PRINCIPES TOXIQUES DE L’ECORCE DE TIGE DE Pittosporum verticillatum (PITTOSPORACEAE)

USAGES TRADITIONNELS

Les représentants du genre Pittosporum sont largement utilisés en médecine traditionnelle. Ainsi:
-Pittosporum senacia est utilisée par les villageois pour soigner les piqures d’araignées venimeuses (BOITEAU, 1986 ; RABESA, 1986 ; PERNET, 1957) ;
-Pittosporum verticillatum est utilisée pour soigner les ballonnements abdominaux et les palpitations cardiaques (BOITEAU, 1986 ; RABESA, 1986) ;
-Pittosporum ochrosiaefolium donne une infusion de tige qui sert à calmer le maux de ventre ; l’infusion de feuilles sert à soigner la blennorragie et les feuilles mâchées sont des antidotes des piqures d’araignées venimeuses (BOITEAU, 1986 ; RABESA, 1986 ; PERNET, 1957).

Distribution géographique et lieu de récolte

L’espèce verticillatum est rencontrée à l’Est de Madagascar. On peut aussi la trouver dans le nord-est et le sud-est de l’Île (figure n°2). Nous avons récolté la plante dans la région de Mandraka en juillet 2013, période où la plante était au stade végétatif.
Préparation et conservation du matériel végétal L’écorce de tige constitue le matériel d’étude. Les écorces sont détachées de la tige et séchées à l’air libre pendant quelques semaines. Elle est broyée à l’aide d’un broyeur BLENDER Robot Coupe(GT500). Après tamisage, la poudre fine obtenue constitue notre matériel de départ. Elle est conservée à la température ambiante dans des bocaux hermétiques.

Extraction à froid

La poudre végétale est délayée dans le solvant d’extraction (eau distillée ou mélange hydroéthanolique 75%) selon le rapport 1/10(p/v). Le mélange est soumis à une agitation magnétique pendant 3h à la température ambiante, puis laissé macérer à +4°C pendant une nuit. Le macérat obtenu est filtré sur 4 épaisseurs de gaze. Le filtrat est ensuite centrifugé à 16000×g pendant 15min à l’aide d’une centrifugeuse JOUAN (modèle TH 12). Le culot est éliminé, alors que le volume du surnageant est réduit jusqu’au rapport 1/1(1ml pour 1g de matériel de départ) par évaporation au moyen d’un évaporateur rotatif (paragraphe 2.2.3.p. 13).

Leucoanthocyanes

Pour détecter la présence de leucoanthocyanes, le test de BATE-SMITH est appliqué. Du HCl12 N de volume 0,5ml est additionné dans le 3éme tube qui contient la solution hydroéthanolique 80%, puis le mélange est placé dans un bain-marie à 100°C pendant 30min. Après refroidissement, l’apparition d’une coloration rouge violacé indique la présence de leucoanthocyanes.

ANALYSE DES EXTRAITS PAR CHROMATOGRAPHIE SUR COUCHE MINCE

L’évolution de l’homogénéité des différents extraits au cours de la purification est montrée sur le chromatogramme de la figure 4(p. 19). Les différentes bandes, après avoir été observées à la lumière UV de longueurs d’ondes 254nm et 366nm, ont été révélées par le réactif à la vanilline sulfurique. L’extrait brut comporte 8 bandes majeures revelables, alors que l’extrait E3 n’en comporte que 3. La purification a donc permis d’éliminer 5 bandes majeures.

Description des symptômes

L’injection de l’extrait E3 par voie ip de la dose létale de 214 mg/kg entraine chez la souris les symptômes suivants :
 juste après l’administration, la queue de l’animal se dresse perpendiculairement à son corps et son abdomen s’étire ;
 l’activité motrice diminue petit à petit 10 min après l’injection et une incoordination des membres est observée au cours de ses rares déplacements. En même temps une hyperhémie des oreilles est notée ;
 les pattes postérieures et les pattes antérieures montrent une paralysie flasque 15 min après l’injection ;
 une ataxie et une exophtalmie s’installent. Une convulsion tonique apparait avant la mort de l’animal au bout de 30 min.

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Table des matières

INTRODUCTION GENERALE
SYNTHESE BIBLIOGRAPHIQUE
1-DESCRIPTION BOTANIQUE DE Pittosporum
2- USAGES TRADITIONNELS
3- PITTOSPORUM ETUDIEES AU LABASM
ETUDE CHIMIQUE
1-INTRODUCTION
2-MATERIELS ET METHODES
2.1 MATERIELS
2.1.1 Matériel végétal
2.1.1.1 Classification
2.1.1.2 Description botanique
2.1.1.3 Distribution géographique et lieu de récolte
2.1.1.4 Préparation et conservation du matériel végétal
2.1.2 Les produits chimiques
2.2-METHODES
2.2.1 Méthodes d’extraction
2.2.1.1 Extraction à froid
2.2.1.2 Extraction à chaud
2.2.2 Méthodes de purification
2.2.2.1 Précipitation par l’éthanol 50%
2.2.2.2 Traitement par l’acétate neutre de plomb
2.2.2.3 Dialyse
2.2.2.4 Précipitation par l’acétone
2.2.2.5. Précipitation par le n-butanol
2.2.3Méthode de concentration
2.2.4 Méthode d’analyse
2.2.4.1 Chromatographie sur couche mince
2.2.4.2 Méthodes de criblage phytochimique
2.2.4.2.1 Préparation des extraits
2.2.4.2.1Les alcaloïdes
2.2.4.2.2Désoxyoses
2.2.4.2.3 Flavonoïdes: Test de WILSTÄTTER (test à la cyanidine)
2.2.4.2.4 Leucoanthocyanes
2.2.4.2.5Stéroïdes,triterpènes et stérols insaturés
2.2.4.2.6 Saponines
2.2.5 Calcul du rendement
3-RESULTATS
3.1 EXTRACTION
3.1.1Extraction à froid
3.1.1.1 Extraction aqueuse
3.1.1.2 Extraction hydroéthanolique
3.1.2 Extraction à chaud
3.1.2.1 Extraction aqueuse
3.1.2.2 Extraction hydroéthanolique
3.2 PURIFICATION
3.2.1 Méthodes retenues dans le protocole de purification
3.2.1.1Précipitation par l’éthanol 50%
3.2.1.2 Dialyse
3.2.1.3 Fractionnement par le n-butanol
3.2.2 Méthodes testées mais non retenues dans le procédé de la purification
3.2.2.1 Précipitation par l’acétate neutre de plomb
3.2.2.2 Précipitation par l’acétone
3.3 ANALYSE DES EXTRAITS PAR CHROMATOGRAPHIE SUR COUCHE MINCE
3.4 RENDEMENTS
3.5 PROPRIETES PHYSICO-CHIMIQUES DES PRINCIPES TOXIQUES
3.6 NATURE CHIMIQUE
DISCUSSION ET CONCLUSIONS
ETUDE TOXICOLOGIQUE
1 INTRODUCTION
2 MATERIELS
2.1 LES ANIMAUX D’EXPERIMENTATION
2.1.1 Les souris
2.1.2 Les têtards de grenouille
2.1.3 Les larves de moustique
2.1.4 Les alevins de poissons
2.1.5 Les plantes d’expérimentation
2.1.6 Les souches microbiennes utilisées comme germes-tests
3 METHODES
3.1 METHODES D’ETUDE DES EFFETS SUR LES ANNIMAUX
3.1.1 Les animaux à sang chaud
3.1.1.1 Estimation de la toxicité des extraits
3.1.1.2 Détermination de la DL50 (24h)
3.1.2 Test hémolytique
3.1.2.1 Principe
3.1.2.2. Mode opératoire
3.1.3 Tests sur les animaux à sang froid
3.1.3.1 Principe
3.1.3.2. Mode opératoire
3.1.3.3. Test sur les alevins de carpe
3.1.3.4 Test sur les têtards de grenouille
3.1.3.5 Test sur larves de moustique
3.1.4 Méthodes d’étude sur des effets sur les végétaux
3.1.4.1 Méthodes d’étude des effets sur le pouvoir germinatif des graines
3.1.4.2 Test sur la croissance des jeunes plantules
3.1.4.3 Méthodes d’étude des effets sur le développement des bourgeons axillaires
3.1.5 Méthodes d’étude des effets sur la croissance des micro-organismes
3.1.5.1 Stérilisation
3.1.5.2 Étude de l’activité antimicrobienne
4-RESULTATS
4.1 EFFETS DE L’EXTRAIT SUR LES ANIMAUX
4.1.1 EFFET SUR LES ANIMAUX A SANG CHAUD
4.1.1.1 Effets sur la souris
4.1.1.2 Effet des extraits sur les hématies de mouton
4.1.2. Effets de l’extrait brut sur les animaux à sang froid
4.1.2.1. Effet de l’extrait brut sur les alevins de carpe
4.1.2.2. Effets sur les têtards de grenouille
4.1.2.3. Effets sur les larves de moustique
4.2. EFFETS DES EXTRAITS SUR LES VEGETAUX
4.2.1. Effet de l’extrait brut sur la germination des graines
4.2.2Effets de l’extrait brut sur la croissance des jeunes plantules
4.2.3 Effet des extraits sur la levée de dominance apicale
4.3. EFFETS DE L’EXTRAIT BRUT ET L’EXTRAIT PUR SUR LES MICROORGANISMES
DISCUSSION ET CONCLUSIONS
CONCLUSION GENERALE ET PERSPECTIVES
REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES