Soutenance mémoire
MICROORGANISMES RECHERCHÉS DANS LES ALIMENTS
MATERIEL ET METHODES DE PRELEVEMENT DES ECHANTILLONS
Les prélèvements des échantillons alimentaires, sont analysés, le plutôt possible, après leur réception au laboratoire. L’analyse microbiologique des denrées alimentaires nécessite quatre étapes qui sont la pesée, la dilution et l’agitation, l’isolement et le dénombrement, puis, l’identification biochimique et sérologique.
1.Pesée
Il faut disposer de 25 g de l’échantillon à analyser, pour la recherche de Salmonella, 25g de l’échantillon à analyser, pour la recherche de Listeria monocytogenes et une quantité équivalente, pour l’isolement et le dénombrement de tous les autres microorganismes recherchés selon les critères nationaux et internationaux en vigueur. Soit, un minimum de 75 g, au total.
2.Recherche de la Flore Mésophile Aérobie Totale
La recherche de la Flore Mésophile Aérobie Totale (FMAT) se fait selon quatre étapes qui sont la pesée, la dilution et l’homogénéisation, l’isolement et le dénombrement.
Pesée, Dilution et Homogénéisation
1. Prélever aseptiquement 25 g de l’échantillon à analyser. 2. Ajouter, aseptiquement, dans un sac en plastique stérile, 225 mL du milieu liquide électif dit Eau Peptonée Tamponnée (EPT), à l’unité d’analyse préalablement pesée. 3. Mélanger au Stomacher (agitateur), pendant 4 minutes à 5 minutes, jusqu’à l’obtention d’un mélange homogène.
Isolement et Dénombrement
1. Déposer, 1 mL de la suspension mère et/ou des dilutions décimales, dans une boîte de Pétri stérile.
2. Ajouter, par incorporation, 15 mL du milieu gélosé nutritif Plate Count Agar (PCA) fondu et ramené à +47,0°C±2,0°C.
3. Mélanger l’inoculum au milieu et laisser se solidifier.
4. Recouvrir, l’ensemble ainsi obtenu, d’une deuxième couche dite protectrice de 5 mL du milieu gélosé nutritif Plate Count Agar (PCA) fondu et ramené à +47,0°C±2,0°C.
5. Laisser se solidifier.
6. Incuber, l’ensemble ainsi préparé, à +30,0°C±1,0°C, durant 24 Heures à 72 Heures.
7. Dénombrer les colonies petites et blanches caractéristiques de la Flore Mésophile Aérobie Totale (FMAT) sur le milieu gélosé nutritif Plate Count Agar (PCA) (Photo 1).
8. Exprimer les résultats en UFC.g-1.
3. Recherche de la Flore Fongique
La recherche de la Flore Fongique (FF) ou Levures et Moisissures se fait selon quatre étapes qui sont la pesée, la dilution et l’homogénéisation, l’isolement et le dénombrement.
Pesée, Dilution et Homogénéisation
1. Prélever aseptiquement 25 g de l’échantillon à analyser. 2. Ajouter, aseptiquement, dans un sac en plastique stérile, 225 mL du milieu liquide électif Eau Peptonée Tamponnée (EPT), à l’unité d’analyse préalablement pesée. 3. Mélanger au Stomacher (agitateur), pendant 4 minutes à 5 minutes, jusqu’à l’obtention d’un mélange homogène.
Isolement et Dénombrement
1. Déposer, 0,1 ml de la suspension mère et/ou des dilutions décimales, dans une boîte de Pétri stérile contenant du milieu gélosé sélectif Sabouraud (Sb) préalablement coulé
2. Ensemencer, par épuisement, à la surface du milieu gélosé sélectif Sabouraud.
3. Incuber, l’ensemble ainsi préparé, à +25,0°C±1,0°C, durant 24 Heures à 72 Heures.
4. Dénombrer les colonies petites et blanchâtres caractéristiques de la Flore Fongique (FF) sur le milieu gélosé Sabouraud (Sb).
5. Exprimer les résultats en UFC.g-1.
4.Recherche des coliformes totaux et des coliformes fécaux
La recherche des Coliformes Totaux (CT) et des Coliformes Fécaux (CF) se fait selon quatre étapes qui sont la pesée, la dilution et l’homogénéisation, l’isolement et le dénombrement.
Pesée, Dilution et Homogénéisation
1. Prélever aseptiquement 25 g de l’échantillon à analyser. 2. Ajouter, aseptiquement, dans un sac en plastique stérile, 225 mL du milieu liquide électif dit Eau Peptonée Tamponnée (EPT), à l’unité d’analyse préalablement pesée. 3. Mélanger au Stomacher (agitateur), pendant 4 minutes à 5 minutes, jusqu’à l’obtention d’un mélange homogène.
Isolement et Dénombrement
1. Déposer, 1 mL de la suspension mère et/ou des dilutions décimales, dans deux boîtes de Pétri stériles.
2. Ajouter, par incorporation, 15 mL du milieu gélosé sélectif Désoxycholate Lactose 1‰ (DL 1‰) fondu et ramené à +47,0°C±2,0°C.
3. Mélanger l’inoculum au milieu et le laisse solidifier.
4. Recouvrir, l’ensemble ainsi obtenu, d’une deuxième couche protectrice de 5 mL du milieu gélosé sélectif Désoxycholate lactose 1‰ (DL 1‰) fondu et ramené à +47,0°C±2,0°C.
5. Laisser se solidifier.
6. Incuber, une boîte, à +36,0°C±1,0°C, pour les Coliformes Totaux et une boîte, à +44,00°C±0,25°C, pour les Coliformes Fécaux, durant 24 Heures à 48 Heures.
7. Dénombrer les colonies rouge brique caractéristiques des Coliformes Totaux et des Coliformes Fécaux sur le milieu gélosé sélectif Désoxycholate lactose 1‰ (DL 1‰) .
8. Exprimer les résultats en UFC.g-1.
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Guide du mémoire de fin d’études avec la catégorie MALADIES D’ORIGINE ALIMENTAIRE |
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Table des matières
INTRODUCTION
I.PRESENTATION DE LA STRUCTURE D’ACEUIL
I.1.Département Microbiologie et Hygiène Alimentaire
I-2.Missions du Département de Microbiologie et Hygiène Alimentaire
I-3.Activités du département de Microbiologie et Hygiène Alimentaire
II.MICROORGANISMES RECHERCHÉS DANS LES ALIMENTS
II.1.Flore Mésophile Aérobie Totale
II.2.FloreFongique
II.3.Coliformes Totaux et Coliformes Fécaux
II.4.Anaérobies SulfitoRéducteurs
II.4.1Sources de contamination et prévention
II.5.Staphylococcus aureus
II.5.1.Caractères culturaux
II.5.2.Potentiel Enzymatique
II.5.3.Sources de contamination et Prévention
II.5.4.Pouvoir pathogène chez l’Homme
II.6.Salmonella
II.6.1.Caractères morphologiques
II.6.2.Sources de Contamination et Prévention
II.7.Listeria monocytogenes
II.7.1.Caractères morphologiques
II.7.2.Sources de contamination et Prévention
II.7.3.Mode d’action
II.8.Campylobacter jejuni et Campylobacter colin
II.8.1. Caractères culturaux
II.8.2.Sources de Contamination et Prévention
II.8.3.Pouvior Pathogéne
II.9.Vibrio parahaemoloticu
II.9.1.Caractères culturaux
II.9.2.Habitat
II.9.3.Pouvoir Pathogène
III.MALADIES D’ORIGINE ALIMENTAIRE
III.1.Salmonelloses
III.2.Campylobactérioses
IV.3.Listerioses
Partie Matériel et Méthodes
I.Pesée
II.Recherche de la Flore Mésophile Aérobie Totale
II.1.Pesée ,Dilution et Homogénéisation
II.2.Isolement et Dénombrement
III.Recherche de la Flore Fongique
III.1.Pesée,Dilution et Homgénéisation
III.2.Isolement et Dénombrement
IV.Recherche des Coliformes Totaux et Coliformes Fécaux
IV.1.Pesée, Dilution et Homogénéisation
IV.2.Isolement et Dénombrement
V.Recherche des Anaérobies SulfitoRéducteurs
V.1.Pesée, Dilution et Homogénéisation
V.2.Isolement et Dénombrement
VI. Recherche de Staphylococcus aureus
VI.1.Pesée, Dilution et Homogénéisation
VI.2.Isolement et Dénombrement
VI.3. Test de confirmation
VII. Recherche de Salmonella
VII.1.Préenrichissement
VII.2.Enrichissement
VII.3.Isolement sélectif
VII.4.Identification
VIII. Recherche de Listeria monocytogenes
VIII.1.Préenrichessement
VIII.2.Enrichissement
VIII.3.Isolement sélectif
VIII.4.Tests de Confirmation Identification biochimique
CONCLUSION ET RECOMMANDATION
Références
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