Préparation de la crème de base

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Préparation de l’extrait

Des tiges feuillées d’une plante appartenant à la famille des ERICACEAE ont été récoltées à Morarano, dans le district d’Andramasina, au mois de Novembre 2016. Elles ont été séchées à l’abri du soleil, dans une salle aérée et à la température ambiante pendant 14 jours. Les feuilles sèches ont été broyées à l’aide d’un broyeur à marteau (BROOK CROMPTON © série 2000). Deux cent grammes de cette poudre ont été macérés dans un mélange éthanol – eau (60 : 40) dans un récipient en verre, à la température ambiante, pendant trois jours et en agitant tous les jours. Le macérât obtenu a été filtré à l’aide du coton hydrophile, et le filtrat a été évaporé à l’aide d’un distillateur (Figure 1), à la température de 80 °C, puis au bain marie à la température de 100 °C (Figure 2).

Criblage phytochimique

Un criblage phytochimique a été effectué pour détecter les familles chimiques présentes dans l’extrait RM-2F. Ce test a été réalisé selon la méthode décrite par FONG H. H .S. et ses collaborateurs en 1977 (Tableau I). La présence de la famille chimique est caractérisée par la formation de précipité, ou d’un changement de coloration en utilisant des réactifs spécifiques pour chaque famille chimique.
Les signes suivants ont été utilisés pour quantifier la présence de la famille chimique présente dans l’extrait RM-2F :
+++ : Présence en forte teneur de la famille chimique recherchée
++ : Présence en moyenne teneur de la famille chimique recherchée
+: Présence en faible teneur de la famille chimique recherchée

PARTIE PHARMACOLOGIQUE

Préparation de la crème de base

Pour faciliter l’application de l’extrait sur la plaie, il a été incorporé dans une crème à base d’eau dans huile. Cette crème comprend de deux phases: une phase aqueuse dispersée et une phase huileuse dispersante (MARTINI M. C., 2011). La phase aqueuse est composée de l’eau distillée et de bicarbonate de sodium, tandis que la phase huileuse est formée d’huile de tournesol, de cire d’abeille, d’alcool stéaryle et d’acide stéarique (Tableau II).
Tableau II. Liste des ingrédients de la crème de base avec leurs fonctions et quantités respectives. Pour préparer la crème de base, les deux phases ont été préparées dans deux récipients différents placés dans un bain marie, maintenue à la température de 80 °C. Dans le premier récipient, le bicarbonate de sodium a été dissout dans l’eau distillée pour former la phase aqueuse. Tandis que la cire d’abeille découpée en petits morceaux a été fondue dans le deuxième récipient. Lorsque la cire a été fondue, l’huile de tournesol a été ajouté dans le récipient, puis l’alcool stéaryle et l’acide stéarique en fouettant sans arrêt pour former la phase huileuse.
Lorsque ces deux phases ont été homogènes, la phase aqueuse a été versée petit à petit dans la phase huileuse en fouettant à l’aide d’une batteuse électrique pour homogénéiser la crème (Figure 3).

Préparation de la crème à 10 % contenant l’extrait RM-2F

Pour obtenir une crème à 10 %, 10 g de l’extrait RM-2F ont été incorporées dans 90 g de crème de base. Les crèmes obtenues ont été mises dans de récipients en verre bien fermés et placées dans un endroit frais.

Animaux d’expérimentation

Des rats mâles et femelles de souche WISTAR, pesant entre 140 g et 240 g, âgés de trois mois, ont été utilisés pour ce test. Ces animaux ont été élevés dans les mêmes conditions de vie à l’animalerie de Laboratoire de Pharmacologie Générale, de Pharmacocinétique et de Cosmétologie (LPGPC) de la Faculté des Sciences, Université d’Antananarivo. Ils ont été nourris avec de la provende CPO AGRIVAL © et ont eu un accès libre à de l’eau. Ils ont été soumis dans les mêmes conditions d’éclairage (12 h d’éclairement et 12 h d’obscurité), et à la température ambiante.
Ces animaux ont été répartis en deux lots de trois rats: le premier lot a servi de témoin, les animaux de ce lot ont été traités avec la crème de base, tandis que les animaux du deuxième lot ont été traités avec la crème contenant 10 % d’extrait RM-2F. Ces rats ont été placés dans des cages individuelles pendant le test.

Création des plaies

Les poils sur une surface de 8 cm2 au niveau de la partie dorsale des rats ont été rasés puis épilés
à l’aide d’une cire épilatoire tiède. Puis la peau a été nettoyée avec de l’eau savonneuse. Vingt-quatre heures après l’épilation, les rats ont été anesthésiés par inhalation d’éther éthylique (CHITRA S. et coll., 2009). Deux plaies symétriques de 10 mm de diamètre ont été créées de part et d’autre de la colonne vertébrale à l’aide d’un dispositif tranchant circulaire de 10 mm de diamètre (MANJUNATHA B. K. et coll., 2005).
Pendant le traitement, la région de la partie dorsale ainsi que les plaies de chaque rat ont été nettoyées avec de l’eau savonneuse. Ensuite, les plaies ont été séchées avec un papier buvard et 10 mg de crème ont été appliqués sur chaque plaie une fois par jour, à la même heure jusqu’à la fermeture complète des plaies.

Étude de l’activité de l’extrait RM-2F

L’effet de l’extrait RM-2F a été étudié sur les différentes phases de la cicatrisation des plaies ouvertes expérimentales. Une étude macroscopique a été effectuée en observant tous les jours l’état des plaies du lot traité par rapport à celui du lot témoin pour apprécier leur évolution jusqu’à la fermeture complète. Pour étudier quantitativement l’activité de RM-2F, la surface des plaies a été mesurée par planimétrie directe, jusqu’à la fermeture des plaies, et la vitesse de cicatrisation a été calculée (DANDE P. et KHAN A., 2012). Les plaies ont été photographiées tous les jours.

Étude de l’effet de l’extrait RM-2F sur l’hémostase

Pour étudier l’effet de l’extrait RM-2F sur l’hémostase, 10 mg de la crème de base ont été appliqués sur chaque plaie des animaux du lot témoin, et 10 mg de crème à 10 % contenant l’extrait RM-2F ont été appliqués sur chaque plaie des animaux traités avec l’extrait tout de suite après la création des plaies. La durée du saignement des plaies a été chronométrée chez tous les animaux (OKOLI C. O. et coll., 2007).

Étude de l’effet de l’extrait RM-2F sur la phase inflammatoire

Pour étudier l’effet de l’extrait sur la phase inflammatoire, les signes de l’inflammation au niveau de chaque plaie ont été observés. La durée de la phase inflammatoire, ainsi que l’intensité des signes inflammatoires ont été notés et comparés entre les animaux du lot traité avec l’extrait RM-2F et les animaux du lot témoin (HUSEINI H. F. et coll., 2012).

Étude de l’effet de l’extrait RM-2F sur la phase de bourgeonnement

L’effet de l’extrait sur la phase de bourgeonnement a été étudié en observant l’aspect de la surface des plaies tous les jours. Le temps d’apparition des bourgeons ainsi que leur nombre ont été notés, puis ceux des plaies traitées avec l’extrait ont été comparés avec ceux des animaux témoins (SONI H. et SINGHAI A. K., 2012).

Étude de l’effet de l’extrait RM-2F sur la phase d’épithélialisation

Cette phase est caractérisée par l’apparition de l’épithélium qui couvre la plaie. L’effet de l’extrait RM-2F sur la phase d’épithélialisation a été étudié en observant le temps d’apparition de cet épithélium en le comparant avec celui du lot témoin (SUBHASHINI S. et ARUNACHALAM K. D., 2011).

Étude de l’effet de l’extrait RM-2F sur la vitesse de cicatrisation

La surface de chaque plaie a été mesurée par planimétrie directe pour calculer la vitesse de cicatrisation des plaies. Ceci dans le but d’étudier l’effet de l’extrait sur la vitesse de fermeture des plaies. La vitesse de la cicatrisation a été calculée en rapportant la surface des plaies aux temps d’observation. Juste après la création des plaies J0, puis au J3, J6, J9 et J12, la surface de la plaie a été mesurée en plaçant un papier millimétré transparent à la surface de la plaie, ensuite le contour de la plaie a été tracé sur le papier à l’aide d’un crayon à pointe fine (SASIDHARAN S. et coll., 2012).

Table des matières

I. INTRODUCTION
II. MATÉRIELS ET MÉTHODES
A. PARTIE CHIMIQUE
1. Préparation de l’extrait
2. Criblage phytochimique
B. PARTIE PHARMACOLOGIQUE
1. Préparation de la crème de base
2. Préparation de la crème à 10 % contenant l’extrait RM-2F
3. Animaux d’expérimentation
4. Création des plaies
5. Étude de l’activité de l’extrait RM-2F
a. Étude de l’effet de l’extrait RM-2F sur l’hémostase
b. Étude de l’effet de l’extrait RM-2F sur la phase inflammatoire
c. Étude de l’effet de l’extrait RM-2F sur la phase de bourgeonnement
d. Étude de l’effet de l’extrait RM-2F sur la phase d’épithélialisation
e. Étude de l’effet de l’extrait RM-2F sur la vitesse de cicatrisation
C. EXPRESSION DES RÉSULTATS
III. RÉSULTATS
A. PARTIE CHIMIQUE
1. Rendement de l’extraction
2. Résultats du criblage phytochimique

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