Soutenance mémoire
LA FIEVRE CATARRHALE OVINE
Les mécanismes de la variabilité génétique du virus
Les virus à ARN existent comme une population hétérogène et changeante de variants qui restent très apparentés, mais qui sont caractérisés par une ou plusieurs séquences génomiques dominantes : on parle de quasi-espèces. L’apparition constante de ces quasi espèces confère aux virus à ARN une évolution rapide et une adaptabilité significative sur le terrain, permettant la sélection des variants les mieux préparés à chaque nouvel environnement et type d’hôte. Le BTV est un parfait exemple de cette variabilité génétique, avec ses 24 sérotypes et des souches différentes au sein de chaque sérotype, en fonction des régions du monde. Deux principaux mécanismes sont à l’origine de cette variabilité génétique : les réassortiments, et les mutations. Un troisième mécanisme, la recombinaison intra génique, semble jouer un rôle mais de nouvelles études sont nécessaires pour confirmer son importance.
Variabilité génétique du gène L2 des 24 sérotypes du BTV
VP2 est la protéine la plus variable du génome, et contient la majorité des épitopes qui interagissent avec les anticorps neutralisants, ce qui en fait le déterminant majeur du sérotype viral. Les études phylogénétiques du BTV reposent toutes sur des analyses comparatives du gène L2. Dans quelques publications les gènes codant NS3 et VP1 sont aussi étudiés. Une étude établissant une comparaison phylogénétique entre les 24 souches de références mais aussi entre 200 isolats provenant du monde entier a montré une corrélation parfaite entre la variation du gène L2 et le sérotype [Maan et al. 2007]. De plus les auteurs ont démontré l’existence de 10 lignées évolutives différentes, identifiées en nucléo types A à J (cf figure 6). A l’intérieur de chacun des nucléo types, les séquences du gène L2 présentent moins de 35% de différences, et les cadres ouverts de lecture ainsi que les régions non codantes sont uniformes en longueur.
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Table des matières
PARTIE I : LA FIEVRE CATARRHALE OVINE ET SON APPARITION EN EUROPE DEPUIS 2006
I – Le Bluetongue Virus (BTV) et sa pathogénie
A – Structure du virus
1 – La capside externe
2 – La nucléocapside
3 – Le core viral
4 – Les protéines non structurales
B – Le génome viral
1 – Organisation du génome viral
2 – Les mécanismes de la variabilité génétique du virus
a. Les réassortiments génétiques
b. Les mutations génétiques
c. La recombinaison intragénique
3 – Variabilité génétique du gène L2 des 24 sérotypes du BTV
4 – L’Europe, point de convergence des deux topotypes géographiques majeurs
C – Cycle de multiplication
D – Dissémination, tropisme cellulaire et réservoir
E – Réaction inflammatoire et réponse cellulaire
F – Réponse immunitaire
1 – La réponse immunitaire à médiation humorale
2 – La réponse immunitaire à médiation cellulaire
3 – L’immunité chez le jeune vis-à-vis du BTV
II – La maladie et les moyens de lutte
A – Les signes cliniques
1 – La forme aiguë
a. Les symptômes généraux chez l’adulte
b. Les troubles de la reproduction
2 – La forme subaiguë ou fruste
3 – La forme inapparente
4 – La reproduction de la maladie et les modèles expérimentaux
B – Diagnostic
1 – Diagnostic épidémio-clinique
2 – Diagnostic différentiel
3 – Diagnostic de laboratoire
a. Diagnostic virologique
b. Diagnostic sérologique
C – Prophylaxie
1 – Prophylaxie sanitaire
2 – Prophylaxie médicale
a. Les vaccins actuels
b. Les vaccins émergents
c. Les vaccins du futur : les vaccins à virus « défectueux »
III – L’épizootie de Fièvre catarrhale ovine dans l’Union européenne
A – Une maladie « exotique » qui a envahi l’Europe en 2006
1 – Historique et situation mondiale avant 2006
2 – L’épizootie de Fièvre catarrhale ovine à sérotype 8
3 – L’épizootie de Fièvre catarrhale ovine à sérotype 1
4 – Le Sud-Ouest de la France, épicentre de l’épizootie à BTV-1
B – Les raisons d’une propagation aussi fulgurante et massive
1 – Les mécanismes d’infection
a. Transmission vectorielle
b. Autres modes de transmission
2 – La sensibilité des animaux à la maladie
a. La forte sensibilité des races européennes domestiques
b. La faune sauvage, réservoir du virus
3 – Saisonnalité de la maladie et phénomène d’Overwintering
PARTIE II : ETUDE EXPERIMENTALE
I – Objectifs
II – Matériel et méthodes
A – Cultures cellulaires
B – Isolement du virus BTV-1 à partir d’échantillons de terrain
1 – Nature et traitement des échantillons
2 – Isolement viral
3 – Nature et caractérisation des virus isolés
a. Caractérisation par immunohistochimie
b. Caractérisation par RT-qPCR
4 – Amplification et conservation des isolats viraux
C – Etude phylogénétique des souches isolées
1 – Sélection des isolats viraux
2 – Sélection des amorces pour l’amplification et le séquençage du gène L2
3 – Extraction de l’ARN viral et RT-PCR
4 – Séquençage et analyse des séquences du gène L2
D – Etude du pouvoir pathogène de la souche LVD-4508
1 – Protocole expérimental
a. Sélection des animaux utilisés et formation des groupes
b. Protocole de vaccination
c. Inoculation d’épreuve
2 – Suivi clinique
3 – Suivi virologique
4 – Suivi sérologique
a. Tests ELISA
b. Test de séroneutralisation
E – Analyses statistiques
III – Résultats
A – Obtention et identification des isolats de terrain
B – Analyse comparative du gène L2 des différents isolats
C – Caractérisation du pouvoir pathogène de la souche LVD-4508 du BTV-1 et efficacité du vaccin Zulvac 1
1 – Validation du modèle d’épreuve et protection vaccinale clinique
2 – Suivi de l’infection virale et protection vaccinale
3 – Evaluation de la réponse humorale
a. Résultats des tests ELISA
b. Résultats des tests de séroneutralisation
IV – Discussion
– Le BTV-1 est resté génétiquement stable lors de l’épizootie de 2007-2008
– La souche isolée LVD-4508 du BTV-1 est fortement pathogène chez le mouton
– Le vaccin Zulvac 1 protège partiellement, mais de manière significative, les moutons contre l’inoculation d’épreuve
– Efficacité des tests sérologiques pour différencier animaux infectés et vaccinés
Conclusion Générale
Bibliographie
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