Conjugaison de la streptavidine (SAV)

Table des matières

Introduction générale
Chapitre 1 : Notions préliminaires  
1.1 Diffusion de récepteurs synaptiques à la membrane de neurones
1.1.1 L’équilibre dynamique de la synapse
1.1.2 Sonder la mobilité de protéines
1.1.3 Stimulation neuronale et effet sur les propriétés de diffusion des récepteurs
1.2 Marquage de récepteurs uniques et imagerie des synapses
1.2.1 Imagerie de synapses à travers l’accumulation de protéines fluorescentes
1.2.2 Stratégies pour imager des récepteurs uniques
1.2.3 Utilisation de protéines hameçons et de cibles génétiquement modifiées pour lier spécifiquement la sonde à la cible
1.3 Biofonctionnalisation de nanocristaux fluorescents
1.3.1 Propriétés optiques et cristallines des QDs
1.3.2 Enrobage des QDs avec des molécules hydrophiles
1.3.3 Conjugaison de protéines hameçons pour marquer des récepteurs synaptiques
1.4 Objectifs du projet
Chapitre 2: Suivi de récepteurs synaptiques uniques
2.1 Matériel et méthodes
2.1.1 Transfert de gènes sur modèle de neurones en culture
2.1.2 Marquage des récepteurs avec des QDs fonctionnalisés
2.1.3 Imagerie
2.1.4 Reconstitution hyper-résolutive des trajectoires et identification des synapses
2.2 Analyse des résultats
2.2.1 Quantification du coefficient de diffusion et de la résidence synaptique
2.2.2 Comparaison de l’utilisation de QDs-SAV vs QDs-AB en condition contrôle
2.2.3 Effet de l’application d’un protocole de stimulation neuronale sur les dynamiques des récepteurs
2.3 Discussion sur le suivi de récepteurs synaptiques
2.3.1 Comparaison QDs-SAV et QDs-AB
2.3.2 Effet de la stimulation neuronale sur les dynamiques des récepteurs
2.3.3 Combiner des méthodes hyper-résolutives pour les trajectoires des récepteurs et la localisation des synapses
Chapitre 3: Biofonctionnalisation de points quantiques  
3.1 Matériel et méthodes
3.1.1 Échanges de ligands
3.1.2 Conjugaison de la streptavidine (SAV)
3.1.3 Électrophorèse sur gel d’agarose
3.1.4 Marquage des cellules avec les QDs
3.2 Analyse des résultats
3.2.1 Biofonctionnalisation de QDs DHLA et PEG-DHLA
3.2.2 Biofonctionnalisation de QDs avec des peptides
3.3.3 Marquage d’échantillons biologiques
3.3 Discussion sur la biofonctionnalisation de QDs
3.3.1 Problème de spécificité des petites sondes fonctionnalisées pour marquer des neurones
3.3.2 Retour sur les techniques de biofonctionnalisation abordées
Conclusion générale