ETUDE IN-VIVO DES EFFETS DE RZ013

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TESTS BIOLOGIQUES

Administration de l’extrait

L’extrait a été administré par voie orale dans les tests in vivo et intraveineuse dans le test ex vivo. Pour ce dernier, il a été centrifugé à 3000 tours par minute afin d’éliminer les fins résidus du débris de matériel végétal. L’extrait administré par voie orale a été dissout dans de l’eau distillée, et dans du sérum physiologique (NaCl 9%o) pour l’administration par voie intraveineuse.

Animaux d’expérimentation

Des rats des deux sexes de souche WISTAR, pesant de 220 à 250g et âgés de 12 et 45 semaines ont été utilisés pour évaluer les effets de l’extrait RZ013 sur le comportement copulatoire et le réflexe pénien. Ces rats ont été élevés à l’animalerie du Laboratoire de Pharmacologie Générale, de Pharmacocinétique et de Cosmétologie (LPGPC), nourris avec de la provende LFL 1420 et ont eu de l’eau à volonté.

Etude in-vivo des effets de RZ013

L’effet de l’extrait RZ013 sur le comportement copulatoire a été étudié chez des rats normaux jeunes et âgés, en présence de femelle en œstrus et diœstrus.

Détermination du stade de cycle des rats femelles

Un frottis vaginal a été effectué pour savoir le stade du cycle sexuel des rats femelles utilisés pour l’étude de comportement copulatoire des rats mâles. Un frottis vaginal a été effectué chez des rats femelles à l’aide d’une coton tige. Le mucus a été étalé sur une lame mince, etdirectement observéaumicroscope optique à un grossissement (x 100). Les stades du cycle des rats femelles ont été déterminés à partir de l’observation de la taille et de la forme des cellules. Selon MAGUIRE J. L. et ses collaborateurs(2005), les cellules vaginale des femelles en œstrus sont grandes, kératinisées et anucléées, tandis que celles des rats en diœstrus sont grandes, arrondies polynucléées (figures 3 et 4).

Etude de l’effet de RZ013 sur le comportement copulatoire

L’objectif a été d’évaluer l’effet de RZ013 sur les comportements copulatoires des jeunes rats de 12 semaines et des rats âgés de 45 semaines en présence des rats femelles en œstrus et en diœstrus (GULINELLO M ; 2002).
Les rats mâles ont été répartis en 4 lots de 5 rats : un lot a servi de témoin et a reçu de l’eau distillée, trois lots ont été traités avec l’extrait à différentes doses: 600mg/kg ,800mg/kg et 1000mg /kg administré par voie orale dans un volume de 10ml/kg (DIELH et HEINZ K., 2010).
Juste après l’administration de l’extrait, les rats mâles ont été individuellement placés dans des cuvettes en plastique de 28x28x12cm de dimension. Une heure après, un rat femelle en œstrus ou en diœstrus a été introduit dans la cuvette et le comportement du rat mâle a été observé pendant 4 heures. Le nombre de la montée a été noté pendant les 15 premières minutes de chaque heure (AMIN et coll., 1995 ; NELSON et coll., 1995, SUBRAMONIAM et coll., 1997). Toute tentative de copulation de la part des rats mâles, avec ou sans intromission et avec ou sans éjaculation a été considérée comme une montée. Après chaque observation, les rats femelles ont été enlevés et placées dans une cuvette séparée.

Etude de l’effet de l’extrait RZ013 sur l’irrigation du corps caverneux

Dans cette étude, l’objectif a été d’étudier l’effet de caverneux qui se traduit par l’augmentation dudiamètre des rats.
Des rats mâles de 12 semaines, pesant 250 g en moyenne ont été sélectionnés et divisés en 3 lots : un lot témoin ayant reçu du NaCl à 9%o, un lot traité avec de l’extrait à la dose de 800mg/kg et un lot de référence traité avec de la yohimbine à la dose de 10mg/kg dans un volume de 10ml/kg. Les produits à tester ont été injectés par voie i.v rapide dans la veine caudale des animaux dans un volume de 10ml/kg (DIELH et HEINZ K., 2010), et le diamètre pénien a été mesuré 10 minutes après, à l’aide d’un pied à coulisse de 100ème de précision.
Les animaux ont été anesthésiés avec du chloroforme par inhalation. Puis, leur pénis a été libéré de leur fourreau en disséquant la peau de la partie inférieure de l’abdomen. Les muscles du bassin et les tissus adipeux ont été écartés de l’organe pour le libérer (AMIN et coll., 1995).

PARTIE BIOLOGIQUE

Stade du cycle des rats femelles

L’observation des frottis vaginaux de rats femelles ont permis de déterminer le stade de leur cycle sexuel. Les cellules vaginales des femelles en œstrus sont grandes, anucléées et kératinisées, tandis que celles des rats femelles en diœstrus sont toujours grandes, arrondies mais poly nucléées. Ces résultats ont été utilisés pour le choix des rats femelles utilisés lors des tests sur le comportement copulatoire des rats mâles.

Effet de RZ013 sur le comportement copulatoire des rats

Effet de RZ013 sur des jeunes rats mâles en présence des rats femelles en œstrus

L’administration par voie orale de l’extrait RZ013 augmente le nombre de montée des jeunes rats accouplés avec des rats femelles en œstrus par rapport à celui des animaux du lot témoin (figure 4). Une heure après l’administration de RZ013, avec la dose de 800mg /kg le nombre de montée des animaux est de 24 ± 0,7, et 13 ± 0,7 chez le lot témoin (p<0,05). La dose de 600mg/kg ne présente pas une différence significative par rapport au lot témoin.
A la deuxième heure, le nombre de montée des animaux traités avec RZ013 à la dose de 600 et 800mg/kg présente un pic, avec une augmentation de 193,87% et 306,12% du nombre de montée par rapport au témoin , soit respectivement 19 ± 0,7 et 30 ± 0,7 montées pour les doses de 600 et 800mg/kg, contre 9,8 ± 0,6 chez les animaux du lot témoin (p<0,05).
A la dose 1000 mg/kg le nombre de montée diminue par rapport au témoin : 2 ± 0,4 chez les animaux traités aux RZ013 et 9,8 ± 0,6 chez les animaux du lot témoin (p<0,05), et ils présentent des somnolences accompagnées d’hyperhémie au niveau des oreilles et un myosis.

Effet de RZ013 sur des jeunes rats mâles en présence des rats femelles endioestrus

L’administration de l’extrait brut de RZ013 par voie orale augmente le nombre de montée chez les jeunes rats de 12 semaines en présence des rats femelles en diœstrus (figure 5). Une heure après l’administration de l’extrait RZ013, le nombre de montée des animaux ayant reçu une dose de 600 et 800mg/kg augmente pendant le temps d’observation de 15mn par rapport au témoin: 11,2 ± 0,58 et17,6 ± 0,67 de montées chez les animaux ayant reçu les doses 600 et 800mg/kg et 7,4 ± 0,5 montées chez les animaux du lot témoin (p<0,05). Deux heures après l’administration de RZ013, le nombre de montée des animaux traités à la dose de 600 et 800mg/kg présente un pic, correspondant à 288,89% et 472,22% d’ augmentation du nombre de montée par rapport au témoin, soit respectivement 15,6 ± 0,67 et 25,2 ± 0,86 de montées chez les animaux traités avec les doses de 600 et de 800mg/kg, et 5,4 ± 0,5 chez les animaux du lot témoin. A la quatrième heure, le nombre de montées diminue quelque soit la dose.
A la dose de 1000mg/kg, le nombre de montée chez les animaux traités avec l’extrait RZ013 diminue par rapport à celui des animaux du lot témoin, même pendant la première 15 mn de la première heure d’observation soit respectivement : 3,4 ± 0,5 et 5,4 ± 0,5 chez le groupe témoin (p<0,05).

Effet de RZ013 sur des rats mâles âgés en présence des rats femelles en diœstrus.

Le nombre de montée des rats âgés de 45 semaines ayant reçu RZ013 placés avec des rats femelles en diœstrus augmente par rapport à celui des animaux du lot témoin (figure 6). Une heure après l’administration de RZ013, le nombre de montée des animaux traités l’extrait aux doses de 600 et de 800mg/kg augmente à 7,2 ± 0,66 montées chez les animaux ayant reçu 600mg/kg, 10,2 ± 0,37montées pour ceux qui ont reçu 800mg/kg et 3,6 ± 0,5 montées chez les animaux du lot témoinpendant les 15mn d’observation. Soit une augmentation de : 200% et 283% respectivement pour les doses de 600 et de 800mg/kg par rapport au témoin (p<0,05).
Deux heures après l’administration de l’extrait, le nombre de montée des animaux traités aux doses de 600 et de 800mg/kg présente chacune un pic représentant 436,36% et 509,10% d’augmentation de montée par rapport au témoin, soit respectivement 9,6 ± 0,5 et 11,2 ± 0,58 montées pour les doses de 600 et 800mg/kg contre 2,2 ± 0,37 chez les animaux du lot témoin. Et quatre heures après l’administration du produit, la différence des comportements copulatoires des animaux du lot témoin et ceux des lots traités avec l’extrait RZ013 diminue. A la dose de 1000mg/kg, le nombre de montée des animaux traités avec l’extrait RZ013 est inférieur à celui du témoin durant toute l’observation.

DISCUSSION

L’objectif de la présente étude est d’apporter expérimentalement des preuves scientifiques sur l’utilisation empirique de RZ013 sur l’amélioration de la performance sexuelle masculine. Nos résultats montrent que, l’administration par voie orale de l’extrait RZ013 augmente le nombre de montée des animaux des lots traités par rapport aux animaux du lot témoin, et l’administration de l’extrait par voie intra caudale augmente le diamètre pénien. Pendant le stade œstrus, les rats femelles libèrent des phéromones qui attirent les mâles (CARLSON R.N., 2004 ; ETIENNE R., 2004), ce qui explique l’augmentation du nombre de montées des rats mâles pendant cette période. Tandis que les femelles en diœstrus ne libèrent pas de cette phéromone (GULINELLO M., 2002). Nos résultats montrent quequel que soit le stade du cycle des rats femelles, le nombre de montées des rats traités avec l’extrait augmente par rapport à celui des animaux du lot témoin. Ce qui montre que la phéromone n’influence pas le comportement copulatoire des animaux ayant reçu l’extrait RZ013. Avec l’âge la testostéronémie diminue, ce qui entraîne l’augmentation du temps de latence entre la stimulation sexuelle et l’érection, et la période réfractaire entre les érections (ALLAIN H., 2001). Comme nos résultats montrent que le nombre de montées des rats âgés, par rapport aux animaux du lot témoin du même âge, qu’ils soient accouplés aux femelles en œstrus ou en diœstrus. L’âge n’est pas un facteur limitant pour l’utilisation de l’extrait RZ013. L’injection de l’extrait dans la veine caudale, augmente le diamètre pénien. Cette augmentation du diamètre pénien s’explique par une vasodilatation et un relâchement des muscles lisses du corps caverneux (LINCOLN T.M.et coll., 1993).Cette vasodilatation est confirmée par l’hyperhémie au niveau des oreilles des rats traités avec l’extrait à forte dose. En plus, cette dose provoque une somnolence, ce qui expliquerait en partie la baisse du nombre de montées des animaux traités avec l’extrait à forte dose. D’après C.E.E.D.M.M. (2011), les saponines stimulent la libération du monoxyde d’azote (NO) qui favorise une vasodilatation pénienne. Ils pourraient aussi stimuler l’enzyme 17-stéroïde réductase impliqués dans la production de la testostérone et augmente sa concentration plasmatique (NGOM M., 2010). Ce qui nous permet de dire que l’augmentation de la montée chez lesrats traités avec RZ013 pourrait être due à la présence de ces saponosidesqui se trouvent en grande quantité dans l’extrait.
Une autre hypothèse serait que l’extrait RZ013 contient des molécules qui bloquent les récepteurs α2 adrénergiques pré-synaptique et empêche la libération de la noradrénaline (BARBIN A., 2011). Cet effet donne un avantage au système nerveux parasympathique provoquant une excitation des centres spinaux des organes génitaux dans la zone sacrale (KALSNER., 1992 ; RILEY., 1994), conduisant à une vasodilatation suivie d’accumulation sanguine au niveau du bassin et les organes génitaux. Ce qui expliquerait l’augmentation du volume pénien suite à l’administration de l’extrait RZ013 par la veine caudale. D’autre part, l’extrait RZ013 contient des alcaloïdes et des polyphénols. Or les alcaloïdes du type indole d’origine végétale ou synthétique sont utilisés pour traiter les troubles érectiles (CHIOU et coll., 1998 ; LUE., 1990 ; GUAY et coll., 2001 ; HAURI., 2002). Ils provoquent une vasodilatation par l’intermédiaire de l’oxyde nitrique(NO) et qui aboutit à la relaxation des muscles lisses du corps caverneux des rats (KAMENI., 2011).
Les polyphénols dilatent également les vaisseaux (BAHORUN et coll., 1996 ; CETKOVICG.et coll., 2008) en stimulant les eNOS, enzymes responsables de la production de monoxyde d’azote (NO) au niveau de l’endothélium (AUGER C et coll., 2010), favorisant une vasodilatation et le relâchement des muscles lisses du corps caverneux. Comme l’extrait RZ013 contient une forte teneur en polyphénols, une autre possibilité serait que son effet passe par la stimulation de eNOS, ou par inhibition de la PDE.5 comme la Sildénafil, principe actif du VIAGRA (BOOLELL M., 1996 ; GOLDSTEIN I., 1998).

Table des matières

INTRODUCTION
MATERIELS ET METHODES
I. ETUDE PHYTOCHIMIQUE
1. Extraction de l’extrait
2. Criblage phytochimique
II. TESTS BIOLOGIQUE
1. ADMINISTRATION DE L’EXTRAIT
2. ANIMAUX D’EXPERIMENTATION
3. ETUDE IN-VIVO DES EFFETS DE RZ013
a Détermination du stade de cycle des rats femelles
b Etude de l’effet de RZ013 sur le comportement
c Etude de l’effet de l’extrait RZ013sur l’irrigation du corps caverneux
III. ANALYSE STATISTIQUE
RESULTATS
I. PHYTOCHIMIE
II. TESTS BIOLOGIQUES
1. Stade du cycle des rats femelles
2. Effet de RZ013 sur le comportement copulatoire
a. Effet de RZ013 sur des jeunes rats mâles en présence des rats femelles en oestrus
b. Effet de RZ013 sur des jeunes rats mâles en présence des rats femelles en dioestrus
c. Effet de RZ013 sur des rats mâles âgés en présence des rats femelles en dioestrus
d. Effet de l’extrait RZ013 sur l’irrigation du corps caverneux
DISCUSSION
CONCLUSION
REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES

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