Soutenance mémoire
Préparation de l’extrait hydroalcoolique de Cucumis sativus (EHA)
La préparation a été réalisée en quatre étapes successives à savoir l’extraction proprement dite, la filtration, l’évaporation et la lyophilisation.
Extraction
50g de poudre de fruits de Cucumis sativus ont été macérés à chaud dans un Erlen Meyer de 1litre contenant de l’éthanol à 80% pendant une heure. Cette extraction a été faite dans un bain thermostaté réglé à 70°C.
Filtration sous vide
Le macéré a été par la suite soumis à une filtration sous vide pour séparer le résidu de l’extrait hydroalcoolique (EHA).
Evaporation sous vide
L’extrait hydroalcoolique total a été évaporé sous pression réduite à l’aide d’un Rotavapor (de type Büchi B-490 et R-200).
Lyophilisation
Compte tenu du résidu d’eau contenu dans l’extrait total, la lyophilisation a été effectuée. Cela a nécessité une congélation du résidu suivie d’une lyophilisation pendant 48 heures. Pour obtenir un extrait bien sec, l’extrait a été placé dans un dessiccateur.
PARTIE BIOLOGIQUE
Animaux d’expérience
Des rats de race Wistar, mâles et pesant de 150 à 200g ont été utilisés pour la détermination :
-du volume,
-du pH,
-et de la concentration urinaire en Na+ , K+ et en Cl- (BASU et coll., 2006).
Ces animaux proviennent de l’Animalerie du Laboratoire PHARMACODYNAMIE de la Faculté des Sciences d’ANTANANARIVO. Les animaux ont été soumis à une expérience de sélection cinq jours auparavant en ne recevant que de l’eau. Ils ont été mis à jeun de nourriture et de l’eau 18 heures avant ce test et cette sélection a été réalisée avec une solution de NaCl à 9‰. Les animaux qui ont éliminé 20 à 40% du volume administré ont été sélectionnés pour tous les tests. Les rats ont été aussi mis à jeun de nourriture et de l’eau 18 heures avant le test proprement dit (LIPSCHITZ et coll., 1943). Ces animaux utilisés ont été répartis en 7lots de10 rats.
Expérimentation
Administration des produits
Pour tous les tests, l’administration des produits testés a été faite par voie orale. Juste avant de donner les produits, tous les animaux d’expérience ont reçu une surcharge hydrosaline (solution de NaCl à 9‰). Pour tous les produits utilisés, l’eau distillée a été utilisée comme véhicule. Le lot témoin n’a reçu que cette solution physiologique (NaCl à 9‰) à raison de 50 ml/kg alors que pour les cinq lots traités avec l’EHA, les animaux ont reçu différentes doses de l’EHA allant de 25, 50, 100, 150 et 200 mg/kg de l’EHA. Le lot référence a reçu du Lasilix® à la dose de 2,5 mg/kg.
Récolte de l’urine
Pour recueillir de l’urine, des entonnoirs en polyéthylène de 15 cm de diamètre et des éprouvettes graduées ont été utilisés. Chaque rat a été placé dans une cage à métabolisme et l’urine a été recueillie grâce à l’entonnoir relié à l’éprouvette graduée.
Toxicité aiguë
Ce test a été réalisé pour la détermination des doses toxiques et d’éventuels signes d’intoxication. Des souris mâles de race Swiss pesant en moyenne 25 g ont été utilisées pour étudier la toxicité. Les animaux utilisés ont été repartis en cinq lots de 10 souris. Le lot témoin n’a reçu que de la solution physiologique à raison de 100 ml/kg alors que les quatre lots traités ont reçu différentes doses d’EHA allant de 300, 350, 400 à 600 mg/kg. L’administration de tous les produits a été faite par voie orale et chaque administration a été effectuée après 12heures de jeunes. Les signes d’intoxication ont été observés à 5, 15, 20 minutes puis à 1, 2, 4 et 6 heures après l’administration de l’extrait (MALONE et coll., 1991). Les observations ont été poursuivies jusqu’au sixième jour après le début de l’expérience. Lors du premier jour, les animaux ont été privés de l’eau et des nourritures. Du second au septième jour, ils ont été nourris et ont eu accès libre à l’eau. Les symptômes observés ont été notés par animal et suivant leur ordre d’apparition. Par contre, le taux de mortalité a été déterminé par lot (MALONE et coll., 1991).
Analyse statistique des résultats
Les résultats ont été exprimés en moyenne avec l’écart- type pour chaque produit utilisé et pour chaque dose. Cette analyse statistique a été basée sur la comparaison entre les résultats des lots traités à ceux du lot témoin en utilisant le test » t » de Student. Pour ce faire, la comparaison au lot témoin s’est faite avec un coefficient de sécurité égal à 95 pour.100 (p<0,05). Alors p inférieur à 0,05 signifie qu’il y a une différence statistiquement significative.
RESULTATS
RENDEMENT ET CRIBLAGE PHYTOCHIMIQUE
A l’issu de l’extraction, à partir de 50g de la poudre de fruits du Cucumis sativus et ce processus a donné 11,67g d’extrait hydroalcoolique (EHA), soit un rendement de 23,34%. Les résultats du criblage phytochimique de l’EHA de Cucumis sativus sont présentés dans le tableau II. Ce dernier montre que l’EHA de Cucumis sativus contient une teneur élevée en glycosides, une quantité moyenne de tanins, de polyphénols et d’alcaloïdes. L’absence de composés tels que l’anthraquinone, le flavonoïde, le leucoanthocyane, la saponine, le stérol et le triterpène est aussi notée.
EFFETS BIOLOGIQUES
Effet diurétique de l’EHA de Cucumis sativus
Les résultats rapportés dans les tableaux III et dans la figure 2 montrent que l’EHA provoque un effet diurétique dose dépendant. La figure 2 montre que cet effet apparaît à partir de la deuxième heure après l’administration de l’extrait avec un effet maximum à la dose de 150mg/Kg de l’EHA.
Volume d’urine éliminée
Les résultats rapportés sur le tableau III montrent que l’EHA provoque :
– un effet significatif par rapport au lot témoin,
– un effet diurétique dose dépendante dans l’intervalle de 50 à 150mg/kg,
– l’élimination urinaire maximale est de 7,04 ± 0,10 ml à la dose de 150mg/kg.
Pourcentage d’excrétion urinaire (PEU)
Pour apprécier l’effet de cet extrait, le pourcentage d’excrétion urinaire par rapport au volume administré a été aussi utilisé. Les résultats présentés dans le tableau IV montre que :
– le lot témoin excrète 16,51 ± 0,32 % du volume administré tandis que le lot référence en élimine 49,52 ± 2,01 %,
– pour l’EHA, aux doses de 50 à 150mg/kg, le pourcentage d’excrétion urinaire (PEU) augmente de 27,02 ± 0,86% à 78,24 ± 1,13%. L’effet maximal de cette plante est obtenu à la dose de 150 mg/kg et il correspond à 4fois plus du volume urinaire émis par les rats témoins.
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Table des matières
I- INTRODUCTION
II- MATERIELS ET METHODES
II-1- PARTIE CHIMIQUE
A- Préparation de l’extrait hydroalcoolique de Cucumis sativus (EHA)
A-1- Extraction
A-2- Filtration sous vide
A-3- Evaporation sous vide
A-4- Lyophilisation
A-5-Calcul du rendement de l’extraction
B- Criblage phytochimique
II-2- PARTIE BIOLOGIQUE
A- Animaux d’expérience
B- Expérimentation
B-1-.Administration des produits
B-2- Récolte de l’urine
B-3- Mesure du volume urinaire éliminé
B-4- Détermination de la concentration urinaire en électrolytes
C- Toxicité aiguë
D- Analyse statistique des résultats
III- RESULTATS
III-1- RENDEMENT ET CRIBLAGE PHYTOCHIMIQUE
III-2- EFFETS BIOLOGIQUES
A – Effet diurétique de l’EHA de Cucumis sativus
A-1- Volume d’urine éliminée
A-2- Pourcentage d’excrétion urinaire
A-3- Cinétique d’élimination urinaire
B- Valeur du pH urinaire
C- Effets sur l’élimination urinaire en sodium (Na+)
D- Effets sur l’élimination urinaire en potassium (K+)
E- Effets sur l’élimination urinaire en chlore (Cl-)
F- Rapport Na+ / K+ urinaire
G -Toxicité aiguë
IV- DISCUSSION
V- CONCLUSIONS ET PERSPECTIVES
REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES
RESUME
ABSTRACT
