Table des matières
Résumé
Abstract
Table des matières
Liste des tableaux et figures
Liste des abréviations
Remerciements
Avant-propos
Chapitre I : Introduction
I.1. Le testicule, « usine » à spermatozoïdes
I.1.1. Structures tissulaires
I.1.1.1. La capsule testiculaire ou albuginée
I.1.1.2. Espaces interstitiels
I.1.1.3. Les tubes séminifères
I.1.1.4. Innervation et vascularisation
I.1.2. Composition en types cellulaires
I.1.2.1. Cellules germinales et la spermatogenèse
I.1.2.1.1. Spermatogenèse
I.1.2.1.2. Spermiogenèse
I.1.2.2. Les cellules de Sertoli
I.1.2.3. Les cellules de Leydig
I.1.3. Résumé partiel
I.2. L’épididyme, un organe, plusieurs régions, un rôle
I.2.1. Anatomie de l’épididyme
I.2.1.1. Cellules principales
I.2.1.2. Cellules apicales et Narrow
I.2.1.3. Cellules claires
I.2.1.4. Cellules basales
I.2.1.5. Cellules à halo
I.2.2. La lumière du tube épididymaire, un espace immunosupprimé
I.2.3. Un organe avec une diversité de protéines produites
I.2.4. Régulation de l’expression génique dans l’épididyme
I.2.4.1. Facteurs testiculaires lumicrines
I.2.4.2. Facteurs spermatiques
I.2.4.3. Facteurs de croissance
I.2.4.4. Hormones stéroïdiennes androgène et oestrogène
I.2.4.5. Facteurs autres
I.2.4.5.1. La pression
I.2.4.5.2. Variations thermiques
I.2.4.5.3. Petits ARNs
I.2.4.5.4. Sécrétions épididymaires (épididymosomes)
I.2.5. L’épididyme et la maturation des spermatozoïdes
I.2.5.1. Protéines
I.2.5.1.1. Les épididymosomes
I.2.5.1.2. Protéines associées aux épididymosomes et transférées aux spermatozoïdes
I.2.5.2. La phosphorylation du flagelle
I.2.5.3. Les lipides membranaires
I.2.6. Résumé partiel
I.3. La protéine DCXR
I.3.1. Biochimie de la protéine DCXR
I.3.1.1. Homologies interspécifiques de la DCXR
I.3.1.2. Localisation tissulaire de la DCXR
I.3.2. La DCXR, une protéine de type moonlighting (multifonctionnelle)
I.3.2.1. Description des protéines de type moonlighting
I.3.2.2. Rôles liés à son pouvoir enzymatique
I.3.2.2.1. Détoxification
I.3.2.2.2. Métabolisme énergétique (sugar metabolism)
I.3.2.2.3. Mécanisme de régulation de l’expression de la DCXR
I.3.2.3. Rôles non liés au pouvoir enzymatique
I.3.2.3.1. Variation du niveau de DCXR dans les cas de cancer
I.3.2.3.2. Protéine marqueur de la maturation spermatique; rôle dans le processus de fécondation
I.3.2.3.2.a. DCXR sur les spermatozoïdes
I.3.2.3.2.b. DCXR impliqué dans les cas d’infertilité idiopathique.
I.3.3. Résumé partiel
I.4. Hypothèses et objectifs
I.4.1. Hypothèse
I.4.2. Objectifs
I.4.3. Justification du choix des modèles
I.4.3.1. Le modèle bovin
I.4.3.1.1. Possibilité d’avoir une valeur quantitative relative de la fertilité d’un individu mâle. (Caractéristique importante de ce modèle)
I.4.3.1.2. Disponibilité du matériel
I.4.3.1.3. Puissance statistique due à l’hétérogénéité dans les échantillons obtenus
I.4.3.2. Le modèle humain
I.4.3.3. Le modèle murin
Bibliographie
Chapitre II : Dicarbonyl L-xylulose reductase (DCXR), a “moonlighting protein” in the bovine epididymis
II.1 Résumé
II.2 Abstract
II.3 Introduction
II.4 Materials and methods
II.4.1 Tissues and spermatozoa
II.4.2 RNA extraction and bovine DCXR cloning
II.4.3 Quantitative real-time PCR assay
II.4.4 In situ hybridization
II.4.5 DCXR antibody production
II.4.6 Other antibodies used in this study
II.4.7 Immunohistochemistry
II.4.8 Epididymal vesicles (epididymosomes) isolation
II.4.9 Proteolytic treatment of epididymosomes, fluid, and recombinant proteins
II.4.10 Epididymal tissues and spermatozoa sub cellular fractionation
II.5 Results
II.6 Discussion
II.7 Supplemental data
II.8 Acknowledgements
II.9 References
Chapitre III : L’implication de la DCXR dans le mécanisme énergétique dans l’épididyme bovin
III.1. Résumé
III.2. Introduction
III.3. Matériel et méthode
III.3.1. Tissus et spermatozoïdes
III.3.2. Préparation du fluide et des spermatozoïdes
III.3.3. Fractionnement cellulaire
III.3.4. Fractionnement des spermatozoïdes
III.3.5. Production de la protéine recombinante
III.3.6. Mesure de l’activité enzymatique
III.3.7. Extraction ARN et clonage des gènes
III.3.8. PCR quantitative en temps réel
III.4. Résultats
III.5. Discussion
III.6. Références
Chapitre IV : Rapports sur l’étude de l’importance de la DCXR dans la fertilité et de sa capacité de liaison à la zone pellucide.
IV.1. Identification et caractérisation des domaines de la protéine DCXR chez l’humain
IV.1.1. Mise en contexte et exposition des objectifs du projet
IV.1.2. Matériel et méthode
IV.1.2.1. Production des protéines recombinantes par Saccaromyces. pombe (S. pombe)
IV.1.2.2. Mesure de l’activité enzymatique
IV.1.2.3. Extraction de protéine de la zone pellucide (ZP) bovine
IV.1.2.4. Biotinylation des protéines
IV.1.2.5. Interaction spermatozoïdes/ovocytes dénudés en présence de protéine recombinante.
IV.1.3. Résultats et discussions
IV.2. Invalidation génique de la DCXR murine
IV.2.1. Mise en contexte et exposition des objectifs du projet
IV.2.2. Matériel et méthode
IV.2.2.1. Production des cellules ES transfectées
IV.2.2.2. Extraction d’ADN de cellules ES transfectées
IV.2.2.3. Génération des souris
IV.2.2.4. Extraction d’ADN génomique de queue de souris
IV.2.2.5. Protocole de Southern blot
IV.2.3. Résultats et difficultés rencontrées
IV.3. Références
Chapitre V : Discussions et perspectives
V.1. La DCXR chez les différentes espèces
V.1.1. Le Modèle KO
V.1.2. Analyse de la protéine par induction de mutations
V.1.3. Le modèle bovin
V.1.3.1. DCXR chez le bovin
V.1.3.2. Implications de son rôle énergétique dans l’épididyme et sur les spermatozoïdes
Conclusion
Bibliographie
