Étude de l’effet de l’extrait RFJT sur la phase l’inflammatoire

Télécharger le fichier pdf d’un mémoire de fin d’études

MATÉRIELS ET MÉTHODES A. PARTIE CHIMIQUE

Préparation de l’extrait

Les feuilles et les fleurs d’une plante utilisée par la population de la région VAKINAKARATRA en cas de blessure, ont été récoltées au mois d’Octobre 2017 à Betafo. Elles ont été étalées et séchées à l’ombre, à l’air libre, à la température ambiante pendant 1 mois. Ensuite elles ont été broyées à l’aide d’un broyeur à marteau (BROOK CROMPTON, Série 2000) au LPGPC. Puis 200 g de la poudre obtenue ont été macérés dans 1,5 litre d’un mélange éthanol-eau (60 : 40) à la température ambiante, pendant 72 heures. Ce mélange a été agité une fois par jour, pendant 10 minutes. Le macérât a ensuite été filtré sur du coton hydrophile, et le filtrat ainsi obtenu a été évaporé avec un distillateur à la température de 80° C, puis dans un bain marie à la température de 100° C. L’extrait sec obtenu a été codé RFJT. Le rendement de l’extraction a été calculé selon la formule : Masse de l’extrait obtenu Rendement = Masse de la poudre utilisée x 100

Criblage phytochimique

Le but de cette analyse a été de déterminer les différentes familles chimiques présentes dans l’extrait RFJT. Elle est basée sur l’utilisation des réactifs spécifiques pour chaque constituant chimique, dont la présence provoque une réaction caractérisée par un changement de couleur de la solution ou l’apparition d’une précipitation (FONG et al., 1977) (Tableau I).
Les signes suivants ont été utilisés pour quantifier la teneur relative des familles chimiques présentes dans l’extrait :
+++ : présence de la famille recherchée en forte teneur
++ : présence de la famille recherchée en teneur moyenne
+ : présence de la famille recherchée en faible teneur
± : présence de la famille recherchée à l’état de trace.
– : absence de la famille recherchée

PARTIE PHARMACOLOGIQUE

Afin d’étudier l’activité de la plante utilisée pour traiter les plaies cutanées, un extrait hydro alcoolique RFJT a été préparée sous forme de crème eau dans huile. Cette forme galénique a été choisie pour faciliter l’application de l’extrait (MARTINI, 2006).

Préparation de la crème de base

La crème est composée de deux phases : une phase aqueuse et une phase grasse. La phase aqueuse a été constituée d’eau distillée et de bicarbonate. Ce dernier a servi de conservateur, tandis que la phase grasse a été constituée d’huile de tournesol et de cire d’abeille en tant qu’épaississant (tableau II).

Préparation de la crème contenant 10 % de l’extrait RFJT

Pour étudier l’effet de l’extrait RFJT sur la plaie, il a été incorporé dans la crème de base. Pour préparer 100 g de cette crème, 10 g de RFJT ont été incorporés dans 90 g de crème de base. L’activité de l’extrait RFJT1 a été étudiée en appliquant 10 mg de cette crème par jour, par plaie chez le rat.

Animaux d’expériences

Des rats mâles, de souche Wistar, âgés de 3 à 4 mois, pesant entre 160 à 180 g ont été utilisés. Ils ont été élevés dans l’animalerie du LPGPC et nourris avec de la provende LFL 1420 et ont eu un accès libre à de l’eau. Ils ont été soumis à un cycle de 12 / 12 heures de lumière et d’obscurité.
Les rats ont été divisés en 2 lots : 1 lot témoin, et 1 lot traité avec l’extrait. Les plaies des animaux du lot témoin ont été traitées avec la crème de base, tandis que celles des rats du deuxième lot ont été traitées avec la crème contenant 10 % de l’extrait RFJT.

Création des plaies

Les rats ont été anesthésiés par inhalation d’éther diéthylique (BASHKAR, 2012). Ensuite les poils de la région dorsale de ces rats ont été tondus à l’aide d’une tondeuse électrique (NOVA NS-216). Puis la peau a été nettoyée avec de l’eau savonneuse, ensuite 2 plaies symétriques circulaires de 1 cm de diamètre ont été créées de part et d’autre de la colonne vertébrale au niveau de la région scapulaire avec un dispositif comportant une lame tranchante circulaire de 1cm de diamètre, et de 1mm de profondeur (DELEAGE ,2011).

Étude de l’effet de l’extrait RFJT sur la cicatrisation

L’effet de l’extrait RFJT sur la cicatrisation a été étudié sur des plaies expérimentales ouvertes, chez le rat. Il a été appliqué par voie topique sous forme de crème eau dans huile contenant 10 % d’extrait. L’état des plaies a été observé tous les jours à la même heure, puis leur surface a été mesurée.

Étude de l’effet de l’extrait RFJT sur l’hémostase

Tout de suite après la création des plaies, 10 mg de crème de base ont été appliqués sur les plaies des animaux témoins, et la même quantité de crème contenant l’extrait RFJT ont été appliqués sur les plaies des animaux du deuxième lot. La durée de saignement de ces animaux a été chronométrée (OKOLI et al., 2007).

Étude de l’effet de l’extrait RFJT sur la phase inflammatoire

Tous les jours, à la même heure, après avoir nettoyé les plaies, l’effet de l’extrait RFJT sur la phase inflammatoire a été étudié en notant le temps d’apparition des signes inflammatoires sur la berge et à la surface des plaies traitées avec la crème contenant RFJT (DELEAGE, 2011).

Étude de l’effet de l’extrait sur la phase de bourgeonnement

Afin d’étudier l’effet de l’extrait RFJT sur la phase de bourgeonnement, tous les jours, à la même heure, après le nettoyage des plaies, leur surface a été observée, et le temps d’apparition des granules sur la surface des plaies ainsi que leur nombre chez les animaux traités avec l’extrait ont été noté et comparés avec ceux des animaux traités avec la crème de base (SONI et SINGHAI, 2012).

Étude de l’effet de l’extrait RFJT sur la phase d’épithélialisation

L’effet de l’extrait sur la phase d’épithélialisation a été étudié en enregistrant le temps d’apparition du tissu épithélial recouvrant la surface des plaies traitées avec l’extrait par rapport à celui des plaies témoins (SUBHASHINI et ARUNACHALAM, 2011).

Effet de l’extrait sur la variation de la surface des plaies.

La surface a été mesurée tous les jours par planimétrie directe. Pour ce faire, un papier millimétré transparent a été placé directement sur la surface de la plaie, et son contour a été tracé sur le papier à l’aide d’un crayon (KARABINTA, 201O).

RÉSULTATS

PARTIE CHIMIQUE

Rendement de l’extraction

Après l’évaporation à sec du filtrat obtenu avec 200 g de poudre de feuilles et des fleurs, 27 g d’extrait sec codé RFJT sont obtenus, soit un rendement de 13,5 %.

Criblage phytochimique

Le criblage phytochimique effectué sur l’extrait RFJT révèle la présence d’alcaloïdes, de tanins, de composés phénoliques, de flavonoïdes, de triterpènes et de stéroïdes en forte teneur, tandis que les anthocyanes sont présents en moyenne teneur et les leucoanthocyanes en faible teneur (tableau III).

PARTIE PHARMACOLOGIQUE

L’observation quotidienne de l’état de la surface des plaies expérimentales chez les rats, a permis de suivre l’évolution de l’effet de l’extrait RFJT sur les différentes phases de la cicatrisation de la plaie.

Effet de l’extrait RFJT sur l’hémostase

L’application par voie topique de la crème contenant 10 % de l’extrait RFJT, diminue la durée de saignement par rapport à celle du lot témoin. Les plaies traitées avec l’extrait saignent pendant 29 ± 8,75 secondes, contre 124 ± 6,5 secondes chez les plaies du lot témoin (P<0,05).

Effet de l’extrait RFJT sur l’inflammation

Vingt-quatre heures après la création des plaies, toutes les plaies présentent une rougeur, un œdème au niveau de la berge des plaies, et un exsudat au niveau de leur surface. Ces signes durent 5 jours chez les plaies traitées avec l’extrait, contre 8 jours chez les témoins (figure 1) (P<0,05).

Effet de l’extrait RFJT sur le bourgeonnement

La phase proliférative est caractérisée par l’apparition de granules au niveau de la surface des plaies. L’application de la crème contenant 10 % de l’extrait RFJT accélère leur formation par rapport à celle du témoin.
Après 3 jours de traitement, le nombre de granules chez les plaies traitées avec l’extrait est égal à 98,9 ± 6,7. Les plaies du lot témoin présentent encore des signes inflammatoires. Après 6 jours de traitement, il est égal à 159,5 ± 12,97 chez les plaies traitées avec l’extrait, contre 40 ± 4,5 chez le lot témoin (P<0,05).

Effet de l’extrait RFJT sur l’épithélialisation

Après 12 jours du traitement un tissu épithélial recouvre les plaies des animaux traités avec l’extrait RFJT, contre 15 jours chez les plaies du lot témoin, (Figure 3).

Effet de l’extrait RFJT sur la variation de la surface des plaies.

Juste après leur création, la surface initiale des plaies est égale à 113 mm2. Après 3 jours du traitement, la surface de la plaie chez le rat du lot traité présente un pic de surface égal à 135 ± 1,91 mm2. Par contre, chez le lot témoin après 5 jours, elle égale à 124,75 ± 4,57 mm2 (figure 4). Les plaies sont complètement fermées après 16 jours chez les plaies traitées avec l’extrait, contre 22 jours chez les plaies témoins.
Le temps de cicatrisation à 50% chez la plaie traitée est de 8, contre 12 jours chez le lot témoin.

DISCUSSION

Notre objectif a été d’étudier l’effet de l’extrait RFJT sur la plaie expérimentale ouverte, sous forme de crème à 10 %, chez le rat. Nos résultats montrent que l’extrait RFJT diminue la durée de saignement, la durée de la phase inflammatoire et le temps d’apparition des granules. Il augmente le nombre de granules et accélère l’épithélialisation et la fermeture des plaies chez les animaux traités avec l’extrait par rapport aux animaux témoins.
La diminution de la durée de saignement chez les plaies traitées avec l’extrait montre qu’il possède une activité hémostatique. Celle-ci pourrait être due à l’action des tanins. Des études effectuées sur un extrait de feuilles de Lawsonia inermis (LYTHRACEAE) ont montré que les tanins accélèrent l’hémostase (AMIT et al., 2011). Ils précipitent les protéines pour obstruer les vaisseaux lésés en formant un bouchon (EZIKE et al ,2010). Par ailleurs, nous avons observé que les plaies traitées avec l’extrait se couvrent de croûte plus rapidement par rapport aux plaies témoins. Or cette croûte contient des facteurs de croissance, comme les PDGF, TGF-beta, GF, TGF-alpha, VEGF et de glycoprotéines adhésives telles que le fibronectine, la thrombospondine, favorisant la formation de tissu de granulation. En plus, elle permet le passage des polynucléaires neutrophiles, des monocytes dans la plaie (STREIT et al., 2000 ; NGUYER, HOANG et al., 2009 ; RIBATTI, 2009). Cela expliquerait la réduction de la phase inflammatoire et l’accélération de la prolifération cellulaire chez les plaies traitées avec l’extrait, suite à l’action nettoyante des macrophages et des polynucléaires, au niveau de la zone lésée (TOMZACK, 2010).

Une étude effectuée sur un extrait de Buchholzia coriaceae (CAPPARIDACEAE) a rapporté qu’il diminue la durée de la phase inflammatoire, grâce aux flavonoïdes et aux tanins (NASSIS et al., 1992 ; EZEJA et al., 2011). D’autres études faites sur un extrait de Teucrium polium (ALAHTAVAKOLI et al., 2010) ont montré que les flavonoïdes diminuent la durée de la phase inflammatoire. En comparant nos résultats avec ceux rapportés dans la littérature, nous émettons une hypothèse que les flavonoïdes ou les tanins dans l’extrait RFJT seraient les responsables de la diminution rapide de l’inflammation.
En plus le nombre de bourgeons chez les traitées avec l’extrait RFJT est supérieure à celui des témoins, et l’extrait accélère aussi l’épithélialisation des plaies. Ceci nous permet d’avancer une hypothèse que l’extrait RFJT stimulerait la prolifération des fibroblastes et des kératinocytes. Cette hypothèse s’appuie sur des études effectuées sur Kaempferia galanga (ZINGIBERACEAE) dont les flavonoïdes favorisent la prolifération des fibroblastes et des kératinocytes (SHANBHAG et al., 2005). Dans son état actuel, il nous est impossible de préciser le principe actif de cette plante, ni son mécanisme d’action. Pour ce faire, des études phytochimiques portant sur l’isolement du principe actif sont nécessaires.

Table des matières

LISTE DES TABLEAUX
LISTE DES SIGLES ET DES ABRÉVIATIONS
I. INTRODUCTION
II. MATERIÉLS ET MÉTHODES
A. PARTIE CHIMIQUE
1. Préparation de l’extrait RFJT
2. Criblage phytochimique
B. PARTIE PHARMACOLOGIQUE
1. Préparation de la crème de base
2. Préparation de la crème contenant 10% de l’extrait RFT
3. Animaux d’expériences
4. Création des plaies
5. Étude de l’effet de l’extrait RFJT sur la cicatrisation
a. Étude de l’effet de l’extrait RFJT sur l’hémostase
b. Étude de l’effet de l’extrait RFJT sur la phase l’inflammatoire
c. Étude de l’effet de l’extrait RFJT sur la phase de bourgeonnement
d. Étude de l’effet de l’extrait RFJT sur la phase d’épithélialisation
e. Étude de l’effet de l’extrait RFJT sur la variation de la surface
C. EXPRESSION ET ANALYSES DES RÉSULTATS
III. RÉSULTATS
A. PARTIE CHIMIQUE
1. Rendement de l’extraction
2. Résultats du criblage phytochimique
B. PARTIE PHARMACOLOGIQUE
a. Effet de l’extrait RFJT sur l’hémostase
b. Effet de l’extrait RFJT sur l’inflammation
c. Effet de l’extrait RFJT sur le bourgeonnement
d. Effet de l’extrait RFJT sur l’épithélialisation
e. Effet de l’extrait RFJT sur la variation de la surface
IV. DISCUSSION
CONCLUSION
BIBLIOGRAPHIE

Télécharger le rapport complet