Soutenance mémoire
Théorie de la neutralisation acide-base
C’est la neutralisation d’un acide par une base ou l’inverse. Elle consiste à mettre en présence des quantités équivalentes d’acide et de base. Elle permet donc de déterminer la concentration d’une solution d’acide ou de base connaissant la concentration de la base ou de l’acide. En pratique, on réalise un titrage volumétrique, en ajoutant à un volume déterminé de solution d’acide (ou de base), des volumes croissants de solution de base (ou d’acide) jusqu’à ce que la neutralisation soit obtenue. On peut utiliser les indicateurs colorés pour l’appréciation du point d’équivalence. En effet, la variation du pH en ce point est rendue sensible par l’utilisation d’un indicateur coloré.
Usage traditionnel
Espèce souvent plantée autour des cases dans un but d’ornementation. Les feuilles étaient aussi employées dans la teinture du jiafotsy ou rabane. Les feuilles fraîches sont écrasées pour nettoyer les planchers contre les puces. Certains chercheurs ont déjà fait des études chimiques, biologiques et pharmacologiques des plantes de la famille de buddleia. En 1960, EMBERGER a confirmé que quelques genres de buddleia de l’Amérique du sud renferment des alcaloïdes utilisés en thérapeutiques. En 1995, MARTINEZ-VAZQUEZ et ses collaborateurs ont confirmé que les extraits aqueux de Buddleia cordata présentent un flavone. Ce flavone est utilisé comme antipyretique et analgésique..
L’étude chimique sur les Buddleia davidi, Buddleia cordata et Buddleia sessilflora montre qu’elles contiennent plusieurs phényléthanoïdes et ses-quiterpènes. (ROMO DE VIVAR, 1995) En 1997 Pr G BALANSARD et Dr R ELIAS et ses collaborateurs dans les thèses de recherche ont isolé une saponine triterpenoïde de la plante, puis en 1998, ils ont confirmé que la plante renferme deux flavonoïdes triglycosides. En 1998 ANDRIAMAMONJISOA Dimbiniala, dans son de mémoire DEA a effectué des études chimiques et biologiques sur la plante. Il a réalisé l’extraction d’huile essentielle puis l’extraction hydroalcooliques et l’extraction aqueuse.
Enfin il a déterminé les effets biologiques et pharmacologiques des extraits obtenus et conclus que cet extrait brut n’est pas toxique aux souris. L’huile essentielle présente un effet antibactérien mais très faible sur les trois souches : staphylococcus aureus, salmonella typh, et candida albicans. Tandis que les extraits hydroalcooliques et les extraits aqueux, présentent des tests antibactériens fortement positifs pour les trois germes utilisés ci dessus. Les extraits des rameaux florifères ne sont pas analgésiques, l’activité anti-douleur de l’extrait des feuilles est très faible. Par contre les deux extraits ont des activités antipyrétiques.
Test des saponines
Les saponines sont des hétérosides particuliers à genines stéroïdiques ou triterpénoïdiques caractérisés par leurs propriétés tensioactives. En solution aqueuse, ils possèdent un pouvoir moussant ou apyrogène. Par conséquent, la manière de les détecter consiste à évaluer ce que l’on appelle « indice de mousse » en mesurant la hauteur de mousse persistante.
Chromatographie sur colonne et sur ccm de l’extrait ETH
Pour séparer les constituants chimiques hydrosolubles de l’extrait ETH. On a effectué une autre méthode chromatographique qui est la chromatographie d’exclusion diffusion en utilisant la résine l’amberlite XAD2. Ce gel XAD2 a été utilisé comme phase stationnaire et les séparations ont été réalisées avec les éluants eau et éthanol. L’opération se déroule comme suit: D’abord pour la préparation de la phase stationnaire : la poudre XAD2 a été solubilisée dans l’éthanol, ensuite le mélange est agité pour que l’adsorbant puisse se gonfler; Ensuite, le gel est versé dans une colonne. L’échantillon à chromatographier est dissout dans 5 ml d’éthanol. Puis, on le dépose sur le haut de la colonne de XAD2. L’élution de la colonne se fait en deux étapes :
-1ère étapes : l’eau constitue la phase mobile.
On a obtenu 100 fractions d’environ 5ml chacune, et on a mesuré le pH de chaque fraction. Les résultats obtenus sont récapitulés sur le tableau 17(annexe). Cinq fractions ont été regroupées. Les 20 tubes résultant du groupement précédent sont déposés chacun sur une plaque de gel de silice. L’éluant utilisé est un mélange de Butanol, Acide acétique et l’eau de volume respectif 4, 1, 5. (Phase supérieure) Le chromatogramme obtenu est donné par la figure 5 et le résultat de l’étude chromatographique se trouve sur le tableau 3.
– 2ème étape: l’éthanol constitue la phase mobile.
On a obtenu 65 fractions d’environ 5ml chacune, et on a mesuré le pH de chaque fraction. Les résultats se trouvent sur le tableau 18, les 5 fractions ont été aussi groupés ; chacun de ces tubes est déposé sur une plaque de gel de silice. L’éluant utilisé est un mélange du Dichlorométhane, du Méthanol et de l’eau de volume respectif de 70, 30, 10. (Phase supérieure)
Extrait des substances EXD (H2O)
Les valeurs obtenues sont résumées dans le tableau 17 et la figure 18 (annexe) Le pH de chaque échantillon varie en général de pH=11,66 jusqu’à 7,14. Sur la courbe dpH/dt, on remarque cinq allures très marquées :
– de la fraction 0 à la fraction 12, le pH varie de 11,66 à 10,14;
– de la fraction 13 à 57 le pH est constant et égale à 10,20;
– de la fraction 58 à 59 le pH diminue ;
– de la fraction 60 à 81 le pH devient constant, de nouveau entre 8,40 et 8,10;
– de la fraction 82 à 100 le pH est neutre
Nous remarquons que toutes les fractions sont basiques. Ce sont donc les produits basiques qui sortent en premiers de la colonne chromatographique. Nous avons identifié par des méthodes chromatographiques sur CCM (page 24) les différentes substances chimiques contenues dans cet extrait afin de pouvoir expliquer leur influence sur le pH.
CONCLUSION
Les études physico-chimiques de différents extraits de Buddleia madagascariensis dont la décoction est fréquemment utilisée par la médicine traditionnelle malgache, révèlent des variations temporelles de leurs pH ainsi que de leurs potentiels E. D’après les analyses des courbes pH = f(t) et de leurs dérivées d(pH)/dt, certains extraits sont nettement acides pendant les quatre premiers jours. D’autre part, les courbes dérivées d (pH)/dt qui présentent plusieurs pics, nous signalent que les extraits étudiés possèdent plusieurs formes d’acidités. On en déduit que c’est le décocté qui est l’extrait le plus acide pendant les deux premiers jours et c’est l’extrait de la macération à froid qui est le moins acide mais son acidité reste sensiblement constante. D’après notre première investigation, ces variations temporelles sont attribuables à la dénaturation chimique de certaines substances au sein de l’extrait considéré. Afin d’identifier les substances responsables de cette acidité, nous avons utilisé deux techniques chromatographiques (la chromatographie d’adsorption et d’exclusion diffusion) des extraits.
On a alors déduit et confirmé par des tests phytochimiques que le caractère acide des extraits est dû essentiellement à la présence majoritaire de trois familles chimiques dont les alcaloïdes, les flavonoïdes et les polyphénols. A la lueur des résultats de ces études physico-chimiques, il serait prudent de prendre des précautions particulières lors de l’administration de la décoction de Buddleia madagascariensis à cause d’une part de son acidité et d’autre part de la dénaturation de certaines substances qui affectent assurément ses propriétés biologiques. Pour la suite de nos travaux de recherches nous avons projeté d’entreprendre la détermination structurale de quelques substances bioactives entre autres les alcaloïdes et les polyphénols. Un intérêt particulier est aussi attribué sur les effets thérapeutiques ou nocifs de la décoction après sa dénaturation. Les études relationnelles comme les couples « Structure / Activité biologique » et «Propriétés physico-chimiques / Activité biologique » méritent d’être approfondies pour les différents extraits.
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Table des matières
INTRODUCTION
THEORIES ET PROCEDES PHYSICO-CHIMIQUES UTILISES
I- EXTRACTION
I –1 Extraction et polarité du solvant
I -2 Extraction solide – liquide
I -3 Extraction liquide – liquide
II CHROMATOGRAPHIE
II -1 Etude théorique de la chromatographie
II -2 Choix des éluant
II -3 Classification des éluants ou solvants
II -4 Classification de chromatographie
II -4-1 La chromatographie d’adsorption
II -4-2 Chromatographie d’exclusion diffusion
II -4-3 Exemple de chromatographie : chromatographie sur couche mince
III- ETUDES ELECTROCHIMIQUES
III –1 Théorie de la neutralisation acide-base
III -2 La pH-mètrie
III -3 Le potentiometrie
IV- TESTS PHYTOCHIMIQUES
ETUDE BOTANIQUE DE LA PLANTE ET TRAVAUX ANTERIEURS
I-MATIERES PREMIERES
I -1 Aperçu général
I -2 Description géographique
I- 3 Description botanique
II- USAGES ET INTERETS DE LA PLANTE
II- 1 Usage médicinal
II- 2 Usage artisanal
II- 3 Usage traditionnel
III- APERÇUS DES MECANISMES DE REACTION DE PRECIPITATION OU DE COLORATION DES TESTS DE SCRENNING PHYTOCHIMIQUES
III -1 Tests des alcaloïdes
III -2 Test des stéroïdes et des terpenoïdes
III -3 Tests des tanins et des polyphénols
III -4 Test des flavonoïdes
III -5 Test des saponines
III–6 Test des polysaccharides
TRAVAUX PERSONNELS
I-EXTRACTION
I-1 Décoction
I -2 Infusion
I –3 Extraction éthanolïque
I- 4 Extraction des alcaloïdes
II ESSAIS CHROMATOGRAPHIQUES
II -1 Chromatographie sur colonne et sur ccm de l’extrait ETH
II -1-1 Chromatographie des échantillons obtenus par le solvant eau
II -1-2 Chromatographie sur CCM des échantillons éluée par le solvant éthanol
II -2 Essai de séparation des extraits EA1, EA2, EXDT sur CCM
II -2-1 CCM des extraits EA1, EA2 et EXDT avec CH2Cl2 MEOH de proportion 98 : 2
II -2-2 CCM des extraits EA1, EA2 et EXDT avec CH2CL2 MEOH de proportion 95 : 5
II -2-3 CCM des extraits EA1, EA2 et EXDT avec CH2Cl2 / MEOH 90 : 10
III- RESULTATS DES TESTS PHYTOCHIMIQUES
IV- ETUDES ELECTROCHIMIQUES
IV -1 Etude pH-mètrique en fonction de temps des extraits
IV -1-1 Mesures pH-mètrique et potentiomètriques de l’extrait ED
IV -1-2 Mesures pH-mètrique et potentiomètrique de l’extrait EI
IV-1-3 Mesures pH-mètrique et potentiomètrique de l’extrait EME
IV -1-4 Mesures pH-mètrique et potentiomètrique de l’extrait EMT
IV -1-5 Mesure pH-metrique des fractions de la colonne chromatographique
IV- 1-5-1 Extrait des substances EXD (H2O)
IV -1-5-2 Extrait des substances EXD (EtOH)
IV- 2 Etude volumétrique et pH-mètrique
IV -3 DOSAGE pH-METRIQUE ET POTENTIOMÈTRIQUE DES EXTRAITS OBTENUS
IV -3-1 Dosage pH-mètrique et potentiomètrique des extraits ED
IV -3-2 Dosage pH-mètrique et potentiomètrique des extraits EI
IV -3-3 Dosage pH-mètrique et potentiomètrique des extraits EME
IV -3-4 Dosage pH-mètrique et potentiomètrique des extraits EMT
CONCLUSION
ANNEXES
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