La Fièvre Catarrhale Ovine

La Fièvre Catarrhale Ovine

L’immunité non spécifique, première ligne de défense [Baudry et Brezellec, 2006]

Des barrières non immunologiques offertes par la peau et les muqueuses, le pH gastrique… s’opposent à la pénétration virale dans l’organisme. L’infection débute lorsqu’un virus envahit quelques cellules dans lesquelles il se réplique. Trois systèmes sont alors activés : la réponse inflammatoire, la production d’interférons de type I et le système du complément.
La réponse inflammatoire fait intervenir les polynucléaires neutrophiles, les monocytes et les macrophages qui exercent leur rôle de phagocytose. Les interférons (IFN) induisent au sein des cellules un état de résistance anti-virale, par inhibition de la traduction des ARN messagers viraux, ce qui bloque la synthèse des protéines à action cytotoxique. Ces IFN pouvant être libérés par toutes les cellules de l’organisme sont produits de façon autocrine mais également paracrine. L’activation du complément entraîne la lyse des cellules infectées.
Des cellules « natural killer » douées de propriétés cytotoxiques sont capables de détruire des cellules infectées. Leur fonctionnement est amélioré par certaines molécules produites par le système immunitaire spécifique.
Cette immunité non spécifique participe étroitement au développement de la réponse spécifique, notamment par l’intermédiaire des cellules présentatrices d’antigène et des cytokines.

Réaction à médiation cellulaire

Elle joue un rôle prépondérant.
Les antigènes viraux dégradés par les cellules présentatrices d’antigène CPA (qui peuvent être des macrophages, des lymphocytes B, des cellules dendritiques) sont présentés :
– aux lymphocytes T CD4+, en association avec une molécule du CMH de classe II,
– aux lymphocytes T CD8+ en association avec une molécule du CMH de classe I.
Dans les deux cas, les lymphocytes reconnaissent le complexe « antigène viral – protéine du CMH » grâce à leur récepteur spécifique du TCR.
La reconnaissance de l’antigène constitue le premier signal d’activation. Ce n’est que lors de la reconnaissance des facteurs de danger grâce aux Toll Like Receptor de la CPA que le second signal d’activation sera fourni par les molécules d’adhésion et par des cytokines.
Les CPA produisent des interleukines 12 (IL-12) qui activent les lymphocytes CD4+ qui se différencient en lymphocytes T helper (LTh). Ces derniers maturent selon l’environnement qui les entoure en lymphocytes Th1 ou Th2.
Les lymphocytes Th1 orientent la réponse immunitaire vers l’immunité à médiation cellulaire. Ils produisent deux cytokines majeures : les interférons gamma IFNγ associés aux interleukines 2 (IL-2) qui donnent le signal aux lymphocytes T CD8 de devenir des lymphocytes T cytotoxiques (LTc) et activent également les macrophages. D’ailleurs, ce sont ces deux cytokines que nous étudierons par la suite pour évaluer la réponse cellulaire dans notre travail.
Les lymphocytes cytotoxiques envahissent le tissu infecté et provoquent la lyse des cellules infectées.

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INTRODUCTION – CADRE DE LA THESE
PARTIE I : PARTIE BIBLIOGRAPHIQUE
I. Utilisation de vecteurs vaccinaux en médecine vétérinaire : généralités
1.1. Enjeux et intérêts de la vaccination
1.2. Rappels immunologiques-réponse anti-virale
1.2.1. L’immunité non spécifique, première ligne de défense
1.2.2. L’immunité spécifique
a. Réaction à médiation cellulaire
b. Réaction à médiation humorale
1.3. Critères recherchés en vaccinologie vétérinaire
1.4. Différents types de vaccins
1.4.1. Vaccins vivants
1.4.2. Vaccins inertes
1.4.3. Vaccins intermédiaires
1.5. Intérêts des vaccins recombinants produits par génie génétique
II. La Fièvre Catarrhale Ovine
2.1. Etiologie
2.2. Epidémiologie
2.2.1. Transmission vectorielle
2.2.2. Autres moyens de transmission
2.2.3. Situation mondiale
2.3. Structure du virus
a. Les protéines mineures
b. Les protéines majeures
2.4. Sérotypes et variabilité génétique
2.5. Cycle de réplication
2.6. Pathogénie et rappels immunologiques
2.6.1. Pathogénie cellulaire et immunité non spécifique
2.6.2. Immunité spécifique
a. Réponse immunitaire à médiation cellulaire
b. Réponse immunitaire à médiation humorale
c. Immunité du foetus
2.7. Symptômes et lésions de la maladie
2.7.1. Chez les ovins
2.7.2. Chez les bovins
2.7.3. Chez les caprins
2.7.4. Les lésions
2.8. Diagnostic
2.8.1. Epidémio-clinique
2.8.2. De laboratoire
a. Diagnostic virologique
b. Diagnostic sérologique
2.9. Prophylaxie
2.9.1. Sanitaire
2.9.2. Médicale : vaccination
a. Les vaccins actuels
b. Vaccins émergents
– Les Pseudoparticules virales ou VLPs « Virus-like particles »
– Les vaccins recombinants
– Autres : vaccins à virus « défectueux » ou vaccins « disabled infectious single cycle »
III. Les poxvirus, vecteurs vaccinaux de choix
3.1. Classification
3.2. Structure
3.3. Génome
3.4. Cycle viral
3.4.1. Entrée du virus dans la cellule
3.4.2. Expression des gènes viraux
3.4.3. Assemblage – maturation – libération des virions
3.5. Utilisation des poxvirus en tant que vecteurs recombinants
3.5.1. Intérets/Atouts
3.5.2. Limites
3.5.3. Quelques exemples en médecine vétérinaire
a. Les Orthopoxvirus
b. Les Avipoxvirus
c. Les Capripoxvirus
3.5.4. Le Myxoma virus : un poxvirus vecteur prometteur
IV. Etat des lieux actuel sur l’utilisation en recherche de la stratégie de fusion avec expression de la protéine d’intérêt sur l’enveloppe de la particule virale
4.1. Utilisation des poxvirus en tant que vecteur chimère
4.1.1. Antigène du HIV- Human immunodeficiency virus
4.1.2. Antigène du virus Ebola
4.1.3. Antigène de Yersinia pestis (Peste)
4.1.4. Antigène du virus Influenza aviaire et GFP (Green Fluorescent Protein)
4.2. Utilisation de vecteurs autres que poxviraux en tant que vecteur chimère
4.2.1. Vecteur de la famille des Paramyxoviridae
a. Vecteur virus de la maladie de Newcastle (NDV) contre l’herpesvirus bovin (BHV-1)
b. Vecteur Parainfluenza contre le virus Ebola
4.2.2. Vecteur de la famille des Rhabdoviridae
a. Vecteur du genre Lyssavirus
b. Vecteur du genre Vesiculovirus
4.2.3. Vecteur de la famille des Orthomyxoviridae
PARTIE II : PARTIE EXPERIMENTALE
I. Principe de construction des virus recombinants
1.1. Principe de construction du virus recombiné myxomateux SG33 – VP2
1.1.1. Construction et structure des plasmides de transfert
1.1.2. Obtention et structure des virus recombinés
1.1.3. Contrôle de l’expression des gènes étrangers insérés
1.2. Principes de construction des virus recombinés myxomateux SG33 M022L-VP2 et SG33 M071L-VP2
1.2.1. Construction et structure des plasmides de transfert.
a. Construction de M071L-VP2
b. Construction de VP2-M022L
1.2.2. Obtention et structure des virus recombinés
1.2.3. Contrôle de l’expression des gènes étrangers insérés
II. Matériel et méthodes
2.1. Protocole vaccinal
2.1.1. Lots expérimentaux de souris
2.1.2. Interventions
2.2. Préparation des splénocytes
2.2.1. Prélèvement des rates
2.2.2. Purification des splénocytes
2.3. Protocole d’analyse de la réponse cellulaire
2.3.1. Choix des peptides VP2 pour les stimulations des splénocytes
2.3.2. Mise en culture des cellules
a. Stimulation pour le marquage intracellulaire
b. Stimulation pour les ELISA (dosage des cytokines produites par les lymphocytes CD4+)
c. Marquage et stimulation pour le CFSE (étude de la prolifération des lymphocytes)
d. Marquage intracellulaire
2.3.3. Protocole ELISA
2.4. Protocoles d’analyse de la réponse humorale (immunofluorescence)
2.4.1. Infection à J0
2.4.2. Fixation des cellules à J2
2.4.3. Perméabilisation à J3
2.4.4. Marquages
III. Résultats
3.1. Analyse de la réponse humorale, tests d’immunofluorescence
3.2. Analyse de la réponse cellulaire
3.2.1. Marquage intracellulaire
a. CD3+-IL2+
b. CD3+ IFNγ+
3.2.2. Test ELISA
3.2.3. CFSE
DISCUSSION
CONCLUSION
Bibliographie