Description du genre Smilax (PERRIER ,1937 ; ANDRAMIHAJA, 1986)
ย ย Smilax est le seul genre de la famille des Liliacรฉes qui existe ร Madagascar. Ce sont des lianes grรชles de 6 ร 7m de long, souvent รฉpineuses. Les feuilles sont alternes, ร stipules adnรฉes au pรฉtiole, ร limbe membraneux, large, 3-5 nerve et ร nervation secondaire rรฉticulรฉe. Les fleurs sont dioรฏques, en ombelles introrses, ร sacs confluents. Lโombelle a 10-30 fleurs, avec un pรฉdoncule de 5-12 mm, un peu plus allongรฉ sous les fleurs, pรฉrianthe de 4 mm. Les รฉtamines ont la mรชmelongueur que le pรฉrianthe ; les filets sont un peu รฉpaissis sous les anthรจres oblongues, obtuses de 1mm. Lโovaire est triloculaire, ร loges 1-2 ovulรฉes. Le fruit est une baie ร 1-3 graines. Ce genre comprend 200 espรจces environ, qui poussent dans les rรฉgions tempรฉrรฉes et tropicales du monde entier.
Description de lโespรจce Smilaxkraussiana
ย ย Smilax kraussiana est une liane grรชle, diffuse, ร rameaux les uns traรฎnant sur le sol, les autres plus ramifiรฉs, grimpants, รฉtalant leurs ramifications au sommet des arbres ou des arbustes souvent simples, ou munies dโune ligne saillante au-dessous de chaque pรฉtiole, รฉpineuses, parfois plus ou moins verruqueuses, ร feuilles grandes (12 ร 20 cm ร 6 ร 10 cm), largement ovales, souvent subcordรฉes, arrondies au sommet ou courtement acuminรฉes, ร pรฉtiole tordu, long de 12 ร 30 mm, souvent muni sur le cรดtรฉ dorsal dโune cรดte saillante. Les rameaux supรฉrieurs sont inermes, ร tige cylindrique ou presque, finement striรฉe. Le fruit est en grappe et de couleur grenat ร maturitรฉ (figure 1, p. 7).
Prรฉcipitation par lโacรฉtate neutre de plomb
Principe Lโacรฉtate neutre de plomb (ANP) est un sel de mรฉtal lourd qui a la capacitรฉ de prรฉcipiter les macromolรฉcules comme les acides nuclรฉiques, les protรฉines, les polysaccharides ainsi que les acides organiques. Le traitement est utilisรฉ pour clarifier les extraits en รฉliminant ces molรฉcules.
Mode opรฉratoire On verse goutte ร goutte la solution dโANP 20% (p/v) de volume dรฉterminรฉ dans lโextrait ร traiter sous agitation magnรฉtique. Le prรฉcipitรฉ formรฉ est รฉliminรฉ par centrifugation ร lโaide dโune centrifugeuse de marque JOUAN (modรจle TH12) ร 12 000 trs/min, pendant 10 min. Pour รฉliminer lโexcรจs de plomb dans le surnageant, une solution aqueuse de phosphate disodique (Na2HPO4) ร 10% (P/V) est ajoutรฉe. Il se forme un prรฉcipitรฉ. Celui-ci est รฉcartรฉ par centrifugation ร 16 000 trs/min pendant 10 min.
Prรฉparation du boudin de dialyse
ย ย Le boudin de dialyse utilisรฉ se prรฉsente sous forme dโun cylindre en cellophane de marque Cellu Sep, de 32mm de large, avec un seuil de 6000 ร 8000 Da. Il contient de la glycรฉrine, des composรฉs sulfureux et des mรฉtaux lourds quโil faut รฉliminer en faisant bouillir la membrane dans de lโED pendant 15 min, puis lโED est รฉliminรฉe. Cette opรฉration est rรฉpรฉtรฉe 3 ร 4 fois. Aprรจs refroidissement, la membrane ainsi traitรฉe est conservรฉe ร + 4ยฐC pendant 2 ร 3 jours dans la derniรจre eau bouillie. Avant son utilisation, la membrane doit รชtre rincรฉe ร lโED.
Estimation de la toxicitรฉ
ย ย La toxicitรฉ aiguรซ est estimรฉe par injection de lโextrait ร tester par voie intrapรฉritonรฉale (i.p.).Un lot de trois souris mรขles de 25ยฑ2g est utilisรฉ pour chaque test. Un volume de 0,3 ml dโextrait ร tester est injectรฉ ร chaque souris de 25g. Un autre lot de trois souris mรขles de 25ยฑ2g servant de tรฉmoin, reรงoit 0,3 ml de sรฉrum physiologique. Lโobservation des symptรดmes dโintoxication commence immรฉdiatement aprรจs lโinjection.
Test sur les larves de moustique(OMS, 1970)
ย ย Les larves sont rรฉparties par lots de cinq dans des petits cristallisoirs contenant 100ml dโeau de pluie.Lโextrait ร tester est ajoutรฉ de maniรจre ร avoir des concentrations en progression gรฉomรฉtrique de raison r.Celles-ci sโรฉchelonnent entre la concentration la plus haute provoquant 0% de mortalitรฉ et la concentration la plus basse provoquant 100% de mortalitรฉ. Lโexpรฉrience dure 24h.Pour calculer le pourcentage de mortalitรฉ ร chaque concentration, les larves moribondes et les larves mortes sont comptรฉes. Les larves sont considรฉrรฉes comme :
๏ moribondes, quand les larves ne peuvent plus monter ร la surface ou plonger quand on agite lโeau ;
๏ mortes, quand elles ne bougent plus lorsquโon les touche avec une aiguille dans le siphon ou la rรฉgion cervicale.
La CL50 est calculรฉe selon la mรฉthode donnรฉe au ยง 2.2.1.2 (p. 34).
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Table des matiรจres
INTRODUCTION GENERALE
Premiรจre partie : ETUDE CHIMIQUE
1- INTRODUCTION
2- MATERIELS ET METHODES
2.1 MATERIELS
2.1.1 MATERIEL VEGETAL
2.1.1.1 Classification de la plante
2.1.1.2 Identification
2.1.1.3 Description du genre Smilax
2.1.1.4 Description de lโespรจce Smilax kraussiana
2.1.1.5 Rรฉpartition gรฉographique de lโespรจce
2.1.1.6 Date et lieu de rรฉcolte
2.1.1.7 Organe utilisรฉ
2.1.1.8 Prรฉparation et conservation du matรฉriel dโรฉtude
2.1.2 LES PRODUITS CHIMIQUES
2.2. METHODES
2.2.1. METHODES DโEXTRACTION
2.2.1.1 Extraction ร froid
2.2.1.2 Extraction ร chaud
2.2.2 METHODES DE PURIFICATION
2.2.2.1 Prรฉcipitation par lโacรฉtate neutre de plomb
2.2.2.1.1Principe
2.2.2.1.2. Mode opรฉratoire
2.2.2.2 Dialyse
2.2.2.2.1 Principe
2.2.2.2.2 Mode
2.2.2.2.2.1 Prรฉparation du boudin de dialyse
2.2.2.2.2.2 Mise en ลuvre de la dialyse
2.2.2.3 Prรฉcipitation par lโรฉthanol 50%
2.2.2.3.1 Principe
2.2.2.3.2 Mode opรฉratoire
2.2.2.4 Fractionnement par le n-butanol
2.2.2.4.1 Principe
2.2.2.4.2 Mode opรฉratoire
2.2.2.5 Fractionnement par lโacรฉtate dโรฉthyle
2.2.2.5.1 Principe
2.2.2.5.2 Mode opรฉratoire
2.2.2.6 Chromatographie sur gel Sephadex
2.2.2.6.1 Principe
2.2.2.6.2 Mode opรฉratoire
2.2.2.7 Chromatographie sur rรฉsine รฉchangeuse dโions
2.2.2.7.1 Principe
2.2.2.7.2 Mode opรฉratoire
2.2.3 METHODE DE CONCENTRATION
2.2.4 REDEMENT DE PURIFICATION
2.2.5 METHODES DโANALYSE
2.2.5.1 Chromatographie sur couche mince
2.2.5.1.1 Principe
2.2.5.1.2 Mode opรฉratoire
2.2.5.1.2.1 Dรฉpรดt des รฉchantillons
2.2.5.1.2.2 Dรฉveloppement du chromatogramme
2.2.5.1.2.3 Rรฉvรฉlation du chromatogramme
2.2.5.2 Criblage phytochimique
2.2.5.2.1 Les alcaloรฏdes
2.2.5.2.1.1 Mode opรฉratoire
2.2.5.2.2 Tanins et polyphรฉnols
2.2.5.2.2.1 Mode opรฉratoire
2.2.5.2.3. Les saponines
2.2.5.2.4. Les flavonoรฏdes et leucoanthocyanes
2.2.5.2.4.1 Test de WILSTATER
2.2.5.2.4.2. Test de BATE-SMITH
2.2.5.2.5. Les anthraquinones (Test de BORNSTRรGER)
2.2.5.2.6. Les iridoรฏdes
2.2.5.2.7 Les stรฉroรฏdes, les triterpรจnes et les stรฉrols insaturรฉs
2.2.5.2.7.1 Test de LIEBERMANN-BURCHARD
2.2.5.2.7.2 Test de SALKOWSKI
2.2.5.2.8 Les dรฉsoxyoses (Test de KELLER-KILLIANI)
3. RESULTATS
3.1 EXTRACTION
3.1.1 EXTRACTION AQUEUSE A FROID
3.1.2 EXTRACTION AQUEUSE A CHAUD
3.1.3 EXTRACTION HYDROETHANOLIQUE A FROID
3.1.4 EXTRACTION HYDROETHANOLIQUE A CHAUD
3.1.5 EXTRACTION ALCOOLIQUE 100%
3.2 PURIFICATION
3.2.1 Traitement par lโacรฉtate neutre de neutre de plomb
3.2.2 Dialyse
3.2.3 Traitement par lโรฉthanol 50%
3.2.4 Traitement par le n-butanol
3.2.5 Fractionnement par lโacรฉtate dโรฉthyle
3.2.6 Chromatographie sur gel Sephadex
3.2.7 Chromatographie sur rรฉsine รฉchangeuse dโions
3.3 ANALYSE DES EXTRAITS PAR CHROMATOGRAPHIE SUR COUCHE MINCE
3.4 RENDEMENT EN PRINCIPES TOXIQUES
3.5. CARACTERISATION CHIMIQUE
3.5.1 Propriรฉtรฉs physico-chimiques
3.5.2 Nature chimique
4. DISCUSSION ET CONCLUSION
Deuxiรจme partie : ETUDE TOXICOLOGIQUE
1. INTRODUCTION
2. MATERIELS ET METHODES
2.1 MATERIELS
2.1.1 LES ANIMAUX DโEXPERIMENTATION
2.1.1.1 Les souris
2.1.1.2 Les tรชtards
2.1.1.3 Les alevins de poissons
2.1.1.4 Les larves de moustique
2.1.2 LES VEGETAUX DโEXPERMENTATION
2.1.3 LES MICROORGANISMES UTILISES
2.1.4 LES MILIEUX DE CULTURE
2.1.5. LES DISQUES POUR LES TESTS DโANTIBIOGRAMME
2.2 METHODES
2.2.1 METHODES DโETUDE DES EFFETS SUR LES ANIMAUX
2.2.1.1 Tests sur les animaux ร sang chaud
2.2.1.1.1 Etude de la toxicitรฉ sur souris
2.2.1.1.1.1 Estimation de la toxicitรฉ
2.2.1.1.1.2 Dรฉtermination de la DL50 (24h)
2.2.1.2. Tests sur les animaux ร sang froid
2.2.1.2.1 Expรฉrience sur les tรชtards de grenouille
2.2.1.2.2 Expรฉrience sur les alevins de poisson
2.2.1.2.3 Test sur les larves de moustique
2.2.2 METHODES DโETUDE DES EFFETS SUR LES VEGETAUX
2.2.2.1 Mรฉthodes dโรฉtude des effets sur le pouvoir germinatif de graines
2.2.2.2 Mรฉthodes dโรฉtude des effets sur la croissance des jeunes plantules
2.2.2.2.1 Trempage
2.2.2.2.2 Germination
2.2.2.3 Mรฉthodes dโรฉtude des effets sur le dรฉveloppement des bourgeons axillaires
2.2.3 METHODES DโETUDE DES EFFETS SUR LA CROISSANCE DES MICROORGANISMES
2.2.3.1 Stรฉrilisation
2.2.3.2 Spectre dโactivitรฉ antimicrobienne des extraits
2.2.3.2.1 Prรฉparation des extraits
2.2.3.2.2 Inoculation des milieux
2.2.3.2.3 Prรฉparation des disques
2.2.3.2.4 Norme de lecture des rรฉsultats
2.2.3.3 Dรฉtermination de la CMI
3. RESULTATS
3.1 EFFETS DES EXTRAITS SUR LES ANIMAUX
3.1.1 EFFETS DES EXTRAITS SUR LES ANIMAUX A SANG CHAUD
3.1.1.1 Effets sur la souris
3.1.1.1.1 Description des symptรดmes dโintoxication
3.1.1.1.2 Dรฉtermination de la DL50 (24h)
3.1.2 EFFETS DE LโEXTRAIT BRUT SUR LES ANIMAUX A SANG FROID
3.1.2.1 Effets sur les alevins de poisson
3.1.2.2 Effets sur les tรชtards de grenouille
3.1.2.3 Effets sur les larves de moustique
3.2 EFFETS DES EXTRAITS SUR LES VEGETAUX
3.2.1 Effets de lโextrait brut sur le pouvoir germinatif des graines
3.2.2 Effets de lโextrait brut sur la croissance des jeunes plantules
3.2.3 Effets de lโextrait brut et de E2 sur le dรฉveloppement des bourgeons axillaires
3.3 EFFETS DES EXTRAITS SUR LES MICROORGANISMES
3.3.1 Les souches utilisรฉes
3.3.2 Spectre dโactivitรฉ des extraits
4. DISCUSSION ET CONCLUSION
CONCLUSION GENERALE ET PERSPECTIVES
REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES
ANNEXES
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