Table des matières
Introduction générale
Chapitre 1 Revue de littérature
1.1 La production de protéines recombinantes
1.1.1 Systèmes de production classiques
1.1.1.1. Les bactéries
1.1.1.2 Les levures
1.1.1.3 Les cellules animales
1.1.1.4 Les oeufs
1.1.2 La moléculture végétale: une alternative efficace pour la production de protéines recombinantes
1.1.2.1 Transfection des cellules végétales
1.1.2.2. Transformation stable, expression transitoire
1.2 La protéolyse, souvent un frein à l’obtention de rendements satisfaisants en moléculture végétale
1.2.1 Instabilité des protéines recombinantes in planta
1.2.2 Sénescence et protéolyse
1.3 Stratégies pour la protection des protéines recombinantes en moléculture végétale
1.3.1 Stabilisation des protéines recombinantes ex planta
1.3.2 Stabilisation des protéines recombinantes in planta
1.3.2.1 Des lignées végétales déficientes en protéases
1.3.2.2 L’expression du transgène dans un tissu ou un organe pauvre en protéases
1.3.2.3 L’adressage intracellulaire des protéines recombinantes
1.3.2.4 La co-expression d’inhibiteurs de protéases compagnons
1.3.3 Downstream processing, rendement et qualité des produits protéiques recombinants
1.3.3.1 La RuBisCO, un contaminant majeur des produits recombinants
1.3.3.1 Interactions jasmonate–salicylate in planta
Chapitre 2 Hypothèses et objectifs de recherche
2.1. Les hypothèses du projet de recherche
2.2 Les objectifs du projet de recherche
2.2.1 Objectifs relatifs à l’âge des feuilles
2.2.2 Objectifs relatifs au métabolisme de défense
Chapitre 3 Protection d’anticorps de mammifères recombinants contre la protéolyse dépendante du développement dans les feuilles du Nicotiana benthamiana
3.1 Brève mise en contexte
3.2 Résumé
3.3 Abstract
3.4 Introduction
3.5 Materials and Methods
3.5.1 Expression constructs and agroinfiltration
3.5.2 Whole-leaf and leaf apoplast proteins
3.5.3 Protease assays
3.5.4 Immunodetections
3.5.5 C5-1 quantification
3.5.6 C5-1 activity
3.5.7 Statistical analyses
3.6 Results
3.6.1 Endogenous proteolytic activities are influenced by leaf age and agroinfiltration
3.6.2 The antibody-stabilizing effect of co-expressed protease inhibitors is leaf age-dependent
3.6.3 SlCYS8-stabilized C5-1 is biologically active
3.6.4 Co-expressed SlCYS8 extends the accumulation phase of C5-1 in leaves
3.7 Discussion
3.8 Acknowledgments
3.9 Supporting information
Chapitre 4 Diversion du protéome foliaire chez Nicotiana benthamiana pour l’enrichissement pré-extraction d’une protéine recombinante exprimée transitoirement
4.1 Mise en contexte
4.1.1 Quelques résultats complémentaires
4.1.1.1 L’effet protecteur de SlCYS8 sur l’anticorps C5-1 est lié à son activité anti-protéasique et à sa présence dans le système de sécrétion cellulaire
4.1.2 En conclusion
4.2 Résumé
4.3 Abstract
4.4 Introduction
4.5 Experimental procedures
4.5.1 Plant tissue sampling and elicitor treatments
4.5.2 Gene constructs and leaf agroinfiltration
4.5.3 Protein extraction, SDS-PAGE and immunoblotting
4.5.4 Mass Spectrometry
4.5.5 Protein identification
4.5.6 Real-time RT PCR
4.5.7 Bacterial counts
4.5.8 Protease assays
4.5.9 C5-1 quantification
4.5.10 Statistical analyses
4.6 Results and discussion
4.6.1 MeJA induces a leaf proteome rebalancing in N. benthamiana
4.6.2 MeJA has little effect on the N. benthamiana–A. tumefaciens interaction
4.6.3 MeJA also has little effect on protease activities in transfected leaves
4.6.4 MeJA treatment increases the accumulation of a transiently expressed recombinant protein 83
4.7 Conclusions
4.8 Acknowledgements
4.9 Supporting information
Chapitre 5 Conclusions et perspectives
5.1. Retour sur les hypothèses
5.1.1 Hypothèse principale 1, sur l’influence du stade de développement des feuilles sur le rendement en anticorps C5-1
5.1.2 Hypothèse principale 2, sur l’influence des sentiers de défense de la plante hôte sur le rendement en anticorps C5-1
5.2. En conclusion
Références
Annexe
Chapitre de livre
