Rappels bibliographiques
ย ย ย ย Les espรจces de microorganismes utilisรฉes sont les suivantes: une bactรฉrie Gram positif (Staphylococcus aureus de la famille des Micrococaceae) et des bactรฉries Gram nรฉgatif (Escherichia coli, Salmonella anatum, et Salmonella cholerae suis de la famille des Enterobacteriaceae). Le Staphylocoque est un microbe du pus et rรฉpond aux caractรฉristiques suivantes :
-Cocci groupรฉs en grappe de raisins
-Gram positif
-Sรฉcrรจte une toxine
-Aรฉrobie facultatif
Escherichia coli, Salmonella anatum, et Salmonella cholerae suis appartiennent ร la famille des Enterobacteriaceae et sont dรฉfinies par les caractรฉristiques suivantes : [WILFRID, 1963]
-Bacilles ร Gram nรฉgatif, long de 2 ร 3 ยตm et large de 0.6 ยตm
-Aรฉro-anaรฉrobies
-Mobiles ou immobiles
-Facilement cultivables
-Fermentent le glucose
-Rรฉduisant les nitrates en nitrites
-Dรฉpourvus dโoxydase
Test dโantagonisme et de synergie utilisant des disques
ย ย ย Les activitรฉs dโun antibiotique de rรฉfรฉrence et dโune substance antibactรฉrienne sont รฉtudiรฉes sรฉparรฉment puis ensemble sur la croissance dโun germe donnรฉ. Lorsque lโantibiotique et la substance sont testรฉs ensemble, leurs activitรฉs peuvent sโamplifier (synergie) ou diminuer (antagonisme) comparรฉes ร celles observรฉes lorsquโelles sont testรฉes sรฉparรฉment. Nous utilisons pour ce faire des disques ยซ non imprรฉgnรฉs ยป de cellulose de 6 mm de diamรจtre (produits par Institut Pasteur Production) : 15 ยตl de la solution ร tester sont dรฉposรฉes sur le disque que lโon met ensuite ร sรฉcher avant de le disposer sur le milieu dโessai. Lorsque les diamรจtres dโinhibition de chaque substance tรฉmoin (antibiotique de rรฉfรฉrence) et essai (substance ร tester) sont obtenus, nous avons rรฉalisรฉ un nouveau test en plaรงant les 2 disques tรฉmoin et essai ร une distance รฉgale ร la moyenne de leurs diamรจtres dโinhibition, et comparรฉ les rรฉsultats obtenus lorsque les 2 substances (tรฉmoin et essai) sont testรฉes sรฉparรฉment avec ceux de leurs effets combinรฉs. Deux effets peuvent en rรฉsulter :
-Il existe un antagonisme si lโassociation diminue lโactivitรฉ de lโun ou de lโautre agent antimicrobien.
-Il y a synergie si lโeffet de lโassociation est supรฉrieur ร la somme des effets pris sรฉparรฉment.
Test dโantagonisme par la mรฉthode de diffusions croisรฉes (mรฉthode des bandelettes) [STEPHEN, 1978]
ย ย ย Une bandelette chargรฉe dโantibiotique de rรฉfรฉrence et une bandelette chargรฉe de substance supposรฉe avoir une interfรฉrence avec lโaction de lโantibiotique de rรฉfรฉrence (antagoniste) sont disposรฉes en position croisรฉe sur le milieu dโessai prรฉalablement ensemencรฉ de germe-test. Sโil nโy a pas antagonisme, la zone dโinhibition de lโantibiotique de rรฉfรฉrence sera linรฉaire le long de la bandelette. Mais lorsque la substance essai est un antagoniste de lโantibiotique, une ligne diagonale se formera.
CONCLUSION GENERALE
ย ย ย Ce travail a eu pour objectif la contribution ร une caractรฉrisation des activitรฉs antibactรฉriennes de Canarium madagascariense. Dโabord, nous avons effectuรฉ lโรฉtude de la toxicitรฉ aiguรซ car il est nรฉcessaire que lโactivitรฉ apparaisse ร des doses pour lesquelles la toxicitรฉ est nรฉgligeable. Les doses qui tuent les animaux ร 0%, 50% et 100% sont respectivement รฉgales ร 175 g/kg ; 335 g/kg et 400 g/kg de poids corporel de lโanimal. Concernant lโรฉvaluation de lโactivitรฉ antibactรฉrienne, la mรฉthode dite de diffusion sur milieu solide et la mรฉthode sur milieu liquide ont รฉtรฉ employรฉes. La premiรจre mรฉthode a mis en รฉvidence lโexistence dโune activitรฉ antibactรฉrienne chez la plante sur certaines souches bactรฉriennes. En outre, deux paramรจtres ont รฉtรฉ รฉtudiรฉs avec cette mรฉthode telle que le pH et la concentration. Ainsi, on a pu constater que le changement de pH nโaffecte pas dโune maniรจre significative lโactivitรฉ de Cm lyo (dรฉcoctรฉ de tiges et de feuilles) sur Escherichia coli, Salmonella anatum, Salmonella cholerae suis et Staphylococcus aureus. La sensibilitรฉ de Staphylococcus aureus est proportionnelle avec la variation de la concentration de Cm lyo. En comparant les activitรฉs de divers extraits de Ramy, on en dรฉduit quโil existerait dans la graine une substance extractible par lโhexane (un solvant trรจs peu polaire) et ayant une activitรฉ antibactรฉrienne trรจs rรฉduite comparรฉe ร celle extraite ร partir de la tige feuillรฉe et par dรฉcoction ou par une extraction hydroalcoolique ร chaud. La substance responsable du ralentissement de la croissance sans lโinhiber entiรจrement contenue dans lโextrait de graine C3 (obtenu par hydrodistillation suivie dโune macรฉration ร lโhexane) et qui est soluble dans lโhexane serait aussi prรฉsente dans les dรฉcoctรฉs et les extraits RMMF (extrait alcoolique ร froid) et RMC (extrait hydroalcoolique ร chaud). Dโaprรจs la variation de la rรฉponse en fonction de la concentration de Cm lyo nous pouvons conclure que lโoptimum dโactivitรฉ est obtenu ร 50 mg/ml sur Staphylococcus aureus avec une charge de 1000 ยตg/puits. Lโantagonisme ou la synergie de RT/d/lyo (dรฉcoctรฉ de tiges)et RF/d/lyo (dรฉcoctรฉ de feuilles) avec quelques antibiotiques de rรฉfรฉrences (Nรฉomycine, Nitrofurantoine, Furadantine gรฉlule et Claforan) sont aussi รฉtudiรฉs en employant diverses mรฉthodes telles que la mรฉthode des disques et des bandelettes (par diffusions croisรฉes, et associรฉe ร un gradient de concentration). Parmi ces antibiotiques, seule la Nรฉomycine nโexerce pas de synergie (antagoniste) avec RT/d/lyo et RF/d/lyo. La mรฉthode sur milieu liquide donne des valeurs de la CMI et de la CMB qui sont toutes รฉgales ร 0.6 mg/ml. Dโaprรจs la valeur de la CMI, la CMB et le test de toxicitรฉ aiguรซ, la dose la plus รฉlevรฉeย qui ne tue aucun animal (DL0) dรฉpasse largement la valeur de la CMI et de la CMB. Lโactivitรฉ apparaรฎt donc ร des doses pour lesquelles la toxicitรฉ est nรฉgligeable. Puisquโaucune รฉtude nโa encore รฉtรฉ faite sur Canarium madagascariense concernant ses activitรฉs antibactรฉriennes, des รฉtudes plus approfondies sont encore envisageables telles que :
-la dรฉtermination des familles chimiques de Canarium madagascariense
-la recherche des activitรฉs antibactรฉriennes de ces familles chimiques
-les tests sur dโautres souches de bactรฉries
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Table des matiรจres
Introduction gรฉnรฉrale
Premiรจre partie : Etude bibliographique
Le matรฉriel vรฉgรฉtal
1-Position systรฉmatique
2-Ecologie
3-Description botanique
3-1 Appareil vรฉgรฉtatif
3-2 Appareil reproducteur
3-3 Origine et distribution gรฉographique
3-4 Croissance et dรฉveloppement
4-Utilisations
4-1 La rรฉsine ร odeur de tรฉrรฉbenthine
4-2 Les racines
4-3 Lโรฉcorce
4-4 Les graines
5-Autres informations botaniques
Deuxiรจme partie : Matรฉriels et mรฉthodes
A-Test de toxicitรฉ aiguรซ
1-But et principe
2-Etude de la toxicitรฉ aiguรซ par injection unique
2-1 Matรฉriels et rรฉactifs
2-2 Protocole expรฉrimental
2-3 Interprรฉtation des rรฉsultats et dรฉtermination de la DL50
B-Etude de lโactivitรฉ antibactรฉrienne
1-Rappels bibliographiques
2-Les souches bactรฉriennes utilisรฉes
2-1 Entretien
2-2 Isolement
2-3 Identification et contrรดle dโidentitรฉ et conservation des souches
2-3-1 Coloration de Gram
2-3-2 Conservation des souches au laboratoire
3-Numรฉration des cellules bactรฉriennes
3-1 Prรฉparation de la prรฉ-culture
3-2 Conduite de la numรฉration
4-Test dโรฉvaluation de lโactivitรฉ antibactรฉrienne
4-1 Introduction
4-2 Conduite du test
4-2-1 Test sur milieu solide
4-2-1-1 Technique des puits
4-2-1-2 Test de rรฉfรฉrence
a-Principe
b-Choix de lโantibiotique
c-Protocole expรฉrimental
d-Lecture
4-2-1-3 Les essais : Test des activitรฉs antibactรฉriennes des extraits de Ramy
a-Test ร diffรฉrents pH
b-Test ร diffรฉrentes concentrations
c- Comparaison des activitรฉs de divers extraits de Ramy
4-2-1-4 Relation entre lโactivitรฉ antibactรฉrienne et la concentration de la substance testรฉe
a-But
b-Principe
4-2-1-5 Test dโantagonisme et de synergie
a-Test dโantagonisme et de synergie utilisant des disques
b-Test dโantagonisme et de synergie utilisant des bandelettes de papier filtre
b1-Test dโantagonisme par la mรฉthode de diffusions croisรฉes
b2-Test de synergie associant bandelette et gradient de concentration dโantibiotique
4-2-2 Test sur milieu liquide
4-2-2-1 Principe et mรฉthode
4-2-2-2 Dรฉtermination de la CMI et CMB
Troisiรจme partie : Rรฉsultats et interprรฉtations
A-Etude de toxicitรฉ aiguรซ
1-Dรฉtermination des doses lรฉtales
2-Dรฉtermination de la DL50
2-1 Par la mรฉthode algรฉbrique
B-Etudes microbiologiques
1-Numรฉration des cellules bactรฉriennes
2-Caractรฉrisation de lโactivitรฉ antibactรฉrienne
2-1 Test sur milieu solide
2-1-1 Rรฉsultats obtenus par la mรฉthode des puits
2-1-2 Variation de la rรฉponse en fonction de la concentration de la substance ร tester
2-1-3 Rรฉsultats du test dโantagonisme et de synergie
a-Rรฉsultats obtenus par la mรฉthode des disques
b-Rรฉsultats obtenus par la mรฉthode de diffusions croisรฉes (mรฉthode de bandelettes)
c-Rรฉsultats obtenus par la mรฉthode de bandelette associรฉe ร un gradient de concentration dโantibiotique
2-2 Test sur milieu liquide
2-2-1 La Concentration Minimale Inhibitrice (CMI) et la Concentration Minimale Bactรฉricide (CMB)
Conclusion gรฉnรฉrale
Rรฉfรฉrences bibliographiques
Annexes
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