Les allergènes du lait de vache

Table des matières

Introduction
Rappel bibliographique
1. Allergie alimentaire
1.1Allergie aux protéines du lait de vache
1.2Les allergènes du lait de vache
1.1.1La β-lactoglobuline
1.2L’α-lactalbumine
1.3Mécanismes des allergies alimentaires
2. Lait de chèvre
3. Les probiotiques
3.1Critères de sélection des souches probiotiques
3.2Bactéries lactiques
3.2.1Lactobacilles
3.2.2Entérocoques
4. Critères de sélection des ferments lactiques
4.1Critères de sécurité
4.2Aptitudes technologiques
4.2.1Aptitude acidifiante
4.2.2Aptitude protéolytique
4.2.3Activité antimicrobienne
5. Les bactériocines
5.1Classification des bactériocines
5.1.1Bactériocine classe I
5.1.2Bactériocine de classe II
5.1.3Bactériocine de classe III
5.1.4Bactériocine de classe IV
6. Probiotiques et mécanisme de l’immunité
6.1Le rôle de la microflore intestinale
7. Effets bénéfiques des probiotiques sur la santé
8. Prévention
8.1Eviction de l’allergène
8.2La prévention des maladies atopiques et allergiques
Matériels et Méthodes
1. Echantillons
2. Isolement et purification des souches de bactéries lactiques
3. Identification phénotypique des souches
3.1Tests Biochimiques
4. Identification moléculaire (identification phénotypique
4.1PCR spécifique du genre Enterococcus
4.2Amplification et séquençage de l’ADNr 16S
4.3RAPD: RandomAmplifiedPolymorphic ADN
5. Profil fermentaire des bactéries
5.1Mesure de la production d’acide lactique
5.2Mesure de la cinétique de variation du pH
5.3Cinétique de croissance des bactéries
6. Caractérisation biochimique des laits fermentés
6.1Mise en évidence de l’activité protéolytique des bactéries lactiques
6.1.1Dosage des fonctions α-NH2libérées
6.1.2Test sur milieu MRS lait
6.1.3Test sur milieu lait écrémé UHT
6.1.4Activité protéolytique sur le caséinate de sodium et le lactosérum dénaturé
6.2Facteurs influençant l’activité protéolytique
6.2.1Effet du pH
6.2.2Effet de la température
6.2.3Effet des inhibiteurs
7. Etude de l’activité antibactérienne
7.1Les souches utilisées
7.2Méthode de diffusion en puits pour la détection de l’activité antibactérienne
7.3Facteurs influant l’activité antimicrobienne
7.3.1Effet des enzymes
7.3.2Effet du pH
7.3.3Effet de la température
378. Spectre d’activité antibactérienne vis-à-vis deux souches indicatrices
379. Caractérisation des entérocines par PCR
3710. Test d’activité contre les bactéries pathogènes
11. Mise en évidence in vitro de quelques propriétés probiotiques
11.1Résistance aux conditions gastro-intestinales simulées
11.2Test d’hémolyse
11.3Tests de sensibilité aux antibiotiques
11.4Détection des facteurs de virulence
12. Etude de la modulation de la réponse allergénique chez les souris Balb/c
12.1Echantillons
12.2Animaux
12.3Immunisation des souris
12.3.1Répartition des animaux
12.4Adjuvant
12.4.1Hydroxyde d’aluminium
12.5Protocole d’immunisation
12.6Prélèvement sanguin
12.7Dénombrement des bactéries lactiques au niveau de l’intestin et des selles des souris
12.8Dosage des immunoglobulines sériques
12.8.1Evaluation du degré de sensibilisation des animaux
12.8.1.1Principe général de la méthode ELISA
12.8.1.2Mode opératoire
12.9Test de provocation ex vivo (intestin isolé) en Chambre de Ussing
12.9.1Principe de la technique
12.9.2Montage de l’intestin de souris en chambre de Ussing
12.10Etude histologique
12.10.1La fixation
12.10.2Inclusion à la paraffine
12.10.3La déshydratation
12.10.4Imprégnation par la paraffine
12.10.5Microtomisation et étalement des coupes
12.10.6Coloration
12.10.6.1Déparaffinage
12.10.6.2Réhydratation
12.10.6.3Coloration à l’hémalun-éosine
12.10.7Mesure de la hauteur villositaire
14. Méthodes statistiques
Résultats
1. Souche bactériennes
1.1Isolement et purification des souches de bactéries lactiques
1.1.1Identification phénotypique des souches
1.1.1.1Tests Biochimiques
1.1.1.2Profil fermentaire
1.1.2Identification moléculaire (identification phénotypique
1.1.2.1PCR du gène spécifique codant pour le genre Enterococcus
1.1.2.2Identification par PCR 16S
1.1.2.3Random Amplified Polymorphic ADN (RAPD
1.2Profil fermentaire des bactéries
1.2.1Mesure de la production d’acide lactique
1.2.2Mesure de la cinétique de variation du pH
1.2.3Cinétique de croissance des bactéries
2.1Caractérisation biochimique des laits fermentés
2.1.1Mise en évidence de l’activité protéolytique des bactéries lactiques
2.1.1.1Dosage des fonctions α-NH2libérées (DOI et al., 1981
2.1.1.2Etude de l’activité protéolytique
2.1.1.2.1Test sur milieu lait écrémé UHT
2.1.1.2.2Activité protéolytique sur le caséinate de sodium et le lactosérum dénaturé
2.1.1.2.3Facteurs influençant l’activité protéolytique
2.2. Etude de l’activité antibactérienne
732.2.1. Méthode de diffusion en puits pour la détection de l’activité antibactérienne
2.2.1.1. Action des enzymes digestives
2.2.1.2. Effet de la température
732.2.1.3. Effet du pH
2.2.2. Spectre d’activité antibactérienne vis-à-vis deux souches indicatrices
2.2.3. Le spectre d’activité antimicrobienne de différentes souches testées vis-à-vis des bactéries pathogènes
2.2.4. Caractérisation des entérocines par PCR
2.3. Mise en évidence in vitro de quelques propriétés probiotiques
2.3.1. Résistance aux conditions gastro-intestinales simulées
2.3.1.1. Test de résistance des bactéries lactiques à pH acide
2.3.1.2. Résistance aux sels biliaires
2.3.2. Test d’hémolyse
2.3.3. Résistance aux antibiotiques
2.3.4. Gène de virulence
3. Etude de la modulation de la r駱onse allerg駭ique chez les souris Balb/c
3.1. Titres sériques en anticorps anti β-Lg et anti α-Lac
3.1.1. Titre des anticorps IgG sériques anti β-Lg et anti α-Lac
3.1.2. Titre des anticorps IgE sériques anti –β-Lg
3.1.3. Titre des anticorps IgG1sériques anti β-Lg
3.1.4. Titre des anticorps IgG2a sériques anti –β-Lg
3.1.5. Analyse de la réponse immune des souris à partir du rapport IgG1/IgG2a
3.2. Dénombrement des bactéries lactiques au niveau du chyme intestinal et des selles souris
3.3. Test de provocation ex vivo en Chambre de Ussing
3.3.1. Effets de β-Lg sur l’Isc
3.3.2. Effet de l’ovalbumine sur l’Isc
3.3.3. Effets de la β-Lg sur la conductance
3.3.4. Effet du furosémide
3.4. Histologie de la muqueuse intestinale des souris expérimentales
3.4.1. Aspect des muqueuses intestinales des souris
3.4.2. Effet des bactéries lactiques sur la hauteur des villosités intestinales
Discussion
Conclusion
Références bibliographiques