Soutenance mémoire
La perméabilité des plateaux vertébraux
La conservation des échantillons
Dans leur étude sur les disques ovins, Costi et coll.18 ont remarqué qu’après 4 à 5 heures, les échantillons conservés dans l’eau à 37°C commençaient à présenter des signes de décomposition. De plus, leurs propriétés mécaniques étaient modifiées dès la 8ème heure. Denmême, Rodrigo et coll.60 ont montré que la viabilité des chondrocytes conservés à + 4°C sansnmilieu de culture était rapidement limitée (100% à 6 h, puis 80% à 12 h, 70 % à 24 h puis chute rapide à moins de 50%). Malinin et coll.40 confirment qu’après 20 jours de conservation à + 4°C dans un milieu de culture apparaissent des lésions tissulaires.Traditionnellement, on utilise le lactate de Ringer comme solution de conservation desnéchantillons ostéo-chondraux, mais il semble qu’il soit préférable de conserver les échantillons à + 4°C dans un milieu de culture stérile amenant les nutriments nécessaires au métabolisme des chondrocytes74. Ce milieu doit être changé toutes les 48 à 72 heures, pour permettre un apport régulier de nutriments et une élimination des enzymes de dégradation des chondrocytes venant à mourir. Wayne et coll.71, ont pu conserver des échantillons ostéochondraux jusqu’à 60 jours à + 4°C dans une solution de conservation standard changée deux fois par semaine13. Ils n’ont pas trouvé de différences significatives des propriétés mécaniques ou biochimiques (quantité et distribution des Pg) à l’exception du métabolisme cellulaire qui diminue de façon très importante au 60ème jour. Ils ont montré par ailleurs que la conservation dans un milieu de culture à 37 °C induisait des lésions tissulaires contrairement à ce que certains ont pu observer60. Les résultats de Wayne et coll. sont confirmés par Williams et coll.74 qui ont démontré que le mode de conservation à +4°C maintenait les chondrocytes en vie ; une différence significative du nombre et de la densité de chondrocytes viables n’apparaissant qu’après 14 jours de conservation. Leur métabolisme chute significativement lui aussi à partir du 14ème jour sans qu’il y ait de modification de la quantité de Pg au niveau de la matrice cartilagineuse des échantillons. L’ensemble de ces études nous rassurent quant à la possibilité de réaliser des mesures sur des spécimens considérés comme étant à l’état frais jusqu’à une durée de 14 jours à compter du prélèvement.
On retrouve, dans la littérature8,9,74, des résultats contradictoires concernant l’influence de la congélation des échantillons sur les résultats des expérimentations . L’origine des différences retrouvées n’est pas encore bien élucidée. Il semble que la congélation puisse produire des dommages tissulaires par formation de cristaux de glace et mort cellulaire. Les cellules, en relarguant leurs enzymes dans la matrice extra-cellulaire, détériorent les Pg du cartilage et perturbent la perméabilité. Les altérations des Pg, induites par la congélation, sont similaires à celles retrouvées au niveau des disques âgés (augmentation de la proportion de Pg de petite taille9).
Williams et coll.74 ont montré que la congélation à – 80°C tuaient les chondrocytes.Ces observations ont été confirmées par les travaux de Enneking et Campanacci23,24. Bass et coll. (1997)9 ont étudié l’effet de la congélation (à –20 °C sans liquide de conservation pendant 14 jours) sur les propriétés biomécaniques de disques de porc. Ils ont ainsi montré que la congélation modifiait de façon très importante les propriétés mécaniques des échantillons ; la perméabilité des disques congelés était 82% plus importante que celle examinée à l’état frais et la pression de gonflement des disques 25% plus faible. De plus, Bass a pu constater en réalisant une série de 5 mesures consécutives sur chaque échantillon congelé que, même si la première mesure est proche de celle retrouvée sur le spécimen frais, les autres mesures divergent et ce d’autant plus que l’on répète les cycles avec des valeurs de plus en plus importantes ce qui semble prouver que cette différence de comportement est sous-tendue par des lésions tissulaires.Ainsi, la majorité des auteurs s’accordent sur l’utilisation de cryoprotecteur ou des techniques de congélation plus perfectionnées 40,60,62,65,66,71,74 qui évitent la formation de cristaux de glace et préviennent le choc osmotique induit par la déshydratation cellulaire lors de la congélation. Tomford et coll.66 ont étudié la toxicité des cryoconservateurs et ont montré que le glycérol était plus toxique que le DMSO (DiMéthyl SulfOxyde). Le meilleur taux de survie est alors obtenu grâce à une phase de pré-congélation par immersion des spécimens dans une solution de concentration en DMSO de 4 à 12 % pendant quelques minutes, suivie d’une diminution lente en température qui permet l’établissement d’un équilibre des milieux extra et intracellulaires et évite ainsi les lésions cellulaires. Il n’a pas été prouvé qu’une congélation à – 196°C soit plus efficace qu’à – 80°C62.
En ce qui concerne la décongélation, les auteurs pratiquent pour la plupart une décongélation rapide à température ambiante, dans une solution de Ringer (avec ou sans DMSO) à laquelle sont ajoutés des inhibiteurs des collagénases ou des métalloprotéinases 27,62,74. Ceci semblerait améliorer les résultats en évitant la dégradation de la matrice cartilagineuse par les enzymes relarguées lors de la mort cellulaire.
Néanmoins, ces notions ne sont applicables qu’aux chondrocytes isolés. Le problème semble plus complexe pour le cartilage car intervient la matrice extra-cellulaire qui constitue un obstacle à la diffusion du DMSO66, ce qui induit des taux de survie plus faibles lors de la conservation de pièces anatomiques62. Cependant, une étude colorimétrique a montré65 que le DMSO peut diffuser à l’ensemble d’échantillons ostéochondraux de taille conséquente en moins de 2 heures.
|
Guide du mémoire de fin d’études avec la catégorie Médecine Vétérinaire |
|
Étudiant en université, dans une école supérieur ou d’ingénieur, et que vous cherchez des ressources pédagogiques entièrement gratuites, il est jamais trop tard pour commencer à apprendre et consulter une liste des projets proposées cette année, vous trouverez ici des centaines de rapports pfe spécialement conçu pour vous aider à rédiger votre rapport de stage, vous prouvez les télécharger librement en divers formats (DOC, RAR, PDF).. Tout ce que vous devez faire est de télécharger le pfe et ouvrir le fichier PDF ou DOC. Ce rapport complet, pour aider les autres étudiants dans leurs propres travaux, est classé dans la catégorie PLATEAUX VERTEBRAUX où vous pouvez trouver aussi quelques autres mémoires de fin d’études similaires.
|
Table des matières
RÉSUMÉ
INTRODUCTION
PARTIE 1 : ETUDE BIBLIOGRAPHIQUE GÉNÉRALE
1.1. Le disque intervertébral
1.1.1. Développement et croissance
1.1.2. Composition biochimique et structure histologique
1.2. Le plateau vertébral
1.2.1. Structure et composition
1.2.2. Vascularisation
1.3. La perméabilité des plateaux vertébraux
1.3.1. Analyse qualitative
1.3.2. Analyse quantitative
1.3.3. Comparaison avec le cartilage articulaire
1.3.4. Evolution avec l’âge
1.4. Pré-requis expérimentaux
1.4.1. Choix d’un modèle animal
1.4.2. Conservation des échantillons
1.4.3. Les différentes méthodes de mesure de la perméabilité
PARTIE 2 : MATÉRIELS ET MÉTHODES
2.1. Matériels
2.2. Méthodes et dispositif de mesure
2.3. Etude histomorphométrique
2.3.1. Dispositif expérimental
2.3.2. Mesure et traitement des données
2.3.3. Validation du processus de mesure
PARTIE 3 : RÉSULTATS
3.1. Mesures des perméabilités
Mesure de la perméabilité des plateaux vertébraux
3.2. Etude histomorphométrique
PARTIE 4 : DISCUSSION
CONCLUSION
RÉFÉRENCES BIBLIOGRAPHIQUES
Télécharger le rapport complet
