Fibrine Riche en Plaquette

Table des matières

LISTE DES ILLUSTRATIONS
LISTE DES ABREVIATIONS
INTRODUCTION
Partie I : Les thérapeutiques régénératives dans l’espèce équine : étude bibliographique des concentrés plaquettaires et particulièrement de la Fibrine Riche en Plaquette ainsi que des Cellules Souches Mésenchymateuses
I-Définitions
1-Fibrine et inflammation
2-Les cytokines
II-Fibrine Riche en Plaquette (« Platelet rich fibrin » ou PRF)
1-Principes généraux de formation des concentrés plaquettaires
A-Historique des concentrés plaquettaires
B-Protocole de réalisation des PRP
C-Composition et usage des PRP
2-Un concentré plaquettaire original : le PRF ou Fibrine Riche en Plaquette
3-Importance de la centrifugation
4-Une composition originale en fibrine et en glycosaminoglycane
5-Structure et propriétés mécaniques des membranes de PRF
6-Une composition originale en plaquettes, cytokines et leucocytes
7-Capacités de cicatrisation du PRF
8-Applications cliniques
III-Les Cellules Souches Mésenchymateuses (CSM)
1-Définitions
2-Essais cliniques chez le cheval
A-Réparation osseuse et cartilagineuse
B-Réparations tendineuses
3-Mode de culture
A- Les CSM dérivées de moelle osseuse
B- Les CSM dérivées du tissu adipeux
4-Mode de réimplantation
IV- Notion de « Scaffold »
Partie II : Evaluation expérimentale de la migration de Cellule Souche Mésenchymateuse équine au sein de Fibrine Riche en Plaquette
I-Récolte des CSM
II- Mise en culture des CSM
III- Réalisation du PRF
IV- Mise en culture d’une suspension de CSM avec du PRF
1-Protocole général
2-Mise en culture de CSM (quantité= 30×10^4 cellules) et du PRF avec récolte à J3, J8 et J15
4-Recoupe des échantillons congelés à J3, J8 et J15 et lecture de lame sous microscopie à fluorescence
5-Mise en culture des CSM (quantité= 30×10^4 cellules) et du PRF recoupé avec récolte à J5
V-Discussion
1-Protocole
A-Qualité des PRF
B-Récolte des CSM
C-Paramètres fixés pour la culture de CSM au sein des puits contenant du PRF
2-Interprétation des résultats
A-Qualité des observations
B-Migration des CSM dans la fibrine et ses conséquences
C-Coloration et marquage des CSM
D-Perspectives d’utilisation
CONCLUSION
ANNEXES
Annexe 1 : Liste des différents PRP utilisables dans le commerce d’après Smets et al. 2012
Annexe 2 : Protocole de changement de milieu
Annexe 3 : Protocole de réensemencement des CSM avec trypsination
Annexe 4 : Protocole de coloration des puits de p6 au Giemsa
Annexe 5 : Protocole de coloration des lames au DAPI et à la Rhodamine
Annexe 6 : Poster présenté au congrès annuel du Collège Européen de Chirurgie
BIBLIOGRAPHIE