Soutenance mémoire
Intima
L’intima est principalement constituée de l’intérieur vers l’extérieur, d’une mono-couche de cellules endothéliales et d’une fine couche de tissu conjonctif. Ces cellules endothéliales sont directement en contact avec le sang circulant et donc avec les métabolites, les hormones, et tout ce que peut transporter le sang. Cette couche est identique quel que soit le territoire vasculaire et il y a très peu de différences dans sa structure. Il faut noter cependant que dans les artères élastiques, l’intima, très épaisse peut contenir des cellules musculaires lisses particulières dites myointimales. Quel que soit le diamètre de la paroi, il y a toujours une seule couche de cellules endothéliales. Ces cellules endothéliales sont en forme de losange et leur juxtaposition constitue une mosaïque. Leur grand axe est allongé dans le sens de l’écoulement sanguin et cette orientation est déterminée par les forces de cisaillement appliquées à leur surface.
Rôles physiologiques du NO d’origine endothéliale
Le NO d’origine endothéliale exerce localement des effets multiples (figure 7). Il peut diffuser vers les couches cellulaires sous jacentes. Le NO inhibe le tonus vasculaire, la migration et la prolifération des cellules musculaires lisses ainsi que la synthèse des protéines de la matrice extracellulaire. Le NO peut aussi diffuser vers le lumen des vaisseaux sanguins où il contribue au maintien de la fluidité sanguine.[52] Le NO inhibe l’adhésion des plaquettes sanguines et des leucocytes aux cellules endothéliales .De plus il prévient l’agrégation plaquettaire et facilite la dissolution d’agrégats plaquettaires.[51] Le NO exerce vraisemblablement son rôle régulateur sur l’hémostase uniquement à l’interface de la surface luminale des cellules endothéliales et du sang, car il est rapidement capté par l’hémoglobine des hématies et est inactivé par les radicaux oxygénés tels les anions superoxydes. Le NO peut également affecter l’activité du système fibrinolytique en régulant la libération de l’activateur tissulaire du plasminogène (tPA) et de l’inhibiteur tissulaire du plasminogene de type1 le PAI-1, mais aussi l’expression de divers gènes pro-athérosclérotiques comme le Monocyte chemoattractantproteine1( MCP1) et le facteur tissulaire.
Mécanisme de vasomotricité de la Cellule musculaire lisse vasculaire
L’état de contraction des CML dépend de la concentration en Ca2+ cytoplasmique et de la sensibilité de l’appareil contractile au calcium. La CML doit être capable d’augmenter la concentration de Ca2+ rapidement, et de la diminuer tout aussi rapidement. Il s’avère que la concentration de Ca2+ cytoplasmique est plus faible que la concentration extracellulaire et que la concentration à l’intérieur des stocks intracellulaires (majoritairement le réticulum sarcoplasmique). La hausse du taux de Ca2+ va donc être un phénomène plutôt passif alors que la baisse va demander une dépense d’énergie.
– Effets du calcium intra cellulaire : Dans les CML la concentration cytoplasmique en Ca2+ est d’environ 0,1 µM alors que pour le compartiment extracellulaire elle avoisine 1 à 2 mM et 10 à 15 mM pour le réticulum sarcoplasmique[14]. Malgré ce gradient de concentration et un potentiel de membrane favorable (-80 mV), l’entrée du calcium dans la cellule est très faible car les canaux calciques voltage-dépendant sont fermés et que la diffusion passive à travers la bicouche lipidique est négligeable [44.24]. Ce gradient de Ca2+ est maintenu par différents mécanismes de transport.
– Transport de Ca2+ à travers la membrane plasmique : Ce transport est assuré par une Ca2+ -ATPase bien caractérisée [12]. Son expression est variable dans les CMLV : elle est faible ou absente dans les petits vaisseaux et plus abondante dans les CML des grosses artères ou grosses veines [34]. Cette enzyme est considérée comme étant neutre d’un point de vue du potentiel de membrane, pompant 2 ions H+ pour chaque ion Ca2+ expulsé, mais importante en ce qui concerne la régulation du pH intracellulaire [12.13].
– Transport à travers les membranes intracellulaires : Parmi les différentes organelles de la CMLV, les mitochondries jouent un rôle important dans l’homéostasie calcique uniquement dans les cellules avec un taux de Ca2+ pathologiquement élevé [56]. Le rôle possible du noyau dans le stockage du calcium intracellulaire est encore controversé, et seul le reticulum sarco/endoplasmique joue un rôle primordial dans la régulation du Ca2+ intracellulaire. Le réticulum sarcoplasmique (RS) ne représente que 1,5 à 7,5 % du volume cellulaire total. Il est typiquement plus abondant dans les vaisseaux toniques (comme l’aorte ou les artères élastiques) que dans les vaisseaux phasiques (comme la veine porte) où il ne représente que 1,5 à 2 % du volume cellulaire [55]. Dans les CML artérielles son abondance diminue proportionnellement à la taille de la lumière du vaisseau [56]. Le pompage du Ca2+ dans le réticulum est assuré par des ATPases Ca2+ -dépendantes du RS (Sarco Endoplasmic Reticulum Calcium ATPase : SERCA) qui peuvent représenter jusqu’à 90 % des protéines de la membrane du réticulum.
Utilisations alimentaires et médicinales
L’ail est très utilises dans l’alimentation du fait de sa richesse en vitamines A, B1, B2 et C, il contient également divers antibiotiques naturels dont l’ajoène (ce dernier, instable, serait retrouvé à de trop faibles doses dans l’organisme après ingestion d’ail pour avoir une réelle efficacité [42]) ainsi que des agents anticholestérolémiants [15]. Il contient de l’inuline, qui est un pré biotique (stimule le développement des bactéries bénéfiques de la flore intestinale). Il possède des agents anticoagulants [3] pouvant potentialiser les risques de saignements en cas d’association avec des médicaments antiagrégants plaquettaires [41]. Les extraits d’ails sont utilisés communément dans le traitement du rhume [41]. Il pourrait avoir une efficacité pour réduire le risque d’hypertension artérielle [53]. Sur la base de 5 études [23] , une synthèse statistique internationale évalue comme une « évidence » que la consommation régulière d’une gousse d’ail (3 g) par jour réduirait de moitié le risque de cancer de l’estomac, du colon et du rectum. L’enzyme allinase qui produirait ces effets nécessite 15 mn pour sa formation dans l’ail cru écrase [53]. L’ail possède des propriétés démontrées.
– anti-athéromateux ;
– anti hypertensive ;
– anticholestérolémiants [15] ;
– fibrinolytique, anti-aggregante plaquettaire ;
– immunostimulante et antibiotique [64].
Préparation de l’extrait brut de Allium sativum
L’extraction est généralement déterminée par les informations bibliographiques concernant la chimie des constituants de la plante. Comme solvant, nous avons utilisé un mélange eau/méthanol (40/60). L’extraction s’effectue en 3 étapes :
– La macération : cette méthode de préparation a été choisie car elle permet de limiter la dégradation des composés thermolabiles.
– La filtration : elle est réalisée sous vide, à l’aide d’une fiole de Kitassato, un entonnoir et du papier filtre.
– L’évaporation : elle est réalisée à l’aide de l’évaporateur rotatif et permet de se débarrasser du méthanol et de l’eau.
On introduit 100 grammes de pulpe de fruit obtenus par grattage des fruits dans un erlenmeyer préalablement taré à 0. Mesurer 500 ml de solution eau/méthanol (300 ml de Méthanol et 200 ml d’eau) qu’on ajoute dans l’erlenmeyer plus 0,5 ml de TFA. L’erlenmeyer est vigoureusement agité puis laissé au repos pendant 2 h durant lesquelles, il sera remué toutes les 15 mn. Il est à noter que l’erlenmeyer est recouvert d’un papier aluminium, afin de protéger les molécules photosensibles. Après la macération, la phase organique ou macérat est récupérée et conservée à +4°C. Après cette étape, le macérat est filtré avec du coton hydrophile placé dans un entonnoir relié à une pompe aspirante qui accélère la filtration. Après quelques minutes, on obtient une solution exclusivement liquide. Le filtrat obtenu est évaporé à sec à l’aide de l’évaporateur rotatif dans les conditions suivantes : température du bain-marie 40°C, température de refroidissement 21°C et le nombre de rotation 4000 tr/mn. Ainsi l’évaporation aboutit à l’obtention d’un extrait brut sec de la gousse d’ Allium sativum sec à partir duquel est testée la réactivité des vaisseaux. L’extrait brut sec est conservé à une température de -20°C au réfrigérateur.
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Table des matières
INTRODUCTION
PREAMBULE
PREMIERE PARTIE : GENERALITES SUR LE VAISSEAU
I.STRUCTURE DU VAISSEAU
1. INTIMA
2. MEDIA
3. ADVENTICE
4. VASO VASORUM
5. INNERVATION
II.ORGANISATION FONCTIONNELLE DE LA PAROI VASCULAIRE
1. L’ENDOTHELIUM
a. LES FACTEURS VASORELAXANTS
b. LES FACTEURS VASOCONSTRICTEURS
2. LE MUSCLE LISSE VASCULAIRE
a. MECANISME DE VASOMOTRICITE DE LA C.M.L.V.
b. REGULATION DE LA VASOMOTRICITE DE LA C.M.L.V
II.1.DENOMINATION
II.2.DESCRIPTION
II.3.CLASSIFICATION DE Allium sativum
II.4. LA COMPOSITION CHIMIQUE DE Allium sativum
II.5.UTILISATIONS ALIMENTAIRES ET MEDICINALES
DEUXIEME PARTIE : ETUDE BIBLIOGRAPHIQUE SUR Allium sativum
I. CADRE DE L’ETUDE
I.1. Situation géographique
I.2. Le personnel du laboratoire
II. MATERIELS
II.1. Le matériel de laboratoire
a. Petit matériel
b. Appareils du laboratoire
c. Solutions, solvants et réactifs utilisés
II.2. Les animaux
II.2.1. Espèces utilisées
II.2.2. Conditions d’élevage
II.3. Le matériel végétal
III.METHODES
III.1. Préparation de l’extrait brut de Allium sativum
III.2. Préparation de la solution physiologique de Krebs
a. Préparation de la solution mère de Krebs
b. Préparation de la solution fille de Krebs
III.3. Mise en route du système à organes isolés
III.4. Sacrifice de l’animal et préparation des vaisseaux
III.5. Préparations des solutions d’Adrénaline, d’Acétylcholine et de la L-NAME
a. Préparation de la solution d’Adrénaline
b. Préparation de la solution d’Acétylcholine
c. Préparation de la solution de L-NAME
III.6. Tests de réactivité vasculaire
a. Test de sensibilisation
b. Test fonctionnel
III.7. Caractérisation des effets vasoactifs de l’extrait de Allium sativum
a. Préparation de la gamme de concentration de l’extrait brut
b. Recherche de propriétés vasoactives de l’extrait de Allium sativum
c. Recherche des mécanismes impliqués dans les effets vasoactifs de l’extrait brut de Allium sativum
III.8. Analyses statistiques
IV. LES RESULTATS
IV.1. Effets vasculaires de l’extrait brut de Allium sativum en présence et en l’absence d’endothélium fonctionnel
IV.2. Effet vasorelaxant de l’extrait brut de Allium sativum en présence de la L-NAME
IV.3. vasoconstriction induite par l’Adrénaline en présence et en l’absence d’endothélium
IV.4. Effets préventifs de l’extrait de Allium sativum sur la vasoconstriction induite par l’Adrénaline en présence d’endothélium
IV.5. Effets préventifs de l’extrait de Allium sativum sur la vasoconstriction induite par l’Adrénaline en l’absence d’endothélium
V. DISCUSSION
CONCLUSION
REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES
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