Soutenance mémoire
Le Laboratoire de Sécurité Alimentaire et d’Hygiène de l’Environnement (LSAHE) est le premier laboratoire sénégalais accrédité selon la norme ISO 17025 depuis 2009 pour la microbiologie des aliments. Il doit donc respecter un certain nombre d’exigences afin de produire des résultats fiables et satisfaire sa clientèle. Les milieux de cultures sont utilisés dans toutes les méthodes de culture traditionnelles comme dans les méthodes alternatives. Par ailleurs de nombreux essais et modes opératoires dépendent de l’aptitude de milieux de culture à donner des résultats homogènes et reproductibles. Des milieux de culture satisfaisants à des critères de performance établis constituent un préalable à toute analyse microbiologique fiable. La préparation des milieux de culture est une étape principale en microbiologie analytique à tous les niveaux, depuis la pesée jusqu’à l’obtention du produit final. Les milieux de culture peuvent être achetés prêts à l’emploi ou préparés. Les milieux de culture sont achetés soit directement auprès des entreprises de production industrielle ou indirectement auprès des fournisseurs. En fonction de la disponibilité des ressources, certains laboratoires choisissent des préparer les milieux qu’ils utilisent, cependant, cette préparation nécessite un contrôle strict à toutes les étapes de la préparation. Face à ces exigences, le Laboratoire de Sécurité Alimentaire et d’Hygiène de l’Environnement (LSAHE) de l’Institut Pasteur de Dakar, a pris la décision de passer à une autoproduction de tous les milieux de culture qu’il utilise dans le cadre de l’analyse microbiologique des eaux, c’est-à-dire « de produire et de contrôler en interne tous les milieux de culture qui entrent dans ce champ d’accréditation en vue de réduire les coûts liés à l’achat des milieux prêts à l’emploi et d’être indépendant à ce niveau ».
Les milieux de culture
Définitions des milieux de culture
Un milieu de culture, est une préparation au sein de laquelle des micro-organismes peuvent se multiplier. Il doit donc satisfaire les exigences nutritives du micro-organisme étudié ce qui implique de:
➤ couvrir les besoins en ions minéraux, en facteurs de croissance, apporter la source de carbone et d’énergie ;
➤ présenter un pH voisin du pH optimal ;
➤ présenter une force ionique optimale (le milieu peut être isotonique mais ce n’est pas obligatoire) .
« Un milieu de culture est un support qui permet la culture de cellules, de bactéries, de levures, de moisissures afin de permettre leur étude. Les éléments de base entrant dans la préparation des milieux de culture sont:
● L’eau
● Les sels minéraux
● Les nutriments (constitutifs et énergétiques.
« Un milieu de culture est une préparation de substances sous forme liquide, semi-solide et solide, qui contient des composants naturels et/ou synthétiques destinés à permettre la multiplication (avec ou sans inhibition de certains micro-organismes) ou l’identification ou à préserver la viabilité des micro-organismes » .
Type des milieux de culture
On distingue deux types de milieux de culture en Microbiologie technique :
Milieux synthétiques de composition exactement connue, qualitativement et quantitativement, sont élaborés à partir de diverses substances chimiques pures (organiques ou minérales) et ajoutées dans des proportions idéales pour la croissance des microorganismes. Les sources de phosphore, de soufre, d’azote et de minéraux sont apportées sous formes des sels (sulfate d’ammonium, chlorure de calcium, phosphate de magnésium…). La composition exacte est donc parfaitement connue.
Milieux empiriques sont élaborés à partir de matière organique riche, d’origine animale ou végétale, dans laquelle il est possible de d’ajouter d’autres constituants nutritifs (glucide, amidon, gélatine…). La matière organique de base correspond le plus souvent à des extraits de levures, de viande, de cœur, de cervelle, de germe de blé… ou des peptones de viande, de soja, de caséine de lait… Les peptones sont obtenues après hydrolyse enzymatique ou chimique de la matière protéique de base. Ces substrats sont riches en acides aminés, vitamines, minéraux et oligoéléments. Les milieux de culture les plus employés aujourd’hui sont les milieux de base. Les milieux peuvent être :
➤ liquides sous une forme de bouillon, ils sont alors présentés sous forme de tube
➤ solides, alors dans ce cas on parle de gélose, ils sont présentés en boîte. Le gélifiant le plus utilisé est l’agar-agar ou gélose : il s’agit d’un polygalactose sulfaté présentant la propriété de former avec l’eau un gel solide à une température inférieure à environ 60 °C.
Classification des milieux de culture
Selon la norme française : NF T90-461 (juillet 2001), la classification des milieux de culture est la suivante :
Classification des milieux de culture selon leur consistance
milieu de culture liquide : constitué d’un ou plusieurs composants en solution aqueuse (par exemple : Eau peptonée, bouillon nutritif). On peut noter que les milieux de culture liquides en tubes, en flacons, ou en bouteilles son communément appelés « bouillons ».
milieu de culture solide et semi-solide : milieu de culture liquide additionné de matières gélifiantes (par exemple : agar, gélatine, etc.) à différentes concentrations. Les milieux gélosés en font parties.
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Table des matières
INTRODUCTION
Chapitre I : Cadre théorique
ɪ-Les milieux de culture
1- Définitions des milieux de culture
2- Type des milieux de culture
II- Classification des milieux de culture
III-Répartition des milieux de culture
IV – Stérilisation à l’autoclave
V – Conservation des milieux de culture
V I-Prescriptions de la norme internationale ISO/11133
VII. Contrôle de la qualité des milieux de culture dans un laboratoire de microbiologie
Chapitre II : Cadre de l’étude et méthodologie
I-Cadre de l’étude
1-Présentation de l’Institut Pasteur de Dakar
2-Présentation de Laboratoire de Sécurité Alimentaire et d’Hygiène de l’Environnement (LSAHE)
II – Matériel et Méthode
Chapitre III : Resultats et Discussion
I. Résultats
II-Discussion
III.Recommandations
Conclusion
Références bibliographiques
Annexes
