Le fractionnement des protéines sériques

RAPPELS SUR LA STRUCTURE DES PROTEINES

Les protéines sont des macromolécules composent d’un enchaînement linéaire d’acides aminés liés par des liaisons peptidiques, chaque protéine se caractérise par sa longueur, son poids moléculaire et sa composition en aminoacides. On distingue quatre niveaux stades structuraux chez les protéines : La structure primaire d’une protéine correspond à la succession linéaire des acides aminés formant entre eux des liaisons peptidiques entre la fraction acide carboxylique de l’un et la fonction amine du suivant. La structure secondaire est caractérisée par plusieurs motifs structuraux (hélice α; feuillet β, etc..) dont la propriété principale est de stabiliser la structure de la protéine par un caractère répétitif de liaisons (hydrogènes, électrostatiques…) intra chaîne.

La structure tertiaire d’une protéine correspond au repliement de la chaîne polypeptidique dans l’espace. On parle de structure tridimensionnelle, ou structure 3D. La structure quaternaire des protéines regroupe l’association d’au moins deux chaînes polypeptidiques – identiques ou non – par des liaisons non covalentes, mais rarement par des ponts disulfures, qui ont pour rôle de créer les liaisons inter chaîne.

Caractéristiques et propriétés générales des immunoglobulines (Ig) :

On distingue 5 classes des immunoglobulines (IgG, IgA, IgM, IgD, IgE) qui différent par leur poids moléculaire, leur charge, leur composition en acides aminés et en sucre. Ces classes sont divisées en sous classes : IgG (1, 2, 3,4) – IgA (1,2) – IgM- IgD- IgE. Chaque classe d’Ig possède des propriétés biologiques propres :

Les IgG sont produites lors d’un contact avec un antigène qui se prolonge ou lors d’un second contact de l’organisme avec un antigène. Elles jouent un rôle primordial dans la défense de l’organisme contre les maladies infectieuses : chez l’adulte, elles représentent la majorité des immunoglobulines; pendant la grossesse, les IgG1, IgG3 et IgG4 sont les seules immunoglobulines capables de traverser le placenta grâce à la présence de récepteurs spécifiques de ces immunoglobulines sur le placenta. Elles jouent donc un rôle primordial dans la défense du foetus et du nourrisson contre les infections.

Les IgA représentent la classe principale des anticorps présents dans la salive, les larmes, le lait et les sécrétions muqueuses. Elles constituent donc la première ligne de défense locale contre les agents infectieux.

Les IgM sont les premiers anticorps synthétisés au cours de la réponse immunitaire. Leur présence est transitoire dans les réponses immunitaires. Cette propriété permet de faire le diagnostic de certaines primo-infections. De la même façon, la présence d’IgM spécifiques dans le sang de l’enfant à la naissance permet de faire le diagnostic d’infection congénitale, puisque les IgM maternelles ne traversent pas le placenta.

Les IgD sont en concentration faible dans le sérum (environ 10 fois moins d’IgD que d’IgM). Elles ont comme les IgM, la propriété d’apparaître à la surface des lymphocytes B en voie de différenciation.

Les IgE sont présentés à l’état de traces dans le sérum. Elles jouent un rôle bénéfique dans l’immunité antiparasitaire et un rôle néfaste dans un certain type d’allergie (hypersensibilité).

Bloc bêta gamma

Le profil électrophorétique montre une fusion des fractions bêta et gamma (bloc bêta gamma) avec un aspect en “dos de chameau, liée à l’augmentation de la synthèse des IgA et des IgM, qui dépasse celle des IgG et qui se positionne à l’électrophorèse dans la zone entre les bêta et gamma globulines. Ce profil peut expliquer les pathologies suivantes : Hépatites chroniques virales, Hépatites médicamenteuses, cirrhose alcoolique ou cirrhose à un stade avancé. Hyper alpha 2 important lié à l’augmentation de l’2-macroglobuline, associée à une hypoprotidémie sévère due à la fuite rénale et à une protéinurie massive.

Ce profil est obtenue lors : d’une néphropathie diabétique, un néphrose lipoïdique ou une lésion rénale. UTILISATION : L’HYDRAGEL 7 ß1-ß2 est le gel d’agarose qui permet la séparation en tampon alcalin (pH= 8,5) des protéines du sérum humain par électrophorèse dans le système semiautomatique HYDRASYS. Les protéines du sérum normal humain sont séparées en six fractions majeures. Le système HYDRASYS permet de réaliser toutes les séquences jusqu’à l’obtention du gel prêt pour l’analyse qualitative ou quantitative. Les protéines séparées sont colorées par une solution d’amidoschwarz et l’excès du colorant est éliminé en milieu acide. Les profils électrophorétiques sont analysés visuellement pour détecter les anomalies. La densitomètre donne une quantification relative précise de chaque zone individualisée. Chaque gel d’agarose du kit HYDRAGEL est prévu pour l’analyse de 7 échantillons ou patients.

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Table des matières

Présentation du lieu de stage
Introduction
BIBLIOGRAPHIE
I.Généralités sur les protéines sériques1- Définition
2- Rappels sur la structure des protéines
3- Fonctions des protéines sériques
4- Le fractionnement des protéines sériques
4.1- Albumine
4.2- les globulines
4.2.1- les alpha globulines
4.2.2- les bêta globulines
4.2.3- les gammaglobulines
a) caractéristiques et propriétés générales des immunoglobulines
b) la structure des immunoglobulines
II.Généralités sur l’électrophorèse des protéines sériques
1- Historique de l’électrophorèse
2- Définition et principe
3- Interprétation d’un protéinogramme sérique
3.1- Variations physico- pathologiques de la protidémie
3.2- Interprétation d’un protéinogramme du sérum humain normal
3.3- Interprétation illustrée des principaux profils électrophorétiques anormaux
III. Immunofixation
1- Définition
2- Généralités sur les gammapathies monoclonales
2.1- Etiologies des gammapathies monoclonales
2.2- Les immunoglobulines monoclonales
3- Interprétation d’un profil d’immunofixation
MATERIELS ET METHODES
I.Le stade pré analytique
II.Le stade analytique
1- Les matériels utilisés
a) les automates utilisés
b) Composition des kits utilisés
c) Autres réactifs utilisés
2- Les techniques à réaliser
2.1- Dosage des protéines sériques
2.2- l’électrophorèse des protéines sériques
2.3- l’immunofixation
2.4- Outils statistiques
RESULTATS ET DISCUSSION
1- Répartition selon le sexe des patients
2- Répartition selon l’âge des patients
3- Répartition selon les services
4- Répartition selon le profil électrophorétique
4.1- Répartition selon les profils anormaux
4.2- Répartition selon le type d’inflammation
4.3- Répartition selon les gammapathies
Discussion
Conclusion
Références bibliographiques