Fractionnement de l’extrait dichloromethanique (dcm)

La Médecine Traditionnelle reste encore le principal recours de la majorité des populations des pays en voie de développement pour soigner leurs maladies de tous les jours. Cette médecine utilise des substances d’origine animale, minérale mais surtout végétale. (DIALLO Drissa, 2000) De nos jours, force est de reconnaître que, malgré les multiples progrès de la médecine moderne, il y a un net regain d’intérêt vis à vis de la médecine et de la pharmacopée traditionnelle. Les raisons sont apparemment fort simples : les médicaments importés sont hors de la portée d’une large majorité des populations africaines et ne sont pas toujours disponibles dans les structures de distribution. De plus, dans la pharmacopée traditionnelle locale, nombreuses sont les recettes qui ont fait et continuent de faire leurs preuves d’efficacité (MILLOGO. H. et coll., 2005) Concernant l’ulcère gastroduodénal (UGD), les Malgaches surtout en milieu rural ont recours aux plantes médicinales qui ont une activité anti-ulcéreuse comme Mystroxylon aethiopicum (Fanazava), Clidemia hirta (Mazambody), Harongana madagascariensis (Harongana), Olax humbertii (Netsy ou Remaintso) et Centella asiatica (Talapetraka) ; ces plantes ont été l’objet d’étude chimique et pharmacologique mais beaucoup d’autres plantes n’ont pas encore été étudiées ; parmi elles, figure la plante AKB 18 F qui est utilisée empiriquement contre les maux d’estomac.

L’ulcère gastroduodénal (UGD) n’est pas une maladie mortelle mais qui peut devenir nocive quand la maladie s’évoluera en hémorragie, perforation, sténose ou même en un état cancéreux. L’ulcère gastroduodénal est une affection fréquente chez l’homme et chez la femme, surtout à l’âge adulte. De nos jours, on estime qu’environ 10 % de la population des pays industrialisés est susceptible de souffrir un jour ou l’autre d’un ulcère. Les ulcères duodénaux sont les plus fréquents (MICHELINE F., 2004).

L’UGD est une maladie touchant essentiellement l’estomac et la portion initiale du duodénum. Cette maladie est due à une perte de substance protectrice au niveau de la muqueuse gastroduodénale (MGD). La participation de l’acide chlorhydrique et de la pepsine dans leur pathogénie est fondamentale (BERARDI, 2000 ; CLAERBOUT J.F, 2002).

Physiologiquement, il existe un équilibre entre les facteurs corrosifs (HCl et pepsine) et les facteurs protecteurs de la MGD (mucus, ion carbonate, flux sanguin et épithélium). L’UGD s’installe quand les facteurs corrosifs dominent les moyens de défense de la MGD. Il est généralement admis que dans l’ulcère duodénal (UD), le facteur dominant est l’agression chlorhydropeptique alors que dans l’ulcère gastrique (UG) c’est l’altération de la muqueuse gastrique (LABAYLE, 2000; CHAMOUARD P, 2002). Plusieurs facteurs peuvent être à l’origine de la perturbation de cet équilibre, parmi eux figurent l’alcool, les sels biliaires, les acides organiques faibles, les salicylés, le tabac et la prise de substances nocives entraînent aussi la défaillance des défenses de la MGD (CLAERBOUT J.F et coll., 2002 ; ZENECA A, 2004).

ETUDES PHYTOCHIMIQUES

EXTRACTION CHIMIQUE

La plante AKB 18 F a été collectée dans la province d’Antananarivo en mars 2005. Après séchage à l’ombre, les feuilles ont été broyées et 640 grammes de poudre de ces feuilles ont été macérés dans des solvants de polarité croissante, héxane, dichlorométhane et méthanol respectivement. Chaque extraction a duré 24 heures sous agitation à la température de la salle et a été repris 2 fois. Les extraits obtenus ont été pesés pour calculer le rendement des extractions effectuées pour obtenir les différents extraits.

FRACTIONNEMENT DE L’EXTRAIT DICHLOROMETHANIQUE (DCM)

L’extrait DCM a été déposé à la surface d’une colonne chromatographique (450×24 mm) dont la phase stationnaire est constituée par le gel de silice 60 (0.063-0.200 Merck). L’éluant utilisé est un mélange d’hexane/acétate d’éthyle (10/1 à 0/10). Les conditions de séparation ont été optimisées en utilisant la chromatographie sur couche mince (CCM) dont la phase stationnaire est constituée par le gel de silice 60 F 254 Merck. A l’issue de ce fractionnement, sept (7) fractions ont été obtenues et soumises aux tests pharmacologiques.

CRIBLAGE PHYTOCHIMIQUE

Ce test a pour but de déterminer les différentes familles chimiques présentes dans l’EMeOH de la plante AKB 18 F et d’estimer qualitativement leur présence dans l’extrait. Il est basé sur l’apparition de complexes insolubles qui se présentent sous forme de précipités ou sur un changement de la coloration de l’extrait en présence de différents réactifs spécifiques pour chaque famille chimique.

TESTS PHARMACOLOGIQUES

ANIMAUX D’EXPERIENCE

Tests in vivo :
Des rats adultes de souche Wistar de sexe mâle ou femelle pesant entre 180 et 200 g ont été utilisés pour tous les tests in vivo. Quant aux tests de toxicité aiguë, ce sont des souris de souche Swiss mâle ou femelle, pesant entre 20 et 30 g qui ont été utilisées.

Tests in vitro :
Des rats adultes de souche Wistar de deux sexes pesant entre 180 et 200g et des cobayes tricolore mâle et femelle pesant entre 300 et 350g ont été utilisés pour le prélèvement d’organe isolé. Les animaux ont été mis à jeûn 24 heures avant le jour d’expérience avec accès libre à l’eau pour les tests in vivo et in vitro, quant au test de toxicité aiguë, la durée du jeûne des animaux a été de 12 heures.

PRELEVEMENT DES ORGANES

Fundus isolé de rat

Le Rat a été exsanguiné après avoir reçu un coup sec sur la nuque. Après ouverture de l’abdomen, l’estomac a été prélevé. Le fundus, partie supérieure de l’estomac a été prélevé puis rapidement mis dans la solution de Jallon spécifique pour fundus dont la composition exprimée en milli mole (m mol) est la suivante :

NaCl 18,12
NaHCO3 1
Glucose 1
KCl 0,84
CaCl2 0,12

Le fundus, une fois prélevé, a été ensuite ouvert le long de sa petite courbure, et découpé délicatement en lanière suivant sa longueur (TUNER, 1965).Un segment d’environ 2 cm a été monté dans la cuve à organe isolé contenant 20 ml de la solution de Jallon et aéré avec du carbogène (95% O2 et 5% CO2).

Duodénum isolé de rat :
Le duodénum a été prélevé après l’ouverture de l’abdomen. L’organe a été ensuite mis dans la solution de Tyrode pour intestin dont la composition en milli mole (mM) est la suivante :

NaCl 15.48
Glucose 2
NaHCO3 1.68
KCl 0.4
MgCl2 0.4
CaCl2 0.3
NaHPO4 0.11

Après nettoyage, un segment d’environ 2 cm de l’organe a été monté dans la cuve à organe isolé contenant 20 ml de la solution de Tyrode et aéré avec du carbogène.

Iléon isolé de cobaye :
L’iléon a été prélevé après l’ouverture de l’abdomen du Cobaye. L’organe a été ensuite mis dans la solution de Tyrode pour intestin. Après nettoyage, un segment d’environ 2 cm de l’organe a été monté dans la cuve à organe isolé contenant 20 ml de la solution de Tyrode et aéré avec du carbogène (Wardle et Sanger en 1993).

Table des matières

INTRODUCTION
I. MATERIELS ET METHODES
I-1. ETUDES PHYTOCHIMIQUES
A. EXTRACTION CHIMIQUE
B. FRACTIONNEMENT DE L’EXTRAIT DICHLOROMETHANIQUE (DCM)
C. CRIBLAGE PHYTOCHIMIQUE
I.2. TESTS PHARMACOLOGIQUES
I.2.1. ANIMAUX D’EXPERIENCE
1- Tests in vivo
2- Tests in vitro
I.2.2. PRELEVEMENT DES ORGANES
1- Fundus isolé de rat
2- Duodénum isolé de rat
3- Iléon isolé de cobaye
I.2.3. PROTOCOLES EXPERIMENTAUX
1- TESTS in vivo
a)- Ulcère de contrainte de SHAY par ligature de pylore
b)- Ulcère provoqué par l’éthanol 95°
2- Tests in vitro
a)- Tests sur le fundus isolé de rat
b)- Tests sur le duodénum isolé de rat
c)- Tests sur l’iléon isolé de cobaye
d)- Tests des extraits DCM sur le fundus isolé de rat
3- Tests de toxicité aiguë
II . ANALYSE STATISTIQUE DES RESULTATS
III.RESULTATS
III.1. ETUDE CHIMIQUE
III.1.1. RENDEMENT DE L’EXTRACTION
III.1.2. CRIBLAGE PHYTOCHIMIQUE
III.2. ETUDES PHARMACOLOGIQUES
III.2.1- Tests in vivo
a. Effet anti-sécrétoire de l’EMEOH d’AKB 18 F
b. Effet mucoprotecteur de l’EMEOH d’AKB 18 F
III.2.2- Tests in vitro
a)- Activités de l’EMeOH, de l’extrait héxanique et de l’extrait DCM sur la réponse de l’Acétylcholine sur le fundus isolé de rat
b)- Activités de l’EMeOH, de l’extrait héxanique et de l’extrait DCM sur la réponse de l’Acétylcholine sur le duodénum isolé de rat isolé de rat
c)- Activités de l’EMeOH, de l’extrait héxanique et de l’extrait DCM sur la réponse de l’Histamine sur l’iléon isolé de rat
d)- Inhibition de la contraction provoquée par l’Acétylcholine par les fractions de l’extrait DCM
III.2.3- Tests de toxicité aiguë
IV- DISCUSSION
V- CONCLUSION
REFERENCES BILIOGRAPHIQUES

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