Soutenance mémoire
GENERALITES EN REPRODUCTION EQUINE
Préparation des tissus
Fixation:
Les biopsies utérines ont été fixées dans du liquide de Bouin (Annexe 1) selon un ration de 1 volume de tissu pour 10 volumes de fixateur. Après 24-48 h, les échantillons ont été transférés dans de l’alcool à 70 % pour éviter une détérioration excessive des tissus.
Traitement:
Les tissus ainsi fixés ont été traité selon un procédé automatique de 24 heures (Hendrey Relays, Berks, UK) consistant en une déshydratation initiale des échantillons à travers un gradient croissant d’alcool. L’excédent d’alcool a ensuite été retiré des tissus par un agent nettoyant (Citroclear : HD Supplies, Bucks, UK) avant de les imprégner de cire de paraffine fondue à 56°C (Raymond A Lamb, London, UK). Pour finir, les tissus ont été disposés dans des moules avant d’être recouverts de paraffine (BDH, Poole, UK).
Section et coloration des tissus:
Les blocks de cire ont été placés sur un microtome, Microm HM 335E (MICRON Laborgeräte GmbH, Walldorf, Germany), et six sections de 5 μm suffisamment espacées ont été effectuées par biopsie. Les sections ont ensuite été disposées sur un bain d’eau distillée à 54-56°C, avant d’être recueillies sur une lame de microscope imprégnée d’alcool à 70 %. Les lames ont alors été placées à 40 °C pendant au moins 24 heures, puis colorées à l’Hæmatoxyline et Eosine (Annexe 2) avant de les recouvrir d’une lamelle de protection.
Mesure de la densité de surface (Sv) des glandes endométriales:
Pour estimer de façon non biaisée la densité de surface (Sv), il convient de superposer un ensemble de segments tests isotropiques sur une structure tridimensionnelle et d’évaluer ensuite le nombre d’intersections entre ces segments tests et les limites de la structure. Un logiciel informatique permet de disposer une grille de segments tests sur des sections verticales d’endomètre. En prenant garde de constamment aligner l’axe vertical de la section avec un axe extérieur fixe de référence, ici la lumière utérine, le nombre d’intersections entre ces segments tests et l’épithélium des glandes endométriales présentes dans la Stratum spongiosum a été comptabilisé (Baddeley et al., 1986). La grille de segments tests a été produite par le logiciel de stéréologie digitale Fenestra, Version 2.3 (Confocal Technologies, Liverpool, 1993). Le moniteur informatique a été relié à un microscope à transmission Leitz Laborlux K (Ernst Leitz GMBH, Wetzlar, Germany), lui-même connecté à un dispositif vidéo (JVC, TK-1085E, Leica UK Ltd). Les sections verticales de Stratum spongiosum ont été observées à l’aide d’un objectif x10 et projetées sur un moniteur informatique. Gundersen and Jensen (1987) ont démontré qu’un nombre total de 100 à 200 “points test” et d’intersections comptés par animal était suffisant pour estimer de façon précise Sv. Une grille test formée de 6 rangées et de 6 colonnes est ainsi apparue adéquate pour l’estimation de la densité des glandes endométriales (Figure 28). Un ensemble de 36 segments tests a été positionné de façon aléatoire sur chaque section (Figure 29) et seul le nombre de points tests superposés à la Stratum spongiosum a été intégré dans le logiciel. Chaque biopsie endométriale ayant été sectionnée en moyenne 6 fois, un total de 1080 segments tests a été compté par échantillon (180 segments tests par section). Le nombre d’intersections (I) entre les segments tests et l’épithélium glandulaire a été pris en compte. Le logiciel informatique a alors calculé la densité de surface selon l’équation Sv = (2 . I) / L donnée par Baddeley et al. (1986), ainsi que le coefficient de variation (CV) pour chaque valeur Sv, dont la limite de confiance a été fixée à 2.5 %.
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Guide du mémoire de fin d’études avec la catégorie Médecine Vétérinaire |
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Table des matières
Chapitre 1:INTRODUCTION GENERALE
1.1.GENERALITES EN REPRODUCTION EQUINE
1.1.1. L’activité sexuelle
1.1.1.1. La saison de reproduction
1.1.1.2. Le cycle oestral
1.1.2. Endocrinologie du cycle oestral
1.1.3. L’influence des facteurs externes
1.1.3.1. Lumière
1.1.3.2. Autres facteurs externes
1.2. LE TRACTUS GENITAL DE LA JUMENT
1.2.1. Les organes génitaux internes
1.2.1.1. Ovaires
1.2.1.2. Oviductes
1.2.1.3. Utérus
1.2.1.4. Vagin et col utérin
1.2.2. L’endomètre
1.2.2.1. La paroi utérine
1.2.2.2. Structure histologique
1.2.2.3. Changements annuels
1.2.2.4. Influence du cycle oestral
1.3. LA STEREOLOGIE
1.3.1. But de la stéréologie
Chapitre 2:ETUDE DE L’INFLUENCE DE LA RACE ET DU CYCLE OESTRAL SUR LA DENSITE DES GLANDES ENDOMETRIALES
2.1. INTRODUCTION
2.2. MATERIELS ET METHODES
2.2.1. Animaux
2.2.2. Suivi du cycle oestral
2.2.3. Biopsies endométriales
2.2.3.1. Préparation de la jument
2.2.3.2. Biopsie sous contrôle visuel vidéoendoscopique
2.2.4. Préparation des tissus
2.2.4.1. Fixation
2.2.4.2. Traitement
2.2.4.3. Section et coloration des tissus
2.2.5. Mesure de la densité des glandes endométriales
2.3. RESULTATS EXPERIMENTAUX
2.3.1. Expérience 1 : Evaluation stéréologique de la densité des glandes endométriales dans l’utérus de la jument
2.3.2. Expérience 2 : Evaluation de l’influence de la race et du cycle oestral sur la densité des glandes endométriales équines
2.4. DISCUSSION
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