Les agents pathogènes fongiques

Table des matières

GLOSSAIRE
PRÉSENTATION DU GEIHP
1. Le laboratoire
2. L’organisation
3. La thématique de recherche
I. INTRODUCTION
II. REVUE BIBLIOGRAPHIQUE
1. Scedosporium apiospermum
1.1. Taxonomie
1.1.1. Caractères culturaux
1.1.2. Morphologie macroscopique
1.1.3. Morphologie microscopique
1.1.4. Habitat
1.2. Pouvoir pathogène
1.2.1. Pathologies
a) Inoculation suite à un traumatisme
b) La dissémination invasive
c) La colonisation des cavités chez les patients atteints de mucoviscidose
1.2.2. Facteurs de virulence
1.2.3. Diagnostic
1.2.4. Thérapeutique
2. Les catalases
2.1. Les catalases typiques dites monofonctionnelles.
2.2. Les catalases-peroxydases
2.3. Les catalases non-héminiques dites à manganèse
III. MATÉRIEL ET MÉTHODES
1. Matériel biologique
1.1. Souche utilisée
1.2. Entretien du champignon
1.3. Culture en milieu liquide
1.4. Extraction des constituants cellulaires
2. Fractionnement par chromatographie
2.1. Chromatographie échangeuse d’anions (CEA)
2.2. Chromatographie d’Interactions Hydrophobes
2.3. Chromatographie de Gel Filtration
2.4. Analyses électrophorétiques
2.4.1. Migration dans un gel de polyacrylamide
2.4.2. Coloration au Bleu de Coomassie
2.4.3. Coloration à l’argent
2.4.4. Western Blot
2.4.5. Immunodétection sur membrane
3. Recherche de l’activité catalasique
3.1. Par production d’oxygène
3.2. Coloration négative de Woodbury et Coll
4. Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay (ELISA)
5. Production d’anticorps monoclonaux
5.1. Immunisation des souris
5.2. Amplification du myélocyte P3X63 Ag8
5.3. Préparation et dépôt des macrophages
5.4. Récupération des splénocytes
5.5. Récupération des P3X63 Ag8
5.6. Hybridation somatique (Fusion)
IV. RÉSULTATS
1. Analyse de l’extrait fongique de Scedosporium apiospermum
2. Purification de la catalase A2.
2.1. Purification partielle par DEAE
2.2. Purification de la catalase A2
3. Immunisation des souris
3.1. Contrôle d’immunisation des souris
3.2. Réactivité des IS en Western-Blot
4. Fusion et clonage
4.1. Rendement des fusions
4.2. Criblage primaire
4.3. Criblage secondaire
4.4. Clonage
4.5. Immunoréactivité sur membrane
V. DISCUSSION
CONCLUSION ET PERSPECTIVES
ANNEXES
BIBLIOGRAPHIE
TABLE DES ILLUSTRATIONS
TABLE DES TABLEAUX
TABLE DES ANNEXES