivitรฉ de dรฉgradation, nous avons observรฉ que la diffรฉrence dโacticitรฉ GTA entre cas et tรฉmoins, restait significative (Tableau 8, p5=0,0015). Ces rรฉsultats soutiennent lโexistence dโune association entre lโactivitรฉ GTA et le statut cas-tรฉmoins de la MTEV.
Concernant lโactivitรฉ GTB, nous nโavons pas observรฉ de diffรฉrence dโactivitรฉ entre les cas (N=12) et les tรฉmoins (N=15) de groupe O(H) : 1719 ยฑ 592 vs 1954 ยฑ 455 dpm, p=0,40. Lโintroduction dโun facteur dโinteraction dans le modรจle nโรฉtait donc pas pertinente.
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Table des matiรจres
Introduction
I. La Maladie Thrombo-Embolique Veineuse
I.1. Dรฉfinition
I.2. Epidรฉmiologie
I.3. Physiopathologie
I.4. Facteurs de risque de MTEV
II. Le groupe sanguin ABO(H)
II.1. Dรฉcouverte et dรฉfinition du groupe sanguin ABO(H)
II.2. Rรฉpartition gรฉographique du groupe sanguin ABO(H)
II.3. Le locus ABO(H)
II.4. Synthรจse des antigรจnes ABO(H)
II.5. Expression des antigรจnes ABO(H)
II.6. Gรฉnotype/Phรฉnotype sรฉcrรฉteur
II.7. Dรฉtermination du groupe sanguin ABO(H)
II.8. Groupe sanguin ABO(H) en pathologie
III. Relation maladie thrombo-embolique veineuse et groupe sanguin ABO(H)
Objectif du travail
Matรฉriels et Mรฉthodes
I. Population dโรฉtude
I.1. Sรฉlection des cas
I.2. Sรฉlection des tรฉmoins
II. Recueil des donnรฉes cliniques
II.1. Variables cliniques
II.2. Variables biologiques
II.3. Gรฉnotypage du groupe sanguin ABO(H)
II.4. Dรฉtermination du statut Sรฉcrรฉteur/ non-sรฉcrรฉteur chez les tรฉmoins
II.5. Analyse statistique
Rรฉsultats
Premiรจre partie : Etude cas-tรฉmoins
I. Description de la population
I.1. Caractรฉristiques des cas et des tรฉmoins
I.2. Particularitรฉ de lโรฉtude
I.3. Caractรฉristiques de la MTEV chez les cas
II. Comparaison des taux de VWF et de FVIII entre les cas et tรฉmoins en fonction du groupe sanguin
III. Comparaison des activitรฉs glycosyltransfรฉrases A et B entre les cas et les tรฉmoins
IV. Comparaison des activitรฉs glycosyltransfรฉrases B chez les cas et les tรฉmoins en fonction du groupe sanguin
V. Comparaison des activitรฉs glycosyltransfรฉrases A chez les cas et les tรฉmoins en fonction du groupe sanguin
V.1. Etude de lโactivitรฉ glycosyltransfรฉrase A en fonction du nombre dโallรจles A1 chez les cas et les tรฉmoins
V.2. Comparaison cas-tรฉmoins de lโactivitรฉ glycosyltransfรฉrase A en fonction du nombre dโallรจles A1
Rรฉsultats
Deuxiรจme partie : Etude des marqueurs de la MTEV chez les tรฉmoins
I. Etude de lโassociation entre les activitรฉs glycosyltransfรฉrases A et B et les taux de VWF et FVIII
II. Etude de lโassociation entre le statut Se/se et les marqueurs de la MTEV
II.1. Association entre le statut Se/se et les taux de VIII et de VWF
II.2. Association entre le statut Se/se et les activitรฉs glycosyltransfรฉrases A et B
Discussion
Conclusion
Bibliographie
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