Le syndrome de Leigh

Table des matières

INTRODUCTION
CHAPITRE 1  PROBLÉMATIQUE EN LIEN AVEC LA MALADIE 
1.1. La population du Saguenay-Lac-Saint-Jean
1.2. Le syndrome de Leigh
1.2.1. Causes génétiques du syndrome de Leigh
1.3. Syndrome de Leigh type Canadien-Français
1.3.1. Manifestations cliniques
1.3.2. Différences entre le syndrome de Leigh classique et le type CanadienFrançais
1.4. Lacytochrome c oxydase
1.5. Principe de production d’énergie
1.5.1. La voie aérobique
1.5.2. La voie anaérobique
1.6. Crise d’acidose métabolique
1.7. Traitements actuels
1.8. Le syndrome de Leigh type Canadien-Français : une maladie génétique
1.8.1. Identification du gène défectueux
1.8.2. Rôle du gène Leucine-rich pentatricopeptide repeat containing (LRPPRQ
CHAPITRE 2  MISE EN CONTEXTE DE L’ÉTUDE 
2.1. Étude comparative du patron d’expression de fibroblastes d’individus atteints du syndrome de Leigh type Canadien-Français et de témoins
2.2. NDUFA4L2 : Un gène différemment exprimé dans les fibroblastes de patients atteints du syndrome de Leigh type Canadien-Français
2.3. La voie de l’hypoxie cellulaire
2.3.1. Principe général
2.3.2. Mécanisme de l’hypoxie
2.3.3. Gènes impliqués dans la réponse à l’hypoxie
2.3.3.1. Gènes régulant le système vasculaire et l’érythropoïèse
2.3.3.2. Gènes régulant le métabolisme énergétique
2.3.4. Pertinence d’étudier la voie de I’hypoxie dans le contexte du syndrome de Leigh type Canadien-Français
2.3.5. Induction de l’hypoxie par voie chimique
HYPOTHÈSE
OBJECTIFS
CHAPITRE 3 MATÉRIEL ET MÉTHODES 
3.1. Principe général de l’étude
3.2. Culture des lignées cellulaires
3.3. Simulation de la condition d’hypoxie ;
3.4. Quantification des protéines
3.4.1. Préparation des échantillons
3.4.1.1. Extraction des protéines
3.4.1.2. Quantification des protéines par spectrophotométrie
3.5. Mesure de la nécrose cellulaire
3.5.1. Principe de la mesure
3.5.2. Démarche expérimentale
3.6. Mesure de l’expression génique
3.6.1. Culture cellulaire pour les essais
3.6.2. Extraction de l’ARN messager
3.6.3. Transcription inverse
3.6.4. Réaction de PCR en temps réel
3.7. Analyses statistiques
CHAPITRE 4 RÉSULTATS 
4.1. Détermination de la dose de chlorure de cobalt et de sa toxicité
4.2. Mesure de l’expression des gènes de la voie de l’hypoxie
4.2.1. Résultat du traitement sur l’expression du gène NADH dehydrogénase (ubiquinone) 1 alpha subcomplex, 4-like 2
4.2.2. Résultat du traitement sur l’expression du gène hypoxia-inductible factor 1-a
4.2.3. Résultat du traitement sur l’expression du gène cytochrome c oxydase subunit IV isoform 2
4.2.4. Résultat du traitement sur l’expression du gènepyruvate déshydrogénase kinase 1
CHAPITRE 5  DISCUSSION 
5.1. Réduction de la cytotoxicité en fonction de la dose de chlorure de cobalt
5.2. Effet de l’hypoxie sur l’expression des gènes de la voie de l’hypoxie
5.2.1. Variation de l’expression de NADH dehydrogénase (ubiquinone) 1 alpha subcomplex, 4-like 2 selon les patients
5.2.2. Stabilisation de la sous-unité alpha en hypoxie
5.2.3. Cytochrome c oxydase isoforme 2
5.2.4. Pyruvate déshydrogénase kinase 1
5.3. Limites de cette étude
5.4. Études d’expression par puces à ADN
CONCLUSION