Les Hémopathie malignes

Les Hémopathie malignes

Cytogénétique

La cytogénétique est une science qui s’intéresse aux chromosomes .En général, la cytogénétique a pour but de détecter les anomalies chromosomiques constitutionnelles ou acquises grâce à des techniques microscopiques (techniques de bandes, techniques de cytogénétique moléculaire) ou de biologie moléculaire, afin d’établir un diagnostic biologique et d’assurer un conseil génétique. Ces anomalies peuvent être de nombre (plus ou moins de 46 chromosomes), de structure (modification dans la succession de plusieurs locus) ou de réparation (cassures chromosomiques).

Prélèvement sanguin

Le prélèvement sanguin est effectué dans des conditions stériles. L’étude est réalisée sur des patients atteints. Dans le cas d’une leucémie avec envahissement de blastes, le sang périphérique sera mis en culture si le nombre des GB est supérieur à 20%. Le prélèvement de 5ml de sang veineux périphérique est mis dans un tube hépariné qui peut se conserver à 4°C pour une durée de 24h ou bien mis en culture le même jour. L’ensemencement se fait en fonction du numéro de la formule sanguine (NFS).

Prélèvement médullaire

Il se fait par le clinicien en milieu hospitalier à l’aide d’un trocart qui permet de percer l’os du sternum (figure 27). Le clinicien va aspirer 6 ml de sang médullaire à l’aide d’une seringue. Huit gouttes de ce prélèvement seront étalées immédiatement sur des lames pour effectuer le myélogramme. Le reste sera mis dans un tube sec ou EDTA de 5ml, puis transporté vers le laboratoire de génétique pour le caryotype ou la FISH.

Dénaturation-coloration

Les lames sont laissées vieillir pendant quatre jours à 37°C : Le vieillissement a pour but de parfaire la déshydratation cellulaire et la fixation. Au quatrième jour après l’étalement, la dénaturation thermique est effectuée dans la solution Earl à 87°C pendant 45mn. Puis, une coloration avec du Giemsa 5% est réalisée pendant 8 minutes. Des bandes R (reverses) sont alors obtenues. Les techniques de banding chromosomique permettent de caractériser chaque chromosome par la présence de bandes. Chaque bande est définie comme une partie de chromosome distinguée des segments adjacents par l’apparition de segments plus sombres ou plus clairs à l’aide d’une ou plusieurs techniques de banding. Une bande paraissant sombre avec une technique donnée peut apparaître claire avec une autre technique. Par exemple les bandes R sont obtenues après dénaturation thermique ménagée des chromosomes puis Giemsa.

Les résultats de la cytogénétique moléculaire (FISH)

La première indication de la FISH est la discordance entre les données du caryotype (qui n’identifie pas de Ph+) et les autres données biologiques, qui sont compatibles avec le diagnostic de LMC. La mise en évidence d’un gène hybride BCR-ABL par FISH confirmera alors le diagnostic de la LMC, donc cette technique présente comme avantage la détection des chromosomes Philadelphie «masqués» non visualisés par la cytogénétique conventionnelle. Sa sensibilité est meilleure que la cytogénétique conventionnelle en particulier avec les sondes double fusion.
Les sondes spécifiques BCR et ABL sont choisies en fonction de leur position par rapport au point de cassure, Dans le laboratoire, la sonde «Vysis LSI BCR/ABL Dual Color,
Single Fusion Translocation Probe Set» est utilisée (Figure 40 ), son diagnostic repose sur la détection par fluorescence du gène de fusion BCR-ABL.

Cytogénétique classique

La cytogénétique conventionnelle est une technique simple, permettant le diagnostic de 95% des cas de LMC et le suivi des patients traités en corrélation avec l’évolution clinique. Elle présente en outre l’avantage de dépister des anomalies secondaires importantes pour le pronostic des malades telles la trisomie 8 ou 19, la duplication du Ph, la présence d’un isochromosome 17. (24)
Dans notre série d’étude, la translocation t(9;22)(q34;q11) est retrouvée dans 78,05% de nos patients ce pourcentage est faible par rapport aux données de la littérature.(24) En ce qui concerne les 3 translocations complexes, elles correspondent à 3 patients dont le myélogramme indique que les 3 patients sont en phase chronique. Ces caryotypes complexes restent un résultat de mauvais pronostics qui ne confortent pas la littérature qui établit que parmi les critères clino-biologiques de la phase d’accélération, les anomalies surajoutées sont présentes.
La cytogénétique conventionnelle permet de détecter les anomalies secondaires importantes pour le pronostic des patients. (24) Dans le cas des trois translocations variantes retrouvées dans notre série d’étude, elles ont été détectées par un simple caryotype sans faire appel à d’autres techniques complémentaires ou performantes telle que la FISH.

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Introduction
Etude bibliographique
1. Cytogénétique
1-1) Historique
1-2) Cytogénétique classique
1-2-1) Caryotype normal
1-2-2) Anomalies du caryotype
i. Anomalie de nombre
Anomalie de structure
a- Iso-chromosome
b- Duplication
d- Inversion
e- Translocation
1-3) Cytogénétique moléculaire
1-3-1) Principe
2. Les Hémopathie malignes
2-1) Rappel : L’hématopoïèse
2-2) Définition
i’. Lignée myéloïde
a) LMC
b) LAM
c) SMD
ii’. lignée lymphoïde
a’. LAL
b’. LLC
Matériel et méthodes
Résultats et Discussion
Discussion
Résumé
Référence