Les kystes sarcosporidiens

Diagnostic molรฉculaire chez l’hรดte intermรฉdiaire

Caractรฉristiques morphologiques de la paroi des kystes

Les kystes sarcosporidiens sont contenus dans une vacuole parasitophore dans le cytoplasme de la cellule hรดte (Chen et al., 2011). Sous la membrane de la vacuole parasitophore se trouve une couche de substance fondamentale, dense aux รฉlectrons (Dubey, Fayer, Speer, 1988). Chez S. hirsuta, elle a une รฉpaisseur de 0,7 ร  1 ฮผm (Bowman, Hendrix, Lindsay, Barr, 2002). Et pour S. hominis, 1,5 ฮผm (Domenis et al., 2011). L’ensemble de ces deux structures forme la paroi kystique primaire, celle-ci change avec l’รขge du kyste sarcosporidien (Lindsay, Blagburn, Braund, 1995). Les septa issus de cette couche de substance fondamentale sรฉparent le kyste en diffรฉrents compartiments remplis de bradyzoรฏtes et de mรฉrozoรฏtes. On trouve รฉgalement une paroi secondaire d’origine adventitielle (Euzรฉby 1997).

La paroi primaire porte, sur sa face externe, des formations digitiformes, appelรฉes โ€œcytophanรจresโ€, dont la disposition est propre ร  chaque espรจce de sarcosporidies (Euzรฉby 1997). La paroi des kystes de S. cruzi prรฉsente des formations capilliformes au microscope รฉlectronique ร  transmission. On constate que la paroi des kystes de S. hirsuta prรฉsente des villositรฉs en forme de doigts de gant, d’une longueur de 0,6-1,2 ฮผm et d’une largeur de 0,3-0,4 ฮผm (Bowman et al. 2002) donnant l’aspect d’une bordure ciliรฉe. La paroi a une รฉpaisseur de 5 ฮผm (Pena, Ogassawara, Sinhorin, 2001). On constate รฉgalement que la paroi des kystes de S. hominis prรฉsente des formations arrangรฉes en palissade couvrant la surface du kyste, d’une longueur d’environ 6,8 ฮผm et d’une largeur d’environ 1 ฮผm (Domenis et al., 2011). La paroi a une รฉpaisseur de 6,3 ร  8,8 ฮผm (Pena, Ogassawara, Sinhorin, 2001).

L’IHAT (Indirect Haemagglutination Antibody Test)

L’hรฉmagglutination indirecte (Lunde, Fayer, 1977) est rรฉalisรฉe avec des รฉrythrocytes de mouton ยซย sensibilisรฉsย ยป, c’est-ร -dire ayant รฉtรฉ mis en contact auparavant avec des antigรจnes de Sarcocystis spp., et du sรฉrum de bovin dans des puits de plaques de micro-titration.

Le test utilise des antigรจnes issus des bradyzoรฏtes et des mรฉrozoรฏtes. Ils sont libรฉrรฉs des kystes par une technique de digestion utilisant une solution ร  base de pepsine et de HCl ร  37ยฐC sous agitation magnรฉtique. Puis, la solution de mรฉrozoรฏtes et de bradyzoรฏtes est centrifugรฉe ร  10000 G pendant 30 min. Le surnageant est rรฉcupรฉrรฉ et forme la solution d’antigรจne. La solution d’antigรจne est mise au contact du sรฉrum de bovin ร  tester. Le test est lu aprรจs une incubation de 1h ร  37ยฐC. Les รฉrythrocytes de mouton non ยซย sensibilisรฉsย ยป sont utilisรฉs comme tรฉmoins de contrรดle nรฉgatif (Lunde, Fayer 1977).

La PCR (Polymerase Chain Reaction)

La PCR ou rรฉaction en chaรฎne par polymรฉrase est une technique dโ€™amplification in vitro dโ€™un segment particulier dโ€™ADN ร  partir dโ€™un mรฉlange de sรฉquences. La PCR est basรฉe sur la rรฉpรฉtition de cycles qui amplifient le nombre de sรฉquences. Chaque cycle est constituรฉ de 3 รฉtapes : dรฉnaturation de lโ€™ADN, hybridation des amorces et รฉlongation.

Comme source d’ADN, on peut choisir : un morceau de muscle (Jehle et al., 2009; Morรฉ et al., 2011; Kia et al., 2011), des kystes sarcosporidiens isolรฉs de muscles frais (Dahlgren et al., 2007; Yang et al., 2001; Xiang et al., 2011), une solution de bradyzoรฏtes purifiรฉs (Gรผรงlรผ, Aldemir, Guler, 2004). L’ADN gรฉnomique est isolรฉ, par digestion des bradyzoรฏtes et des mรฉrozoรฏtes avec la protรฉinase K et la trypsine. L’ADN est extrait grรขce ร  une mรฉthode utilisant du phรฉnol-chloroforme (Yang et al., 2001; Li et al., 2002; Gรผรงlรผ, Aldemir, Guler, 2004; Jehle et al., 2009) et une prรฉcipitation ร  l’รฉthanol ou grรขce ร  des kits commerciaux (Domenis et al., 2011; Morรฉ et al., 2011; Morรฉ et al., 2013). La quantitรฉ d’ADN isolรฉe peut รชtre mesurรฉe par un spectrophotomรจtre (Carletti et al., 2013). Pour รฉliminer l’ARN restant, on peut ajouter une ARNase (Gรผรงlรผ, Aldemir, Guler, 2004).

La PCR-RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism)

La technique de la PCR-RFLP se base sur le polymorphisme des longueurs des fragments de restriction. L’utilisation de la PCR-RFLP et de diffรฉrentes endonuclรฉases, comme EcoR1, Taq1, Dra1, Hinf1, Alu1, Pst1, Bcl1, ACC1, Mbo2, Ssp1, Rsa1 et Mbo1 (Yang et al., 2002), ou Fok1, Dra1, Bsl1 et Ssp1 (Jehle et al., 2009), ou Bcl1 et Rsa1 (Morรฉ et al., 2011), sur les produits de l’amplification du gรจne de l’ADN ribosomique 18S, a permis de dรฉterminer le nombre de sites de restriction et la taille des fragments de restriction pour de nombreuses espรจces de sarcosporidies.

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Etude bibliographique
I. Prรฉsentation gรฉnรฉrale
1. Etiologie et cycle รฉvoluti
1.1. Etapes du cycle chez l’hรดte intermรฉdiaire
1.2. Etapes du cycle chez l’hรดte dรฉfinitif
2. Importance mรฉdicale
2.1. Symptรดmes chez l’hรดte intermรฉdiaire : le bovin
2.2. Symptรดmes chez les hรดtes dรฉfinitifs
3. Importance รฉconomique en รฉlevage
3.1. Sarcosporidiose clinique et sub-clinique
3.2. Saisies ร  lโ€™abattoir pour ยซ lรฉsions รฉvoquant la sarcosporidiose ยป
4. Diagnostic
4.1. Diagnostic microscopique chez l’hรดte intermรฉdiaire
4.2. Diagnostic chez l’hรดte intermรฉdiaire de la sarcosporidiose aiguรซ de son
vivant
4.3. Diagnostic molรฉculaire chez l’hรดte intermรฉdiaire
4.4. Diagnostic de troupeau chez les hรดtes intermรฉdiaires
4.5. Diagnostic macroscopique chez l’hรดte intermรฉdiaire : la myosite รฉosinophilique
4.6. Diagnostic chez l’hรดte dรฉfinitif
II. Facteurs de risques de la sarcosporidiose et gestion de ces facteurs de risques
1. Epidรฉmiologie descriptive
2. Facteurs de risque dโ€™infestation des bovins par Sarcocystis spp
2.1. Facteurs de risque liรฉs ร  lโ€™hรดte
2.2. Facteurs de risque liรฉs au parasite : espรจce de Sarcocystis
2.3. Facteurs de risque liรฉs ร  lโ€™environnement
3. Facteurs de risque de dรฉveloppement de lรฉsions de myosite รฉosinophilique
suite ร  lโ€™infestation par Sarcocysti
3.1. Facteurs de risque liรฉs au parasite
3.2. Facteurs de risque liรฉs ร  lโ€™hรดte
3.3. Facteurs de risque liรฉs ร  lโ€™environnement
4. Prophylaxi
4.1. Prophylaxie mรฉdicale
4.2. Prophylaxie sanitaire
Etude expรฉrimentale
I. Etude des facteurs de risque de lโ€™infestation par Sarcocystis spp. dans les รฉlevages de bovins abattus en Midi-Pyrรฉnรฉes
1. Matรฉriel et mรฉthode
1.1. Les prรฉlรจvements dโ€™oesophages en abattoir
1.2. Population dโ€™รฉtude
1.3. Lโ€™histologie
1.4. La PCR
2. Rรฉsultats
2.1. Rรฉsultats de lโ€™examen histologique
3. Discussion sur les prรฉlรจvements dโ€™oesophages ร  lโ€™abattoir
II. Etude des facteurs de risque du dรฉveloppement dโ€™une myosite รฉosinophilique suite
ร  lโ€™infestation par Sarcocystis spp. dans les รฉlevages de bovins abattus en Midi-
Pyrรฉnรฉes
1. Matรฉriel et mรฉthode
1.1. Evaluation de la prรฉvalence de la saisie pour motif ยซ myosite รฉosinophilique รฉvoquant la sarcosporidiose ยป chez les bovins abattus en Midi-Pyrรฉnรฉes
1.2. Evaluation des facteurs de risques possibles de dรฉveloppement dโ€™une
myosite รฉosinophilique suite ร  lโ€™infestation par Sarcocystis spp. des bovins
abattus en Midi-Pyrรฉnรฉes : enquรชte par envoi de questionnaires
1.3. Prรฉlรจvements dโ€™oesophages ร  lโ€™abattoir de bovins provenant
dโ€™exploitations ayant eu des saisies antรฉrieures pour motif ยซ myosite
รฉosinophilique รฉvoquant la sarcosporidiose ยป
2. Rรฉsultats
2.1. Prรฉvalence de la saisie pour motif ยซ myosite รฉosinophilique รฉvoquant la
sarcosporidiose ยป chez les bovins couverts par Intersu
2.4. Etude des facteurs de risque possibles liรฉs ร  la conduite dโ€™รฉlevage
2.5. Etude des facteurs de risque possibles liรฉs ร  lโ€™environnement
2.6. Etude des facteurs de risque possibles liรฉs ร  lโ€™alimentation et ร 
lโ€™abreuvement
2.7. Etude des facteurs de risque possibles liรฉs ร  la prรฉsence de carnivores
domestiques
2.8. Etude des facteurs de risque possibles liรฉs ร  la prรฉsence de la faune
sauvage
2.9. Etude des facteurs de risque possibles liรฉs au mode de vie de lโ€™รฉleveur
2.10. Etude des facteurs de risque possibles liรฉs ร  la situation sanitaire de
lโ€™รฉlevage
2.11. Remarques des รฉleveurs dans les questionnaires
2.12. Apport des visites dโ€™รฉlevage
2.13. Niveau dโ€™infestation par Sarcocystis spp. des bovins provenant
dโ€™exploitations ayant eu des saisies antรฉrieures pour motif ยซ myosite
รฉosinophilique รฉvoquant la sarcosporidiose ยป
3. Discussion sur lโ€™รฉvaluation des facteurs de risques de saisie pour motif
ยซ myosite รฉosinophilique รฉvoquant la sarcosporidiose ยป chez les bovins abattus
en Midi-Pyrรฉnรฉes
3.1. Lโ€™รฉvaluation de la prรฉvalence de la saisie pour motif ยซ myosite
รฉosinophilique รฉvoquant la sarcosporidiose ยป chez les bovins abattus en
Midi-Pyrรฉnรฉes
3.2. Le choix du type dโ€™enquรชte pour รฉvaluer les facteurs de risque de saisie
pour motif ยซ myosite รฉosinophilique รฉvoquant la sarcosporidiose ยป chez
les bovins abattus en Midi-Pyrรฉnรฉes
3.3. Le biais de sรฉlection des รฉleveurs de lโ€™รฉtude et la rรฉponse au
questionnaire
3.4. Le biais de classement des รฉleveurs de lโ€™รฉtude
3.5. Lโ€™รฉtude de lโ€™exposition aux matiรจres fรฉcale
3.6. Lโ€™รฉvaluation de la prรฉdisposition gรฉnรฉtique
3.7. Lโ€™รฉvaluation du niveau dโ€™infestation par Sarcocystis spp. des bovins
provenant dโ€™exploitations ayant eu des saisies antรฉrieures pour motif
ยซ myosite รฉosinophilique รฉvoquant la sarcosporidiose ยป
3.8. Discussion sur lโ€™analyse statistique
Conclusion
Bibliographie

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