LE VIRUS RESPIRATOIRE SYNCYTIAL BOVIN

LE VIRUS RESPIRATOIRE SYNCYTIAL BOVIN

Propriétés physico-chimiques

Le VRSB est un virus très peu résistant dans le milieu extérieur. Il est sensible au pH acide (pH < 4), à l’éther, au chloroforme, au deoxycholate de sodium à 0.1% et à la trypsine à 0.25%, ainsi qu’à de nombreux solvants huileux.C’est un virus thermolabile ; en effet, l’infectiosité du virus est détruite en 30 minutes à 56°C et en quelques heures à 37°C (Paccaud, et Jacquier, 1970; Smith, 1975). D’autre part, elle diminue peu à peu en quelques semaines lorsque le virus est stocké à – 20°C, alors qu’elle est stable plusieurs mois au-dessous de – 50°C ou à – 196°C (Inaba et al., 1973). Plusieurs congélations et décongélations successives détruisent le virus (Larsen, 2000). Cette fragilité du VRSB explique le rôle prépondérant du contact direct dans la transmission et la difficulté de l’isoler à partir des prélèvements réalisés pour le diagnostic car ce virus est très fortement lié aux cellules (Fields Virology, 5th edition, 2006).
Le VRSB n’a pas de propriétés d’hémadsorption et d’hémagglutination (Richman et al., 1971).
Un grand nombre de cultures cellulaires peut être infecté par le VRSH, mais il semble que la spécificité cellulaire soit plus restreinte pour le VRSB. Le VRSB se réplique dans de nombreux types de cellules (rénales, testiculaires, thyroïdiennes, du thymus, duodénales, rectales) d’origine bovine (Openshaw, 1995). Après adaptation en cultures cellulaires, il peut aussi être multiplié sur cellules provenant de porc (plus précisément de rein d’embryon), d’hamster (rein, poumons), de singe (souche Vero) et d’origine humaine (poumons et reins embryonnaires, souche Hela, souche Hep-2). Les conditions de cultures dépendent des cellules, la plupart du temps à 37°C et à pH 7.2. Le titre maximal relevé varie entre 104 et 106 Unité Formant Plage (UFP) par ml (Horzinek, 1990).

Les protéines non structurales NS1 et NS2

Ces protéines non structurales sont caractéristiques des Pneumovirus au sein de la famille des Paramyxoviridae. Les gènes de ces deux protéines sont abondamment transcrits dans les cellules infectées mais NS1 et NS2 sont détectées en faible quantité dans les virions purifiés. Elles ne sont pas indispensables à la réplication in vitro, bien que la croissance de VRSH et VRSB recombinants délétès des gènes NS1/NS2 soit réduite.
Le gène codant pour la NS1 est constitué de 524 bases, il code pour une protéine de 136 acides aminés et de poids moléculaire d’environ 15 kDa (Pastey, et al., 1995). Le gène codant pour la NS2 est constitué de 488 nucléotides, il code pour une protéine de 124 acides aminés dont le poids moléculaire est de 14.5 kDa (Evans, et al., 1996; Mallipeddi, et al., 1990). Leurs séquences ont été déterminées chez le VRSH et chez le VRSB ; il apparaît que les pourcentages de conservation au niveau nucléotidique entre ces deux virus sont compris entre 65 et 67% pour la NS1 et entre 67 et 69% pour la NS2 (Pastey, et al., 1995). Des études ont montré que ces NS1 et NS2 jouent un rôle majeur dans l’inhibition de la réponse cellulaire par les interférons de type I (Teng et al., 1999).

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PREMIERE PARTIE : ETUDE BIBLIOGRAPHIQUE
I. LE VIRUS RESPIRATOIRE SYNCYTIAL BOVIN : UN PNEUMOVIRUS
I.1 Taxonomie
I.2 Propriétés physicochimiques
I.3 Structure
I.4 Génome
I.5 Protéines virales
I.5.1 Les protéines non structurales
· NS1et NS2
I.5.2 Les protéines d’enveloppe
· la protéine de fusion F
· la glycoprotéine G
· la protéines SH (Smal Hydrophobic)
I.5.3 Les protéines de nucléocapside
· la nucléoprotéine N
· la phosphoprotéine P
· la polymérase L
I.5.4 les protéines de matrice
· la protéine M
· le facteur d’anti-terminaison M2-1 et le facteur de régulation M2-2
I.6 Cycle de réplication
I.6.1 Attachement et entrée du virus
I.6.2 Transcription et traduction
I.6.3 Réplication de l’ARN
I.6.4 Assemblage des virions
II. L’INFECTION PAR LE VRSB
II.1 Epidémiologie
II.1.1 Espèces sensibles
II.1.2 Prévalence de l’infection
II.1.3 Mortalité et morbidité chez les bovins
II.1.4 Les voies de transmission
II.1.5 Saisonnalité de l’infection et persistance virale
II.2 Signes cliniques
II.3 Lésions
II. 3.1 Lésions macroscopiques
II.3.2 Histopathologie
II.4 Diagnostic
II.4.1 Animal vivant
· sérologie : recherche indirecte
· virologie : recherche directe
II.4.2 Animal mort
II.5 Prévention médicale
II.5.1 Problèmatique de la vaccination contre le VRSB
II.5.2 Les vaccins contre le VRSB
II.5.3 La recherche et les futurs vaccins
III.PATHOGENIE DE L’INFECTION
III.1 Les modèles expérimentaux
III.1.1 Intérêts
III.1.2 Les différentes espèces modèles d’étude du VRSH
· Le modèle souris
· Les chimpanzés et macaques
· Les ovins
· Les bovins
III.1.3 Protocoles expérimentaux d’infection des veaux par le VRSB
· Animaux
· Origine et choix des souches
· Inoculation
· Paramètres de suivi
· Apports à l’étude du virus respiratoire syncytial bovin
III.2 Pathogénie de l’infection par le virus respiratoire syncytial bovin
III.2.1/ Cinétique de l’infection
III.2.2/ Tropisme cellulaire
III.2.3 La réponse non spécifique de l’hôte à l’infection naturelle
III.2.4 La réponse immunitaire spécifique
III.2.5 Immunopathogénie induite par la vaccination
III.3 Facteurs favorisant la maladie
III.3.1 Facteurs liés à l’environnement
· Facteurs d’ambiance
· Facteurs climatiques et géographiques
· Gestion des lots
III.3.2/ Facteurs liés à l’hôte
· Prédisposition de l’espèce bovine aux affections respiratoires
· Race et conformation
· Statut immunologique et sur-infections bactériennes
· Facteurs génétiques
· Age
III.3.3 Facteurs de virulence du VRSB
· étude de la variabilité du virus
· Mécanismes moléculaires de la variabilité génétique des virus à ARN
· Implications biologiques de la variabilité du VRSB
DEUXIEME PARTIE : ETUDE EXPERIMENTALE
I. OBJECTIFS
II. MATERIEL ET METHODES
II.1 Lignées et cultures cellulaires
II.2 Isolement des virus VRSB
II.2.1 Isolement des souches de terrain
II.2.2 Souches virales
II.3 Séquençage
II.3.1 Extraction de l’ARN et étape rétrotranscription
II.3.2 Amplification de l’ADNc viral
II3.3 Méthode de séquençage et analyse des séquences
II.4 Expérimentation animale
II.4.1 Animaux
II.4.2 Protocole expérimental
II.4.3 Suivi expérimental
· Suivi clinique
· Suivi virologique
· Suivi sérologique
III. RESULTATS ET DISCUSSION
III.1. Stratégie de séquençage
III.1.1 Choix des souches
III.1.2 Stratégie de séquençage
III.2 Analyse du génome viral
III.2.1 Organisation générale
III.2.2 Etude comparative du génome viral
III.3 Analyses des séquences amino-acides déduites
III.3.1 Organisation générale
III.3.2 Degrés de parenté entre les ORF du VRSB
III.3.3 Substitutions synonymes/non synonymes
III.4 Etude comparative du pouvoir pathogène
III.4.1 Suivi clinique
III.4.2 Virologie
III.4.3 Réponse sérologique
III.4.4 Discussion sur les expérimentations animales
CONCLUSION GENERALE
ANNEXES
BIBLIOGRAPHIE