Matรฉriel biologique
Le matรฉriel biologique de base retenu est le rat mรขle de la souche Wistar provenant de lโinstitut pasteur dโAlger. Les rats sont des mammifรจres nocturnes de lโordre des rongeurs. La pubertรฉ survient entre 50 et 60 jours aprรจs la naissance, et ceci dans les deux sexes. Lโespรฉrance de vie moyenne dโun rat se situe entre 02ยฝ ans et 03 ans, selon la souche dโappartenance, les conditions environnementales et autres facteurs(Baker et al., 1980). Aprรจs une pรฉriode d’adaptation de trois semaines, 56 rats mรขles ont รฉtรฉ sรฉlectionnรฉs. Au dรฉbut de l’expรฉrimentation ces rats pesaient entre (200ยฑ20) grammes.
Conditions dโรฉlevageย
Les rats sont รฉlevรฉs dans des cages translucides en polyรฉthylรจne.Celles-ci sont tapissรฉes dโune litiรจre composรฉe de copeaux de bois. La chambre contrรดlรฉe, pour la photopรฉriode : lumiรจre de 12/h cycle jour / nuit.Les cages sont nettoyรฉes et la litiรจre changรฉe une fois tous les deux jours. Les 56 rats sont acclimatรฉs deux mois aux conditions de lโanimalerie, ร une tempรฉrature moyenne de 25 ยฑ2ยฐC et une hygromรฉtrie de 50%. La nourriture des rats leur est prรฉsentรฉe sous forme de bรขtonnets, composรฉes de mais, de son, de remoulage de blรฉ, soja, CMV (Sarl la production locale aliment souris et rats Bouzarรฉah – Alger). Pour ce qui est de lโeau de boisson, elle leur est prรฉsentรฉe dans des biberons ad libitum.
Lotissement des animaux
Aprรจs une pรฉriode dโadaptation de trois semaines, nous avons sรฉlectionnรฉ 56 rats en fonction de leurs poids (compris approximativement entre 200 ยฑ 20grammes) que nous avons divisรฉ une premiรจre fois en 4 lots expรฉrimentaux de 14 rats chacun : lot control (C) n=14 rats, lot diabรฉtique (D) n=14, lot stressรฉ (S) n=14 et lot diabรฉtique stressรฉ (DS) n=14. Chaque lot initial fut divisรฉ endeux sous-groupes de 07 rats chacun. Dans chaque lot de 14 rats, un sousgroupe de 07 rats reรงoit par gavage gastrique 1 ml/kg de solution saline de Nacl 0.9 % (vรฉhicule) et lโautre sous groupe de07 rats, reรงoitรฉgalement par gavage gastrique une dose de 100 mg/kg dโhespรฉridine (antioxydant) dissoute dans la mรชme solution de Nacl 0.9 %.
Mรฉthodes
Procรฉdure expรฉrimentale
Administration de la streptozotocine
La streptozotocine (STZ) est une substance chimique soluble dans lโeau, le sรฉrum physiologiqueet les solvants organiques. La streptozotocine dont le poids molรฉculaire est de 265,2 Da, ร รฉtรฉ isolรฉe en 1956 ร partir de streptomyces et utilisรฉe pour la premiรจre fois en 1967. Elle est courammentutilisรฉe sur des modรจles animaux pour lโรฉtude du diabรจte (Frodeet al.,2008) (Figure 05). Elle est constituรฉe dโun rรฉsidu de glucose auquel se lie un carbone (2), un rรฉsidu nitro-urรฉe mรฉthylรฉ. In vivo, sa demi-vie est de 5 ร 15 minutes. Il est possible que lโentitรฉ glucidique dela molรฉcule facilite son internalisation viales transporteurs GLUT2 membranaires des endocrinocytes ฮฒ pancrรฉatiques (White FR.,1963). Lโinduction du diabรจte des lots de rats DH et DS se fait par une seule injection intra Pรฉritonรฉale (Inj. IP) de STZ [Sigma ST Lowis, Mo] ร la dose de 60 mg/kg de poids corporel, soit un volume de 1 ml/kg. La streptozotocineest prรฉparรฉe extemporanรฉment dans une solution de tampon 0,1 M de citrate de sodium (pH 4,5). Les lots C et S reรงoivent une seule injection IP du tampon citrate.
Administration de la solution glucosรฉe
Afin de corriger lโhypoglycรฉmie induite par la libรฉration dโinsuline dans le sang, suite ร la destruction massive des cellules ฮฒ pancrรฉatiques par la STZ,lโeaudes biberons a รฉtรฉ remplacรฉe par une solution glucosรฉe isotonique ร 5% pour une durรฉe de 48 heures. Lโhyperglycรฉmie apparait 72 heures aprรจs lโinjection. La dรฉtectionde glucose dans les urines des rats se fait ร lโaide de bandelettes rรฉactives de type BILI LABSTIXยฎ,paramรจtre biologique assez important pour le diagnostic de la maladie diabรฉtique.
Traitement par lโhespรฉridine
Prรฉsentation de lโhespรฉridine
Lโhespรฉridine [Sigma,approx. 80%] est un flavanoneglycosylรฉ (glycoside) constituรฉdโunflavanone appelรฉ hespรฉritineet dโun disaccharide nommรฉ rutinose. Cโest une substancesolide peu hydrosoluble. Elle est cependant plus hydrosoluble que son aglycone, lโhespรฉritine. La molรฉculaire dโhespรฉridine est composรฉe de 77 atomes (C28H34O15), dont 28 carbones, 34 hydrogรจnes et 15 oxygรจnes.Son poids molรฉculaire est de 610.57 Da, et son disaccharide le rutinose, est composรฉ de glucose et de rhamnose (6-dรฉsoxy-L-mannose) (Parketal., 2008).
La pharmaco-cinรฉtiquede lโhespรฉridine est mal connue et son absorption par lโรฉpithรฉliumintestinal sous forme de glycoside reste imprรฉcise.(Kobayashiet al., 2008). La gรฉnine (aglycone) correspondant ร lโhespรฉritineest dรฉtectรฉe dans le sรฉrum aprรจs son ingestion etpourrait รชtre formรฉe avant lโabsorption dont elle pourrait subir une glucoronidation soit au niveau de la paroi intestinale soit dans le foie (Nielsen et al.,2006).
Administration de lโhespรฉridine
Lโhespรฉridine est lโantioxydant retenu pour le traitement des rats. Il se prรฉsente sous forme de poudre jaunรขtre. La quantitรฉ dโhespรฉridine indispensable ร la prรฉparation de la solution est de 50 mg/ kg de poids corporel, dans ces conditions la balance de prรฉcision est plus que nรฉcessaire. Les doses quantifiรฉes sontmis dans des tubes ร Eppendorf pour รชtre dissoutes par la suite dans une solution saline ร 0.9 % ร raison de 01 ml par kg de poids corporel. Il est nรฉcessaire de bien agiter les tubes, jusqu’ร obtention d’une solutionblanche semi aqueuseavant son administration. Le traitementpar lโantioxydant ou par le vรฉhicule (NaCl)pour les contrรดles se fera par gavageet dรฉbutera 72 heures aprรจs lโinduction du diabรจte soit le 4รฉme jour et ceci durant21 Jours, ce qui correspond exactement ร la durรฉe du traitement.
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Table des matiรจres
1 INTRODUCTION
2 MATERIEL ET METHODES
2.1Matรฉriel biologique
2.1.1 Conditions dโรฉlevage
2.1.2 Lotissement des animaux
2.2 Mรฉthodes
2.2.1 Procรฉdure expรฉrimentale
2.2.1.1 Administration de la Streptozotocine
2.2.1.2 Administration de la solution glucosรฉe
2.2.3 Traitement par un lโhespรฉridine
2.2.3.1 Prรฉsentation de lโhespรฉridine
2.2.3.2 Administration de lโhespรฉridine
2.2.4 Tests Comportementaux
2.2.4.1 Test du champ ouvert (Open Field ; OF)
2.2.4.2 Test du labyrinthe en croix surรฉlevรฉ (Elevated plus maze)
2.2.4.3 Application du stress Water Avoidence (WAS)
2.2.5 Prรฉlรจvements
2.2.5.1 Prรฉlรจvement sanguin
2.2.5.2 Prรฉlรจvement des organes
2.2.6 Etude des paramรจtres biochimiques
2.2.7 Etude statistique
3 RESULTATS
3.1 Variation du comportement
3.1.1 Labyrinthe en croix surรฉlevรฉ
3.1.2 Le champ ouvert
3.2 Variation glycรฉmique
3.3 Variation pondรฉrale
3.4 Variation du poids des organes
3.4.1 Le cerveau
3.4.2 Le foie
3.4.3 Le pancrรฉas
3.4.4 Les glandes surrรฉnales
3.4.5 Les testicules
4 DISCUSSION
5 CONCLUSION ET PERSPECTIVES
REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES
PUBLICATION