DรNOMINATION – TAXONOMIE – MORPHOLOGIE
ย ย ย ย ย ย ย ย ย ย Aythya innotata, de son nom scientifique, est dรฉsormais appelรฉ fuligule de Madagascar pour le nom vernaculaire en franรงais, Madagascar pochard en anglais, Onjy en malagasy pour les hautes terres ainsi que Fotsimaso dans la rรฉgion Sofia. La dรฉnomination Aythya innotata a รฉtรฉ attribuรฉe par Salvadori en 1894 (11). La position systรฉmatique est la suivante (12) :
Rรจgne : ANIMAL
Embranchement : VERTEBRES
Sous-embranchement : GNATHOSTOMES
Super-classe : OISEAUX
Classe : CARINATES
Ordre : ANSERIFORMES
Famille : ANATIDAE
Sous-famille : ANATINAE
Genre : Aythya
Espรจce : innotata
Les fuligules de Madagascar sont des canards plongeurs de taille moyenne, mesurant en moyenne 45cm et pesant environ de 685g (12). Ils possรจdent un plumage de couleur brun-noire sur les parties supรฉrieures du corps tandis que la moitiรฉ supรฉrieure du ventre est de chรขtain-sombre. Les sous caudales sont blancs. Les ailes sont brun-noirs avec une barre alaire blanche trรจs visible pendant le vol. Les pattes sont de couleurs grises foncรฉes (11, 13). Le mรขle se distingue de la femelle par sa taille plus grande mais surtout par son iris blanc, qui ne le confond avec aucune espรจce, dโoรน son appellation ยซ Fotsimaso ยป. Par contre, les femelles sont caractรฉrisรฉes par son iris brun et son plumage plus sombre et terne (11 – 15).
MENACES ET ACTIONS DE CONSERVATION
ย ย ย ย ย ย ย ย ย ย ย Selon la liste rouge de lโUICN, en 1988, lโespรจce a รฉtรฉ dans la liste des espรจces menacรฉes. De 1994 ร 2004, lโespรจce a รฉtรฉ classรฉe critiquement En Danger et puis, probablement รฉteinte en 2006 (23, 24). Les Aythya innotata figurent actuellement parmi les espรจces critiquement En Danger dโextinction (5). Depuis la redรฉcouverte de lโespรจce dans le petit lac de Bemanevika (7), des gardes permanents ont รฉtรฉ placรฉs sur place et la population semble se trouver en situation de stabilitรฉ en nombre, ce qui suggรจre que la chasse peut รชtre une menace. Et รฉtant donnรฉ que cโest une petite population, elle fait face ร un risque significatif d’รฉvรฉnements stochastiques et de facteurs gรฉnรฉtiques, notamment la dรฉpression et la consanguinitรฉ (25 – 27). Les baisses de la population de fuligules de Madagascar antรฉrieures ont รฉtรฉ surtout confรฉrรฉes ร la perte gรฉnรฉralisรฉe de l’habitat par l’envasement et la conversion des lacs en zone dโagriculture. Ce qui a contribuรฉ ร lโรฉpuisement des ressources alimentaires essentielles pour lโespรจce. Mais ร partir des annรฉes 1950, la croissance significative de la population de Rattus rattus a augmentรฉ la prรฉdation des nids. Puis, lโintroduction dโespรจce de poisson exotique telle que les Tilapia ยซ Oreochromis macrochir ยป et les Fibata ยซ Ophicephalus striatus ยป a accru le taux de mortalitรฉ de juvรฉniles par prรฉdation. La chasse et le piรฉgeage des adultes pour nourriture, et la mort ร travers l’enchevรชtrement dans les filets, sont aussi considรฉrรฉs comme ayant contribuรฉ au dรฉclin de cette espรจce (22 – 24, 28). Les mesures de conservations prises, en plus du programme dโรฉlevage en captivitรฉ, sont les suivantes :
ยพ Continuer les recherches pour les populations existantes, avec un accent particulier autour de haut-plateaux oรน Aythya innotata ont รฉtรฉ observรฉs dans le passรฉ
ยพ Continuer les activitรฉs de conservation communautaires et les programmes de sensibilisation pour la protection des zones humides (lac Bemanevika et autres sites potentiels pour les fuligules de Madagascar)
ยพ Mener des recherches plus poussรฉes pour dรฉterminer la taille de la population existante
ยพ Effectuer l’inventaire des zones humides prรจs de la population restant pour identifier les sites potentiels et les sites de rรฉintroduction des oiseaux รฉlevรฉs en captivitรฉ et d’รฉvaluer la nรฉcessitรฉ de la restauration des habitats (29)
DEFINITION-ETIOLOGIE-PATHOGENICITE
ย ย ย ย ย ย ย ย La maladie de Newcastle (MN), dรฉnommรฉe รฉgalement pseudo-peste aviaire ou pesta en malagasy, est une maladie de grande contagiositรฉ et dรฉvastatrice, affectant un grand nombre dโespรจces de volailles domestiques et sauvages (51). Cette maladie a รฉtรฉ rรฉpertoriรฉe dans le territoire malagasy depuis 1946 (52). Lโagent responsable est appelรฉ virus de la maladie de Newcastle (Newcastle Disease Virus, NDV) ou Paramyxovirus aviaire de type -1 (Avian paramyxovirus type 1, APMV-I). Le NDV est un virus enveloppรฉ qui fait partie du genre Avulavirus et de la famille des Paramyxoviridae (53 – 55). Cette famille de virus se caractรฉrise par une capside de symรฉtrie hรฉlicoรฏdale et par un ARN monocatรฉnaire non segmentรฉ de polaritรฉ nรฉgative. Neuf sรฉrotypes ont รฉtรฉ identifiรฉs au sein des Paramyxovirus aviaires (APMV1 ร APMV-9). Le NDV prรฉsente de grandes diversitรฉs gรฉnรฉtiques, ces derniรจres รฉtant associรฉes ร lโorigine spatio-temporelle ainsi quโร lโespรจce hรดte des diffรฉrentes souches (56 – 58). Rรฉcemment ร Madagascar, de nouveaux sรฉrotypes ont รฉtรฉ dรฉcouverts (59). La virulence de NDV ainsi que les signes cliniques de la ND varient fortement selon lโespรจce hรดte et son statut immunitaire, la souche virale impliquรฉe, les infections par d’autres micro-organismes et les stress environnementaux (53, 55). Selon les signes cliniques apparents, les tropismes et la virulence des souches, on distingue (60, 61) :
ยพ Les souches velogรจnes, trรจs virulentes
ยพ Les souches mesogรจnes ou modรฉrรฉes
ยพ Les souches lentogรจnes, moins pathogรจnes
Transport et stockage des sรฉrums
ย ย ย ย ย ย ย ย ย Les sรฉrums obtenus, aprรจs centrifugation, ont รฉtรฉ mis dans des tubules (Eppendorfs) de 0.5ml, puis, dans de lโazote liquide pour stockage temporaire et pour transport ร partir du centre dโรฉlevage jusquโau laboratoire national de diagnostic vรฉtรฉrinaire (LNDV). Dans le laboratoire, les รฉchantillons รฉtaient stockรฉs sous congรฉlation ร moins 20 degrรฉs Celsius.
Examen sรฉrologique par le test ELISA
ย ย ย ย ย ย ย ย ย ย Les analyses de laboratoire ont รฉtรฉ effectuรฉes au sein du Laboratoire National de Diagnostic Vรฉtรฉrinaire, sis ร Anosimasina Itaosy, Antananarivo. Des tests ELISA ou Enzyme Linked Immunosorbent Assay indirects ont รฉtรฉ rรฉalisรฉs pour dรฉtecter les niveaux d’anticorps sรฉriquesย circulants contre la maladie de Newcastle et cholรฉra aviaire chez Aythya innotata en captivitรฉ. ELISA est un test immuno-enzymatique utilisรฉ pour dรฉtecter et รฉvaluer la prรฉsence dโanticorps dans un sรฉrum donnรฉ. Si lโanticorps recherchรฉ est prรฉsent dans le sรฉrum, il se lie avec lโantigรจne immobilisรฉ dans la plaque et lโensemble forme le ยซ complexe immun ยป. Une antiglobuline, le ยซ conjuguรฉ ยป, marquรฉe par une enzymeย peroxydase est ensuite ajoutรฉe au complexe immun formรฉ. Lโaddition dโun substrat chromogรจne produit un signal de coloration de la rรฉaction Anticorps-Antigรจne (Ac-Ag), permettant ainsi le dosage dโanticorps par spectrophotomรฉtrie. Les Kits ProFLOKยฎ PM ELISA et ProFLOKยฎ PLUS NDV ELISA (SYNBIOTICSยฎ USA) ont รฉtรฉ utilisรฉs pour dรฉtecter les anticorps contre P.multocida et PMV-1 chez Aythya innotata. Cela consiste en une mรฉthode quantitative et qualitative sur sรฉrum. Les tests ELISA indirects se font en plusieurs รฉtapes:
Premiรจre รฉtape : Dilution des sรฉrums : Les รฉchantillons (sรฉrums) sont dโabord dรฉcongelรฉs, puis, 300ul de Buffer de Dilution sont ajoutรฉs dans des cupules de microplaques non sensibilisรฉes. Par la suite, 6ul de chaque รฉchantillon de sรฉrum ร tester sont additionnรฉs pour avoir une dilution de 1 :50. Les solutions sont laissรฉes sur un mรฉlangeur dans une tempรฉrature ambiante pendant 5 minutes pour que la dilution puisse sโรฉquilibrer.
Deuxiรจme รฉtape : Fixation des anticorps ร doser : Aprรจs dilution, 50ul de chaque รฉchantillon diluรฉ et 50ul de Buffer de Dilution sont distribuรฉs dans des cupules dรฉjร sensibilisรฉes sur lesquelles sont dรฉjร fixรฉs les antigรจnes (Ag). Aprรจs 30 minutes dโincubation dans une tempรฉrature ambiante, des complexes Ac-Ag devraient se former si รฉventuellement, les anticorps recherchรฉs sont prรฉsents dans les รฉchantillons ร tester. Les restes dโรฉchantillons non fixรฉs sont enlevรฉs par lavage. Des sรฉrums de contrรดle positif et normal sont prรชts ร utiliser et ร mettre dans les cupules correspondantes aprรจs une dilution de 1 :50 avec le Buffer de Dilution.
Troisiรจme รฉtape : Lโajout de conjuguรฉes, de substrats et de solution dโarrรชt : Aprรจs la formation des complexes Ac-Ag, 100ul de solution de conjuguรฉe diluรฉe sont ajoutรฉs dans les cupules. Les plaques sont ensuite incubรฉes pendant 30 minutes dans une tempรฉrature ambiante. Le processus de lavage permet dโรฉliminer les excรจs dโanticorps non fixรฉs. Les cupules sont vidรฉes et lavรฉes trois fois de suite. Le processus de lavage est une รฉtape trรจs cruciale pendant le test ELISA. Aprรจs lavage, 100 ul de solution de substrat sont ensuite versรฉs dans les cupules, suivis dโune incubation de 15 minutes. 100ul de solution dโarrรชt diluรฉe sont enfin additionnรฉes dans les cupules pour stopper toutes rรฉactions.
4eme รฉtape : La rรฉvรฉlation des anticorps fixรฉs ou le dosage proprement dit : Des solutions rรฉvรฉlatrices sont formรฉes. Si la rรฉaction est positive, cโest-ร โdire, les anticorps recherchรฉs sont prรฉsents, les substrats sont dรฉgradรฉs et se transforment en produit colorรฉ. Lโintensitรฉ de la coloration est proportionnelle ร la concentration des anticorps ร doser. Les tรฉmoins nรฉgatifs doivent rester incolores car les anticorps recherchรฉs ne sont pas prรฉsents. La lecture se fait par spectrophotomรฉtrie en utilisant une bande monochromatique ร 405 nm. Un test avec des rรฉsultats valides est obtenu lorsque la moyenne des valeurs de la densitรฉ optique (DO) des sรฉrums de contrรดles normaux est infรฉrieure ร 0.200 et que la valeur corrigรฉe des contrรดles positifs se trouvent entre 0.250 et 0.900. Si les valeurs des DO des sรฉrums de contrรดles ne tombent pas dans ces rรฉfรฉrences, le test est considรฉrรฉ comme invalide et doit รชtre rรฉpรฉtรฉ (92 – 94). Dans les conditions optimales, la tempรฉrature ambiante est entre 21 โ 24 dรฉgrรฉes Celcius. Ainsi, la DO suggรฉrรฉe est entre 0.060 et 0.080 pour les sรฉrums de contrรดles normaux et de 0.400 ร 0.750 pour les sรฉrums de contrรดles positifs. Mais une valeur de DO supรฉrieure ร celles โci ne veut pas dire que le test est non valide.
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Table des matiรจres
INTRODUCTION
PARTIE I : GENERALITES ET CONTEXTE DE LโETUDE
I. GENERALITES SUR LES AYTHYA INNOTATA
I.1. DรNOMINATION – TAXONOMIE – MORPHOLOGIE
I.2. HISTORIQUE – DISTRIBUTION DANS LE MILIEU NATUREL
I.3. MENACES ET ACTIONS DE CONSERVATION
I.4. PROGRAMME DโรLEVAGE EN CAPTIVITร
II. GENERALITES SUR LE CHOLERA AVIAIRE ET LA MALADIE DE NEWCASTLE
II.1. LE CHOLERA AVIAIRE
II.1.1. DEFINITIONโETIOLOGIE- PATHOGENICITE
II.1.2. EPIDEMIOLOGIE – TRAITEMENT- PRรVENTION
II.2. LA MALADIE DE NEWCASTLE
II.2.1. DEFINITION-ETIOLOGIE-PATHOGENICITE
II.2.2. EPIDEMIOLOGIE – TRAITEMENT-PRรVENTION
III. GENERALITES SUR LA VACCINATION ET LA REPONSE VACCINALE
PARTIE II : MATERIELS ET METHODES
I. CADRE DE LโรTUDE
II. TYPE DโETUDE
III. DUREE ET PERIODE DE LโETUDE
III.1. Pรฉriode รฉtudiรฉe
III.2. Durรฉe de lโรฉtude
IV. PARAMETRES DโETUDE
IV.1. Choix des vaccins utilisรฉs
IV.2. Mode de vaccination
IV.3. Examen physique individuel
V. POPULATION DโETUDE
V.1.Unitรฉ cible
V.2.Unitรฉ dโรฉchantillonnage
V.3.Critรจres dโinclusion
VI. LIMITES DE LโETUDE
VII. SEROLOGIE
VII.1. Prรฉlรจvements sanguins
VII.2. Transport et stockage des sรฉrums
VII.3. Examen sรฉrologique par le test ELISA
VIII. TRAITEMENTS ET ANALYSES DES DONNรES
VIII.1. Stockage et manipulation
VIII.2. Analyse des donnรฉes
VIII.3. Analyse univariรฉe
VIII.4. Analyses multivariรฉes quantitatives
PARTIE III. RรSULTATS
A. RรPONSES VACCINALES CONTRE LA MALADIE DE NEWCASTLE CHEZ AYTHYA INNOTATA EN CAPTIVITร
1. Densitรฉ optique du test ELISA indirect des anticorps anti-NDV de chaque individu de Aythya innotata en captivitรฉ
2. Titre des anticorps anti-NDV de chaque individu de Aythya innotata en captivitรฉ
3. Analyses statistiques des titres dโanticorps anti-NDV chezย Aythya innotata en captivitรฉ
B. RรPONSES VACCINALES CONTRE LE CHOLรRA AVIAIRE CHEZ AYTHYA INNOTATA EN CAPTIVITร
1. Densitรฉ optique du test ELISA indirect des anticorps anti-P.multocida de chaque individu Aythya innotata en captivitรฉ
2. Titre des anticorps anti-P. multocida de chaque individu Aythya innotata en captivitรฉ
3. Analyses statistiques des titres dโanticorps anti-P.multocida chez Aythya innotata en captivitรฉ
Partie IV: DISCUSSION ET RECOMMANDATIONS
IV.1. DISCUSSION
a. Titres dโanticorps vaccinaux anti-PMV-1
b. Rรฉponses vaccinales anti-P.multocida
c.Stockage des รฉchantillons
d. Kits ELISA PROFLOCKยฎ
e. Challenge infection
f. Ring vaccination
IV.2. RECOMMANDATIONS
CONCLUSION
ANNEXE
BIBLIOGRAPHIE
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