Méthode de dosage de la bupivacaine

Méthode de dosage de la bupivacaine

Généralités sur la validation

Définition et principe

La Validation d’une méthode est la procédure par laquelle on démontre, preuves expérimentales à l’appui, que les performances de la méthode permettent de répondre aux exigences de l’usage auquel elle est destinée [4]. Il faut donc démontrer que la méthode mise en oeuvre par le laboratoire est apte à l’emploi prévu (besoin du client)
La validation d’une méthode d’analyse entraîne la détermination de plusieurs paramètres : la limite de détection d’une méthode (LD de linéarité (LL), la fidélité (répétabilité, finalement, la récupération [6]. Les caractéristiques à déterminer diffèrent suivant que le dosa qualitatif.
La validation est donc fondée sur une analyse statistique basée sur un certain nombre de critères aboutissant à des méthodes analytiques permettant de donner des résultats fiables.

Aspect réglementaire

Dans la littérature on trouve différents textes réglementaires, on cite Deux guidelines ICH (International Conference on Harmonization) validation analytique : Q2: «Analytical Validation»
o Q2A: «Text on Validation of Analytical Procedures: Présente une discussion sur les caractéristiques qui doivent être prises en compte au cours de la validation des méthodes analytiques
o Q2B: «Methodology» : Son but est de fournir des conseils et recommandations sur la manière d’appréhender les différentes caractéristiques de la validation pour chaque méthode analytique. En outre, le document fournit une indication sur les données qui devraient être présentées dans un dossier d’enregistrement.
SFSTP (Société Française des Sciences Techniques et Pharmaceutiques) recommandations réglement pharmaceutique nationale et une démarche statistique pour la validation d’une procédure analytique.

Critères de validation

La validation d’une méthode analytique consiste à vérifier certains
· Spécificité
· Sélectivité
· Linéarité
· Justesse
analytique:

Fidélité

o Répétabilité (intra)
o Fidélité intermédiaire
o Reproductibilité (inter
· Exactitude
· Limite de détection
· Limite de quantification
· Intervalle de dosage
· Fonction de réponse
Les paramètres faisant partie de la validation d’une méthode analytique dépendent du cette méthode (ICH Q2) :
Tests d’identification
Test limite de recherche d’impureté
Test quantitatif de teneur en impureté
Test quantitatif de teneur en principe actif (PA)
Le tableau suivant renseigne les différentes caractéristiques à évaluer en fonction du type de procédure analytique à valider. Cette liste doit être considérée comme un guide et une base de référence.

Linéarité

La linéarité d’une procédure analytique est sa capacité, à fournir des résultats directement proportionnels dans l’échantillon. [3]

Justesse

La justesse représente l’étroitesse de l’accord entre la valeur moyenne obtenue à partir large série de résultats d’essais et la valeur conventionnellement vraie de référence acceptée). La mesure de la justesse est exprimée en la différence entre la moyenne des

Fidélité

La fidélité exprime l’étroitesse de l’accord (degré de dispersion, coefficient de variation) entre une série de mesures provenant de multiples prises d’un même échantillon homogène (résultats d’essais indépendants) dans des conditions prescrites. La fidélité fournit une indication sur les mesures liées au hasard. La fidélité peut être évaluée à trois niveaux : la répétabili intermédiaire (intra-laboratoire) et la reproductibilité (inter
La fidélité traduit uniquement la distribution des erreurs aléatoires et n’a aucune relation avec la valeur vraie ou spécifiée. La mesure de fidélité est calculée d’essais.
Le terme « résultats d’essai indépendants » signifie influencée par un essai précédent sur le même matériau ou similaire, liées au secteur d’activité concerné.
Les mesures quantitatives de la fidélité dépendent de façon critique des conditions stipulées.
Peuvent ainsi être distinguées les conditions de :
– répétabilité : conditions où les résultats d’essai indépendants sont obtenus par la même méthode sur des échantillons d’essai identiques dans le même laboratoire, par le même opérateur, utilisant le même équipement et pendant un court intervalle de temps ;
– fidélité intermédiaire
la même méthode sur des échantillons d’essai identiques dans le même laboratoire, avec différents opérateurs et utilisant des équipements différents et pendant un intervalle de temps donné ; l’intérieur de l’intervalle de dosage, à la concentration (quantité) en l’échantillon (la valeur de termes de biais, résultats d’essais et la valeur de référence acceptée inter-laboratoire).
à partir de l’écart type des résultats des résultats obtenus d’une façon non
compte tenu des contraintes : conditions où les résultats d’essai indépendants sont obtenus par substance présente d’une celui-ci représentant
a [1].

répétabilité, la fidélité 

– reproductibilité : conditions où les résultats d’essai sont obtenus par la même méthode sur des échantillons d’essais identiques dans différents laboratoires, avec différents opérateurs et utilisant des équipements différents.

Exactitude

L’exactitude d’une procédure analytique exprime l’étroitesse de l’accord entre la valeur acceptée comme conventionnellement vraie, ou comme valeur de référence, et la valeur trouvée (= moyenne obtenue en appliquant la procédure d’analyse un certain nombre de fois.
Cette notion est la combinaison d’une erreur systématique, liée à la justesse de la méthode, et d’une composante aléatoire, liée à la mesure elle méthode [1].

Limite de quantification

Elle correspond à la limite à partir de laquelle la méthode est suffisamment précise pour donner une estimation quantitative satisfaisante d’une concentration inconnue de la substance à doser.

Intervalle de dosage

L’intervalle de dosage d’une procédure d’ inférieurs (ces valeurs incluses) pour la quant à son exactitude (justesse+fidélité) et sa linéarité, en utilisant la méthode décrite.

Méthodologie globale au moyen du profil d’exactitude

La validation a pour but de démontrer que la procédure analytique correspond à lequel elle est prévue. La stratégie couramment utilisée pour analytique est basée sur les critères d’acceptation qui considèrent de manière dissociée le biais et la variance. Cependant, dans l’étude présente, nous avons appliqué une nouvelle stratégie basée l’intervalle de tolérance d’espérance tolerance intervals for the total error measurement »), erreur qui prend en compte et la fidélité intermédiaire (écart-type).
Cette stratégie donne la possibilité de contrôler le risque d’acceptation d’une méthode non adéquate et ce, au moyen des profils d’exactitude. Un autre avantage présenté par cette stratégie est de fournir la garantie que les résultats des mesures qui seront obtenus lors de l’a la méthode validée seront inclus dans les limites d’acceptation fixées à priori selon les exigences définies.
En conséquence, le profil d’exactitude peut être considéré comme un outil de décision pour accepter ou rejeter une méthode selon son usage prévu. De plus, le profil utilisé pour sélectionner le modèle de régression le plus approprié pour déterminer les limites de quantification supérieure et inférieure, et sélectionner l’intervalle de concentration pour le dosage.

Principe

La validation au moyen du profil d’exactitude de plusieurs intervalles de tolérance ( échantillons à différents niveaux de concentration et d’un intervalle d’acceptabilité.
Cette méthodologie s’appuie sur deux concepts complémentaires:
la limite d’acceptabilité ( performance globale fixé par l’utilisateur du résultat. La plupart du temps, elle s’exprime comme un pourcentage autour de la valeur).
l’intervalle de tolérance

proportion moyenne β % de futures mesures.

Les 10 étapes pour valider une méthode avec le profil d’exactitude
1.Disposer du mode opératoire et définir le mesurande ;
2.Définir le domaine de validation (gamme de concentrations) et l’objectif attendu de la méthode sous la forme d’un intervalle d’acceptabilité ;
3. Sélectionner des échantillons de validation dont les valeurs de référencence
4.Choisir un plan d’expérience de validation ;
5. Pour les méthodes indirectes, choisir du plan d’expérience d’étalonnage.

Construction graphique et interprétation

Le mode de représentation est le plus lisible exprimer tous les résultats en valeurs relatives, ramenées à la valeur de référence du limites d’acceptabilité sont aussi exprimées de façon Sur l’axe des abscisses, on représente la concentration théorique des niveaux l’axe des ordonnées on représente simultanément.
les limites des intervalles de tolérance d’espérancere trouvées et exprimées en pourcentage sous la forme d’un taux de exactitude relative ;
les intervalles d’acceptabilité, définis en fonction de l’objectif de la méthode, exprimés de la même façon que les intervalles de tolérance.

Table des matières

Dédicaces
Remerciements
Liste des abréviations
Liste des figures
Liste des tableaux
Introduction
Première partie : Présentation du LCAM du CHU Hassan II Fès
I-Présentation du LCAM
II-Les différentes méthodes d’analyses médicamenteuses du LCAM
Deuxième partie : Etude bibliographique
I-Méthode analytique
II-Généralités sur la validation analytique
1-Définition et principe
2-Aspect réglementaire
3-Critères de validation
a. Spécificité, Séléctivité
b. Linéarité
c. Justesse
d. Fidélité
e. Exactitude
f. Limite de quantification
g. Intervalle de dosage
h. Fonction de réponse
III-Méthodologie globale au moyen du profil d’exactitude
1-Principe
2-Analyse de la fonction de réponse et sélection du modèle d’étalonnage approprié.
3-Calcul de la justesse et de la fidélité
4-Calcul des intervalles de tolérance
5-Profil d’exactitude et décision
5-1-Calcul
5-2-choix de la fonction de réponse
6-Calcul de la limite de quantification
7-Construction graphique et interprétation
8-Estimation de l’incertitude de mesure
IV-La bupivacaine
1-Propriétés physico-chimiques
2-Propriétés pharmacologiques
2-1-Propriétés pharmacodynamiques
2-2-Propriétés pharmacocinétiques
3-Données cliniques
analyses d’exactitude
Exactitude étalonnage
3-1-Indications thérapeutiques
3-2-Posologie et mode d’administration
3-3-Contre-indications
3-4-Effets indésirables
Troisième partie : Etude expérimentale
I-Méthode de dosage de la bupivacaine
1-Réactifs
2-Conditions chromatographiques
3-Solutions étalons
4-Méthode
II-Etude préliminaire et détermination du domaine d’application de la méthode
1-Domaine de linéarité
2-Sélectivité
III-Validation au moyen du profil d’exactitude
1-Plan expérimental de validation
2-Choix du modèle d’étalonnage
3-Calcul de la justesse et de la fidélité
4-Calcul des intervalles de tolérance
5-Calcul de la limite de quantification
6-Estimation de l’incertitude de mesure
Conclusion
Bibliographies
Annexes

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