Soutenance mémoire
Présentation du Matériel Végétal
Selon HUMBERT,*PPS est un : « Arbrisseau ou petit arbre de 2 à 8 m. Rameaux en général isolés, plus rarement groupés par 2-3, à écorce grise ou brunâtre, les plus jeunes souvent abondamment couverts de lenticelles claires, essentiellement glabres. Feuilles souvent disposées par paires, mais aussi rapprochées par groupes aux extrémités des rameaux, parcheminées, ou, à la fin, finement coriaces, très peu révolutées sur la marge étroitement cartilagineuse, d’un vert mat sur la face supérieure, toujours plus claires et parfois un peu glauques sur la face inférieure, toujours entièrement glabres, largement ovales-lancéolées, ovales ou elliptiques, avec la plus grande largeur, en général, au milieu ou au- dessous du milieu, rétrécies en coin sur une longueur plus ou moins grande à la base, jusqu’au pétiole long de 8-12 mm, toujours nettement terminées en pointe et assez souvent prolongées en une véritable pointe-gouttière, mesurant avec le pétiole 43 x 19 mm à 130 x 52 mm, en moyenne 87 x 30 mm (quotient 2,9). Fleurs à odeur agréable, sur des pédicelles pubescents-jaunâtres ou rougeâtres, plus tard glabrescents, longs de 3-8 mm. Sépales libres, non imbriqués, ovales, obtus, délicatement pubescents sur la marge. Pétales blancs ou d’un blanc jaunâtre, obtus, glabres. Pistil pratiquement sans pied ; ovaire pubescent, en totalité, ou à la base. Capsules au plus jusqu’au 5, parfois isolées, sur des pédicelles épaissis, garnis de lenticelles, atteignant 12 mm de long, en général entièrement glabrescents, à carpophore nul ou très court, plus ou moins ellipsoïdales ou ovoïdes, jaune doré foncé, jaune orangé ou rouges, glabres. Valves de la capsule mûre finement coriaces, flexibles, épaisses de 0,5 mm, environ sur la marge, étalées-horizontales ou un peu réfléchies en arrière, elliptique, mesurant 10 x 7 mm à 15 x 12 mm, convexes en dehors, parcourues dans toute leur longueur par un renflement plus ou moins large, fortement ridé-rugueux, plus lisses et à nervation plus ou moins réticulée sur les marges, profondément concaves en dedans, délicatement pennées-réticulées, à la fin plus ou moins irrégulièrement ridées-bosselées : placenta arrivant au-dessus du milieu, avec funicules atteignant 2 mm de long. Ovules, en tout, 6-12, parvenant assez souvent tous, ou presque tous, à maturité complète. PPS pousse dans les forêts ombrephiles, souvent au bord des cours d’eau, en général dans le sous-bois, sur gneiss, granite, quartzite, ou argile, de la côté à 800 m d’altitude, atteignant seulement sur le massif du Beampingaratra, en forêt, parmi des rochers gneissiques, à 1500 m d’altitude ;
Noms vernaculaires : Fantsikala, Maimbovitsika, Maimbovitsikala, Membovitsiky, Mongy, Nantou-foutsi, Sanganakoholahy. »
Généralités sur les he
Les he ou huiles volatiles sont des produits de composition généralement assez complexe, renfermant des principes volatils odoriférants contenus dans les végétaux. Elles sont obtenues à partir d’une matière végétale, par hydrodistillation, distillation à sec ou par procédé mécanique à partir de l’épicarpe de citrus. 44,61,45 A l’état naturel, les huiles essentielles sont rencontrées dans les végétaux supérieurs. On peut citer des exemples tels que les Lauraceae54,62 , Rutaceae55 , Myrtaceae59 , Piperaceae43,Annonaceae57 , Ombellifereae, Pittosporaceae1,8,10,11,12,15,21,23,24,25,26,28. Elles sont retrouvées dans tous les organes végétaux : fleurs56,58 (lavandes, Malanthera madagascariensis Baker, Aeolanthus gamuvelliae), feuilles28,59 (Pittosporum undulatum Vent., Eucalyptus globulus Labill), écorces62 (Laurus nobilis, Cinnamomum zeylanicum, Ravensara anisata), bois45,63 (Cinnamomum camphora), rhizomes64,65 (Zinziber officinale Roscoe), fruits43,12,26 (Piper sp, Pittosporum senacia, Pittosporum viridiflorum), graines48 (Myristica fragrans Houttuyu), pour ne citer que ces exemples. Dans la plante, ces huiles sont synthétisées et accumulées dans des tissus superficiels spécialisés comme les cellules à he, les poils, les poches et les canaux sécreteurs.44,45 La teneur des différents constituants des he varie de façon plus ou moins prononcée selon la partie de la plante considérée et la période de récolte. Quantitativement, les teneurs en he sont très faibles, souvent inférieures à 1%. Dans des cas rares, quelques plantes comme le Giroflier (bouton floral), présentent des teneurs fortes (15%).45
Conclusion partielle sur la composition chimique de he PPS
Les travaux réalisés sur CWX et OV1 d’une part, et sur RTX-5MS et HP5 d’autre part, qui sont complémentaires, ont conduit à l’hypothèse finale d’attribution de quatorze (14) pics dont la teneur correspond à 75,1 % de celle des composants de he PPS. Il faut noter en premier lieu l’absence remarquable du myrcène. D’après les travaux antérieurs, ce composé serait un des « marqueurs » des he du genre Pittosporum. La grande originalité de he PPS vient de la présence des composés ci-après :
– le 5-cyclohexylpentane 6
– l’aristolène 18, un sesquiterpène
– les trois composés aldéhydiques 15, 23 et 19, composant majoritaire
– l’α-muurolylformiate qui n’ont pas été identifiés dans les autres huiles de Pittosporum déjà étudiées.
A eux seuls, les trois aldéhydes arrivent à 37,0 % de la composition totale. Ils caractérisent de façon remarquable he PPS. A notre connaissance, la présence du formiate de α-muurolyle est décrite pour la première fois.
Remarque : Lors des analyses, on a pris en compte le fait que les colonnes OV1,37 DB5,38 RTX-5MS, HP5 sont équivalentes quant à leur polarité. Il s’agit, en effet, des colonnes apolaires.
Chromatographie liquide à basse pression (clbp)
La clbp pour le fractionnement de l’he totale en HY et PO a été réalisée en utilisant une burette de 25 ml (cnapmad), de diamètre 1,5 cm. L’adsorbant employé est le silicagel 60 F254 Merck (5g) de granulométrie 0,040-0,063 mm (230-400 mesh astm). Les solvants d’élution employés sont l’éther de pétrole (50-70°C) pour analyses Riedel-De Haên AG SeelzeHannover et l’éther diéthylique rectifié, pur, de référence A 480 1051. La régularité de la chromatographie dépend de l’homogénéité de la phase stationnaire. Le remplissage de la colonne par celle-ci est donc une opération très importante.
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Table des matières
Introduction
Chapitre I
I.1. Description Botanique
I.2.Travaux Chimiques Antérieurs sur le genre Pittosporum
Chapitre II : Travaux Personnels
II.1.Criblage Phytochimique
II.1.1. Généralités
II.1.2. Criblage des Alcaloïdes
II.1.2.1. Généralités
II.1.2.2. Résultats
II.1.3. Criblage des Flavonoïdes et des Leucoanthocyanes
II.1.3.1. Généralités
Test de Wilstater
Test de Bate-Smith
II.1.3.2. Résultats
II.1.4. Criblage des Tanins et Polyphénols
II.1.4.1. Généralités
Tanins hydrolysables
Tanins non hydrolysables
II.1.4.2. Résultats
II.1.5. Criblage des Anthraquinones
II.1.4.2. Généralités
II.1.4.2. Résultats
II.1.6. Criblage des Stérols insaturés et des Triterpènes
II.1.4.2. Généralités
II.1.4.2. Résultats
II.1.7. Criblage des Cardénolides et Bufadiénolides
II.1.4.2. Généralités
II.1.4.2. Résultats
II.1.8. Criblage des Saponines
II.1.4.2. Généralités
II.1.4.2. Résultats
II.1.9. Criblage des Hétérosides Cyanogénétiques
II.1.4.2. Généralités
II.1.4.2. Résultats
II.1.10. Criblage des Polysaccharides
II.1.4.2. Généralités
II.1.4.2. Résultats
II.1.11. Criblage des Coumarines
II.1.4.2. Généralités
II.1.4.2. Résultats
II.1.12. Conclusion partielle sur le criblage phytochimique
II.2.Etude Chimique de HE PPS
II.2.1. Généralités sur les he
II.2.1.1. Co .2.1.1. Composition chimique
II.2.1.1.1. Terpénoïdes
II.2.1.1.2. Composés aromatiques
II.2.1.2. Extractions
II.2.1.2.1. Généralités
Hydrodistillation simple
Distillation à vapeur saturée
Hydrodiffusion
II.2.1.2.2. Résultats
II.2.2. Méthodes d’Analyse Physico-chimiques et Spectrales
II.2.2.1. Introduction
II.2.2.2. Méthodes d’analyses physico-chimiques
II.2.2.2.1. Caractéristiques Organoleptiques
Généralités
Résultats
II.2.2.2.2. Caractéristiques Physiques
Généralités
Résultats
II.2.2.3. Méthodes Chromatographiques
II.2.2.3.1. ccm
II.2.2.3.2. clbp
II.2.2.3.3. cpg
II.2.2.4. Méthodes Spectrales
II.2.2.4.1. sm
Couplage cpg/sm
Type de fragmentation
II.2.2.4.2. ir
ft-ir
Couplage cpg/ft-ir
II.2.2.4.3. rmn
Rappels sur la rmn classique 1D
rmn à onde continue
rmn à impulsion
Effets inductifs
Effets mésomères
Anisotropie magnétique
II.2.3. Analyse Chimique de he PPS
II.2.3.2. Expériences préliminaires de détection de composés terpéniques
II.2.3.2. Travaux sur colonnes CWX et OV-1
II.2.3.2.1. Introduction générale
II.2.3.2.2. Expérience sur colonne CWX
II.2.3.2.3. Expériences sur colonne OV-1
expérience 1
expérience 2
II.2.3.2.4. Fractionnement
Discussion
II.2.3.3. Travaux sur colonnes RTX-5MS et HP5 : gc/ms, gc/ft-ir
II.2.3.3.1. Couplage gc/ms : RTX-5MS
II.2.3.3.2. Couplage gc/ft-ir : HP5
Discussion-conclusion partielle sur la composition chimique de he PPS
Chapitre III : Analyse des données spectrales
III.1.Détermination ination de struc de structure des composés majoritaires joritaires 19 et 6 de he PPS
III.1.1. Analyse par sm et ft-ir
III.1.1.1. Composé 19
Spectre sm
Spectre ft-ir
III.1.1.2. Composé 6
Spectre sm
Spectre ft-ir
Adduits ou Associations ions-moléculaires
III.1.2. Analyse des spectres de rmn 1H 1D
III.2.Essai d’Interprétation des Spectres terprétation des Spectres sm des Composés 5 et 18
III.2.1. Interprétation de quelques fragments du composé 5 : n-Undécane
III.2.2. Interprétation de quelques fragments du composé 18 : Aristolène
Conclusion Conclusion partielle sur partielle sur les résultats résultats des analyses nalyses de don de données spectrale spectrales en ms, ft-ir, rmn
Conclusion générale
Partie Expérimentale
I.Criblage Phytochimique
Préparation des extraits bruts hydroalcooliques
1. Criblage des Alcaloïdes
2. Criblage des Flavonoïdes et des Leucoanthocyanes
3. Criblage des Tanins et Polyphénols
4. Criblage des Anthraquinones
5. Criblage des Stéroïdes et Terpénoïdes
5.1.Criblage Criblage des Stérols insaturés et urés et Triterpènes
5.2.Criblage des Cardénolides et Bufadiénolides
6. Criblage des Saponines
7. Criblage des Hétérosides Cyanogénétiques
8. Criblage des Polysaccharides
9. Test des Coumarines
Préparation des réactifs réparation des réactifs de criblage p de criblage phytochimique
Etude Chimique de he PPS
Matériels et Méthodes
Extraction
Caractéristiques physiques
Méthodes Chromatographiques
ccm
clbp
cpg
Analyses par couplage cpg/sm
Analyses par couplage cpg/ft-ir
rmn
Purification du PO majoritaire
Références Bibliographiques
Annexes
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