Soutenance mémoire
Méthodes d’analyses
L’étude de l’aptitude de conservation
Préparation des fruits
Un ensemble de 30 fruits matures et indemnes de blessures ont été sélectionnées, puis marqués, 10 pour P. digitatum, 10 pour P. italicum et 10 comme témoins, ensuite à l’aide d’une balance électrique et d’un pied à coulisse, on a mesuré respectivement le poids et les diamètres de chaque fruit afin de calculer la surface.
Les 30 fruits ont été par la suite désinfectés par trempage dans un sceau contenant l’hypochlorite de sodium 10% et l’eau distillée stérile pendant 2min, suivie d’un rinçage 2 fois dans l’eau distillée stérile seule. A l’intérieur d’une hotte bien désinfecté par l’alcool à brulé, les fruits désinfectés ont été déposé sur un papier absorbant stérile pour séchage sous la hotte à flux laminaire.
Préparation de la suspension conidiale
En conditions aseptiques, une suspension de P. digitatum a été préparé avec de l’eau distillé stérile contenant 0,05% (v / v) de Tween 20 et une culture jeune de P. digitatum âgée de 7 à 14 jours, après agitation par tourbillonnement à l’aide d’un vortex de tube contenant la suspension.La concentration de conidies a été déterminée par comptage dans une cellule de Bürker sous microscope, afin de calculer le facteur de dilution Fd et d’ajuster la concentration à 105 conidies/ml avec de l’eau distillée stérile additionné au Tween (figure11) (Eckert and Brown,1986).La détermination du facteur de dilution Fd se fait par :
– Comptage des spores dans 10 carreaux de chaque coté de la cellule de Bürker pour obtenir 10 valeurs
– Calcul de la moyenne (m) des dix valeurs trouvées – Détermination de la concentration initiale Ci selon la relation; Ci = m x 25 x 104
(conidies/ml) (European Brewery Convention, 2001) – Calcul de facteur de dilution, Fd = Ci/Cf avec Cf = 105 conidies/ml
La suspension de P. italicum a été préparée selon le même protocole en utilisant une culture jeune de P. italicum.
Blessure des fruits et inoculation de l’agent pathogène Toujours sous la hotte et dans des conditions d’asepsie, les fruits après leur séchage ont été blessés au niveau de la zone équatoriale (Cerioni et al., 2012) par un emporte-pièce stérile de 5mm de diamètre, puis ils ont été placés dans des boites en plastique préalablement désinfecté par l’alcool et contenant du papier absorbant stérile imbibé par 3ml de l’eau distillé stérile, pour obtenir une humidité relative au sein des boites.
A l’aide d’une micropipette (P 200µl) et à coté de la flamme, 50µl de la suspension conidiale préparé a été déposé sur chaque blessure (Yu et al., 2009) , ensuite les boites contenant les fruits blessés et inoculés, ont été bien fermés, repérés (date, nom de variété et la souche inoculé) puis incubés à 25 °C pendant 7 jours.
Les fruits utilisés comme témoins ont été manipulé de la même manière, sauf pour l’inoculation, ils ont été inoculé avec 50µl de l’eau distillé stérile contenant 0,05% (v / v) de Tween 20.
Les analyses de qualité
Détermination de la coloration des fruits A fin d’évalué la coloration d’une variété, on prend un échantillon de 10 fruits d’agrumes qui doivent être dépourvus de tous défauts (des brûlures dues au soleil, des dommages causés par des insectes, ou des maladies), qui peuvent affecter le processus normal de maturation. Le tube de projection de lumière d’un colorimètre CR-400/410 a été posé sur l’épiderme d’un fruit et en cliquant sur le bouton de mesure, le résultat comprenant les 3 paramètres a, b et L sera affiché (figure 12) sur l’écran de l’appareil. On prend toujours deux mesure par fruits, les valeurs trouvé on été enregistrer et après détermination de la moyenne de chaque paramètre, l’indice de coloration a été calculé selon la relation :
IC = (2000 x a) / (a² +b²)0,5
L* représente la luminance, soit une opposition de couleur noir-blanc. Les axes a* et b* représentent respectivement les oppositions de couleurs rouge-vert et bleu-jaune (López Camelo et al., 1995).
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Guide du mémoire de fin d’études avec la catégorie les mécanismes de lutte contre Penicillium |
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Table des matières
Introduction générale
Revue bibliographique
I. Généralités sur les agrumes
1. L’origine des agrumes
2. Description des plantes et fruits d’agrumes
3. La taxonomie des agrumes
4. L’écologie des agrumes
5. La production mondiale et marocaine des agrumes
II. La flore d’altération des agrumes
1. Penicillium digitatum
1.1. Définition et systématique
1 1.2. Les Symptômes de développement du champignon
1.3. Cycle biologique et épidémiologie
2. Penicillium italicum
2.1 Description du champignon
2.2. Les Symptômes de développement du champignon
III. Les mécanismes de lutte contre Penicillium
IV. Les mécanismes de défenses des végétaux
1. Les mécanismes de défense des plantes
2. Les mécanismes de défense des agrumes
V. Les analyses de qualité des agrumes
1. La fermeté
2. La couleur
3. La teneur en sucres
4. L’acidité
5. Le rapport sucres/acidité ou coefficient de maturité(E/A)
La partie expérimentale
I. Matériel
1- Matériel végétale
2- Les souches fongiques utilisées
II. Méthodes d’analyses
1. L’étude de l’aptitude de conservation
1.1. Préparation des fruits
1.2. Préparation de la suspension conidiale
1.3. Blessure des fruits et inoculation de l’agent pathogène
2. Les analyses de qualité
2.1 Détermination de la coloration des fruits
2.2. Mesure de fermeté
2.3. Détermination de la teneur en jus
2.4. Détermination de la teneur en sucre ou MSST
2.5. Détermination de l’acidité
2.6. La détermination de l’épaisseur de l’écorce
3. L’effet de traitement curatif et préventif avec ACUADEX C sur P. digitatum et P. italicum
1. Préparation des suspensions conidiales
2. La détermination des CMI
3. Le dosage in vivo (sur fruits)
3.1. Traitement curatif
3.2. Traitement préventif
4. Analyse statistique
Résultats et discussion
I. L’étude de l’aptitude de conservation
1. Détermination des surfaces de nécrose des fruits inoculés par P. digitatum
2. Les surfaces de nécrose des fruits inoculés par P. italicum
II. Les analyses de qualité
1. La teneur en jus
2. La teneur en sucre
3. L’acidité et le coefficient de maturité
4. La fermeté, l’indice de coloration et l’épaisseur de l’écorce
III. L’effet de traitement curatif et préventif avec ACUADEX C sur P. digitatum et P. italicum
1. La détermination des CMI
2. Dosage in vivo
a. Penicillium digitatum
Figure27 : L’aspect des lésions sur les fruits traités par ACUADEX après 7jours d’incubation
b. Penicillium italicum
Conclusion générale
Perspectives
Références bibliographiques
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