Préparation de la crème avec 10 % de l’extrait RIM

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Préparation de la crème contenant 10% de RIM

Pour préparer la crème contenant 10 % d’extrait utilisée dans les tests, 10 g de l’extrait ont été mélangés dans 90 g de crème de base.

Animaux d’expérimentation

Des rats Mâles de souche WISTAR, âgés de 3 mois et pesant entre 160 à 200 g ont été utilisés dans ce travail. Ces animaux ont été élevés au sein de l’animalerie du LPGPC. Ils ont été nourris avec de la provende LFL 1420, et ont eu un accès libre à de l’eau. Ils ont été soumis à un cycle de lumière et d’obscurité de 12/12 heures et à la température de 23 °C environ (GUILIANO, 2012).

Création des plaies

Pour étudier l’action de l’extrait RIM, des plaies ont été de part et d’autre de la colonne vertébrale de chaque rat. A l’aide d’une tondeuse électrique, une surface de 8 cm2 environ a été rasée sur la zone scapulaire des rats. Ensuite, la partie rasée a été nettoyée avec de l’eau savonneuse (SHAILAJAN et al., 2011).
Vingt-quatre heures après le rasage, les animaux ont été anesthésiés par inhalation d’éther diéthylique (BHASKAR et NITHYA, 2012). Puis un dispositif constitué d’une lame tranchante circulaire de 1 cm de diamètre et de 1 mm de profondeur a été utilisé pour créer deux plaies circulaires symétriques situées de part et d’autre de la colonne vertébrale, sur la surface rasée (DELEAGE, 2011). Ces plaies ont été laissées ouvertes et traitées avec la crème contenant 10 % d’extrait RIM ou avec la crème de base (MUKHERJEE et al., 2013).

Étude de l’effet de l’extrait RIM sur les différentes phases de la cicatrisation

L’action de l’extrait a été étudiée en observant son effet sur l’hémostase, la phase inflammatoire, la phase de granulation et celle de l’épithélialisation. Tous les jours, à la même heure, avant l’application de la crème, la surface des plaies a été mesurée. Ensuite, la croûte a été enlevée. Pour cela, elle a été ramollie en plaçant un coton imbibé d’eau sur la plaie, une fois ramollie, elle a été retirée. Ensuite, la plaie a été séchée à l’aide d’un papier buvard avant de les observer, les photographier et d’appliquer les crèmes (SADAF et al., 2006).

Étude de l’effet de l’extrait RIM sur l’hémostase

Tout de suite après la création des plaies, 10 mg de crème de base ont été appliqués sur les plaies témoins et 10 mg de crème contenant 10% de l’extrait RIM sur chaque plaie des animaux traités. Ensuite, la durée du saignement des plaies a été chronométrée. Le temps d’apparition de la croûte sur les plaies des deux lots a également été noté.

Étude de l’effet de l’extrait RIM sur la phase inflammatoire

L’effet de l’extrait RIM sur la phase inflammatoire a été étudié en observant le temps d’apparition des signes d’inflammation, ainsi que leur durée chez les deux lots (RAHIMZADEH et al., 2012).

Étude de l’effet de l’extrait RIM sur la phase de prolifération

L’action de l’extrait RIM sur la phase de prolifération a été étudiée en observant la présence des tissus de granulation au niveau des plaies (SONI et al., 2012).
Tous les jours, à la même heure, les plaies ont été nettoyées, puis leur surface a été observée. Le temps d’apparition des bourgeonnements de granulation a été noté, ainsi que leur nombre. Les résultats obtenus avec les animaux traités ont été comparés avec ceux des animaux témoins.

Étude de l’effet de l’extrait RIM sur la phase d’épithélialisation

La phase d’épithélialisation est caractérisée par l’apparition d’un nouveaux tissu épithélial qui couvre la surface de la plaie. L’effet de l’extrait RIM sur cette phase a été étudié en notant le temps d’apparition de ce tissu (SUBHASHINI et ARUNACHALAM, 2011)
Après le nettoyage de chaque plaie, leur surface a été observée, et le temps d’apparition de l’épithélium qui recouvre la surface de la plaie a été noté.

Étude de l’effet de l’extrait RIM sur la fermeture des plaies

Dans le but d’étudier l’effet de l’extrait sur la fermeture des plaies, leur surface a été mesurée tous les jours, à la même heure, après les avoir nettoyées. Un papier millimétré transparent a été placé directement sur la plaie, et le contour de chaque plaie a été tracé sur le papier à l’aide d’un crayon à pointe fine, et la surface a été évaluée en millimètre carré comptant le nombre de carreaux (BENSEGUENI et al., 2007). Le temps de cicatrisation à 50 % (TC50) des plaies traitées avec l’extrait ainsi que celui des plaies témoins a été déterminé graphiquement.

PARTIE PHARMACOLOGIQUE

Effet de l’extrait RIM sur les différentes phases de la cicatrisation

L’application quotidienne de la crème contenant de l’extrait RIM par voie topique sur la plaie chez le rat nous a permis d’étudier l’effet de l’extrait RIM sur les différentes phases de cicatrisation. Les plaies traitées à la crème contenant 10% de l’extrait se ferment plus tôt par rapport à celles traitées avec de la crème de base.

Effet de l’extrait RIM sur l’hémostase

L’application sous forme de crème contenant 10 %, de l’extrait RIM, juste après la création des plaies, diminue la durée de saignement des plaies à 27 ± 3,2 secondes contre 124 ± 5,2 secondes chez les plaies témoins (P< 0,05).

Effet de l’extrait RIM sur l’inflammation

Vingt-quatre heures après la création des plaies, elles présentent toutes une rougeur, un œdème au niveau de leur berge et un exsudat au niveau de leur surface. Toutefois, ces signes sont moins importants chez le lot traité avec l’extrait RIM par rapport à ceux du lot témoin (figure 2), et ils disparaissent plus rapidement chez les plaies traitées avec l’extrait par rapport aux témoins.
Trois jours après l’application de la crème, une croûte épaisse apparait au niveau des berges et à la surface de plaies traitées tandis que les plaies des rats témoins restent encore humides, avec une rougeur, un œdème et une croûte fine au niveau de leur berge (Figure 3).
Figure 3. Aspect des plaies après trois jours de traitement chez les deux lots, une croûte fine avec de la rougeur et œdème au niveau de la berge et exsudat au niveau de la surface des plaies témoins (a) et une croûte épaisse chez les plaies traitées avec la crème contenant 10 % de RIM. Après cinq jours de traitement, les signes d’inflammation disparaissent chez les plaies traitées avec l’extrait RIM, mais persistent encore chez les plaies témoins (Figure 4). Chez ces dernières, les signes d’inflammation ne disparaissent qu’après huit jours de traitement avec la crème de base. Figure 4. Aspect des plaies 5 jours après leur création chez les deux lots, avec un œdème au niveau de la berge et de l’exsudat au niveau de la surface des plaies témoins (a) et absence des signes inflammatoires chez les plaies traitées avec la crème contenant 10 % de l’extrait RIM (b).

Effet de l’extrait RIM sur la prolifération

Trois jours après l’application des crèmes, des granulations apparaissent sur la surface des plaies traitées avec l’extrait RIM. Leur nombre est égal à 146,25 ± 9,38 (Figure 5). Par contre, sur les plaies témoins, les granules n’apparaissent qu’au sixième jour avec 40 ± 4,54 granules contre 182,5 ± 21,88 granules chez le lot traité avec l’extrait RIM (P< 0,05) (Figure 6).
Figure 5. Présence de granules après 3 jours de traitement (J3) avec la crème contenant 10 % de l’extrait RIM (a), et absence chez les plaies témoins encore en phase inflammatoire (b).

Effet de l’extrait RIM sur l’épithélialisation

L’apparition du tissu épithélial de couleur rose au-dessus des plaies, à la place de la croûte, marque le début de la phase d’épithélialisation. Ce tissu se forme à partir de la berge des plaies et migre vers le centre.
Ce tissu épithélial commence à apparaitre après 6 jours de traitement avec l’extrait RIM, tandis qu’il n’apparait qu’après 15 jours sur les plaies traitées avec la crème de base (Figure 7), où les plaies traitées avec l’extrait sont presque fermées (Figure 8).

Effet de l’extrait RIM sur la fermeture des plaies

Juste après leur création, la surface des plaies est égale à 113 mm2. L’application quotidienne de l’extrait RIM sur les plaies ouvertes expérimentales accélère leur fermeture.
Après 13 jours de traitement avec l’extrait, les plaies traitées avec l’extrait RIM se ferment (Figure 9) tandis que les plaies témoins traitées avec la crème de base se ferment après 22 jours d’application (Figure 10).
Figure 9. Plaies juste après leur création (a), et fermeture complète de la plaie après 13 jours d’application de la crème contenant 10 % de l’extrait RIM (b) et contraction chez le lot témoin ayant reçu de la crème de base (c).
Figure 10. Fermeture complète des plaies témoins après 22 jours d’application de la crème de base.
La surface des plaies traitées avec l’extrait se contractent rapidement par rapport à celle des animaux témoins. Les plaies se contractent de 50% après 5 jours de traitement pour le lot traité avec l’extrait contre 12 jours pour les animaux témoins. Les plaies traitées par l’extrait RIM se ferment au bout de 13 jours d’application contre 22 jours d’application de la crème de base chez les plaies des animaux témoins (Figure 11). La crème contenant 10 % de l’extrait RIM accélère la fermeture des plaies par rapport aux plaies traitées avec la crème de base.

Table des matières

I. INTRODUCTION
II. MATÉRIELS ET MÉTHODES
A. Partie chimique
1. Préparation de l’extrait
2. Criblage phytochimique
B. Partie pharmacologique
1. Préparation de la crème
2. Préparation de la crème avec 10 % de l’extrait RIM
3. Animaux d’expérimentation
4. Création des plaies
5. Etude de l’effet de l’extrait RIM sur les différentes phases de la cicatrisation
a. Etude de l’effet de l’extrait RIM sur l’hémostase
b. Etude de l’effet de l’extrait RIM sur la phase inflammatoire
c. Etude de l’effet de l’extrait RIM sur la phase de prolifération
d. Etude de l’effet de l’extrait RIM sur la phase d’épithélialisation
6. Etude de l’effet de l’extrait RIM sur la fermeture des plaies
C. EXPRESSION ET ANALYSES DES RÉSULTATS
III. RÉSULTATS
A. Partie chimique
1. Rendement de l’extraction
2. Résultats du criblage phytochimique
B. Partie pharmacologique
1. Effet de l’extrait RIM sur les différentes phases de la cicatrisation
a. Effet de l’extrait RIM sur l’hémostase
b. Effet de l’extrait RIM sur la phase inflammatoire
c. Effet de l’extrait RIM sur la phase de prolifération
d. Effet de l’extrait RIM sur la phase d’épithélialisation
2. Effet de l’extrait RIM sur la fermeture des plaies
IV. DISCUSSION
V. CONCLUSION
BIBLIOGRAPHIE

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