Étude de l’effet de l’extrait GIR 99 sur la contraction provoquée par l’Acétylcholine

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Animaux d’expérimentation

Des cochons d’Inde des deux sexes, pesant entre 280 et 300 g ont été utilisés. Ils ont été élevés à l’animalerie du LPGPC avec un cycle de lumière et d’obscurité 12/12 h. Ils ont été nourris avec des feuilles fraiches de graminées. Les animaux ont été mis à jeun pendant 18 heures avant les manipulations.

Étude de l’effet de l’extrait GIR 99 sur la diarrhée sécrétoire

Ce test a pour objectif d’étudier l’action de GIR 99 sur la diarrhée sécrétoire. Le sulfate de magnésium a été utilisé pour la provoquer. Administré par voie orale, le sulfate de magnésium entraine l’accumulation de fluide dans la lumière intestinale (SINGH et al., 2013).
Les animaux ont été mis à jeun pendant 18 h avant la manipulation, puis répartis en 4 lots (RAJANI et al., 2014). Un lot a servi de témoin et trois lots ont été traités avec l’extrait à différentes doses. Les animaux du lot témoin ont reçu 10 ml/kg d’eau distillée par voie orale, et les animaux des 3 lots ont respectivement reçu l’extrait aux doses de 100, 200 et 400 mg/kg. Après 45 mn, tous les animaux ont reçu 2 g/kg de sulfate de magnésium dissout dans 2 ml d’eau par voie orale (RAJPUT et al., 2011). Trente minutes après l’administration du MgSO4, les cochons d’inde ont été anesthésiés par inhalation d’éther diéthylique, puis les deux carotides ont été coupées pour les exsanguiner. Ensuite une laparotomie médiane a été effectuée. Puis, deux ligatures ont été effectuées, la première au niveau du pylore et l’autre au niveau du caecum. L’intestin entre ces deux noeuds a été prélevé et son contenu a été recueilli dans un récipient. Ce fluide a été centrifugé et le surnageant a été récupéré, puis son volume a été mesuré à l’aide d’une éprouvette graduée (BAHEKAR et KALE, 2015).

Étude de l’effet de l’extrait GIR 99 sur la motilité intestinale

Pour étudier l’effet de l’extrait GIR 99 sur la motilité intestinale, des tests in vitro ont été effectués sur l’iléon isolé de cochon d’Inde contracté par l’acétylcholine.

Préparation et montage de l’organe

Les animaux ont été mis à jeun pendant 18 h avant la manipulation. Puis, ils ont été anesthésiés par inhalation d’éther diéthylique et exsanguinés en coupant les 2 carotides (SOUSA et al., 2008). Une laparotomie a été effectuée, l’iléon a été repéré à partir du sphincter iléo-caecal et a été coupé en plusieurs segments de 1,5 cm. Ces organes ont été ensuite placés dans une boite de Pétri contenant de solution de Tyrode à la température ambiante et aérée avec de l’air à l’aide d’un aérateur électrique (KOKO-108©) (KITCHEN, 1984 ; MOHAMMED et al., 2009).

Étude de l’effet de l’extrait GIR 99 sur la contraction provoquée par l’Acétylcholine

Après la sensibilisation et la stabilisation de l’organe, l’acétylcholine a été injectée dans le bain pour réaliser des concentrations croissantes allant de 10-9 M jusqu’à l’obtention de la contraction maximale. Au plateau de contraction, l’extrait a été injecté de manière cumulative dans le bain jusqu’au relâchement total de l’organe (SABLASSOU et al., 1998).
La contraction de l’organe provoquée par l’acétylcholine a été enregistrée, puis son amplitude a été mesurée. L’amplitude de la contraction provoquée par l’acétylcholine a été rapportée sur une échelle semi-logarithmique en fonction du logarithme de la concentration de l’acétylcholine ou en fonction de la concentration de l’extrait dans le bain. La valeur de la CE50 de l’extrait a été déterminée graphiquement (SABA et ORIDUPA, 2012)

Étude de mécanisme d’action de l’extrait GIR 99 vis-à-vis de l’Acétylcholine

Pour étudier le mécanisme d’action de l’extrait, des tests in vitro ont été effectués en utilisant l’iléon isolé de cochon d’Inde pré incubé dans un bain contenant l’extrait GIR 99 à la concentration de 0,25 mg/ml dans le bain pendant 10 minutes avant de le contracter avec l’acétylcholine (JAMBAZ et al., 2013). Après cette période d’incubation, l’acétylcholine a été injectée dans le bain de manière cumulative afin de réaliser des concentrations croissantes de 10-9 M jusqu’à la contraction maximale de l’organe. Au plateau de contraction, l’organe a été rincé et laissé se stabiliser pendant 30 minutes. Puis la même expérience a été répétée en pré-incubant l’organe dans un bain contenant l’extrait GIR 99 aux concentrations de 0,5 puis 0,75 mg/ml dans le bain.
La contraction de l’organe provoquée par l’acétylcholine a été enregistrée, puis son amplitude a été mesurée. L’amplitude de la contraction provoquée par l’acétylcholine en absence de l’extrait a été considérée comme 100%, et l’amplitude des contractions provoquées par l’acétylcholine en présence de l’extrait a été exprimé par rapport à l’amplitude de la contraction provoquée par l’acétylcholine en absence de l’extrait. Les amplitudes de la contraction de l’organe provoquée par l’acétylcholine ont été rapportée sur une échelle semi-logarithmique en fonction du logarithme de la concentration de l’acétylcholine dans le bain. La valeur de la CE50 de l’acétylcholine en absence et en présence de l’extrait a été déterminée graphiquement (SABA et ORIDUPA, 2012).

EXPRESSION ET ANALYSES DES RÉSULTATS

Les résultats ont été exprimés sous forme de moyenne ± écarts types réduits ( ̅̅̅̅± ̅). Les moyennes ont été comparées entre elles en utilisant le test ‘t’ de Student, et la différence a été considérée comme significative pour P < 0,05.

Effet de l’extrait sur la diarrhée sécrétoire

L’administration par voie orale du sulfate de magnésium entraine une accumulation de fluide dans la lumière intestinale des cochons d’Inde. L’administration de différentes doses de l’extrait diminue le volume du fluide intestinal recueilli par rapport à celui des animaux du lot témoin. Chez les animaux du lot témoin, le volume du fluide est égal à 4,83 ± 0,17 ml contre 3,56 ± 0,23 ; 2,73 ± 0,20 et 1,66 ± 0,17 ml chez les animaux traités avec l’extrait aux doses de 100,200 et 400 mg/kg (P < 0,05) (Figure1). Ces résultats montrent que l’extrait GIR 99 inhibe la sécrétion intestinale provoquée par le sulfate de magnésium.

Effet de l’extrait GIR 99 sur la motilité intestinale

L’injection d’Acétylcholine dans le bain contracte l’iléon isolé de cochon d’Inde. En augmentant sa concentration dans le bain, l’amplitude de la contraction de l’iléon augmente également. Ce dernier commence à se contracter à partir de 10-9 M, et l’amplitude maximale est obtenue à la concentration de 10-4 M. La détermination graphique de CE50 de l’acétylcholine donne une valeur égale à 2×10-7 M.
L’injection de l’extrait GIR 99 de façon cumulative dans le bain relâche progressivement l’iléon. Cet organe commence à se relâcher en présence de l’extrait à la concentration de 0,25 mg/ml dans le bain, et il se relâche totalement en présence de l’extrait avec la concentration de 0,75 mg/ml dans le bain, avec une CE50 égale à 0,50 mg/ml (Figure 5).

Mécanisme d’action de l’extrait GIR99

L’incubation de l’organe dans un bain contenant l’extrait aux concentrations de 0,25, 0,5 et 0,75 mg/ml diminue l’amplitude maximale de la contraction provoquée par l’Acétylcholine et augmente sa CE50. En absence de l’extrait, l’amplitude maximale provoquée par l’acétylcholine est égale à 100 % et sa CE50 est égale à 2×10-7 M.
En présence de l’extrait aux concentrations de 0,25, 0,5 et 0,75 mg/ml, l’amplitude diminue à 76,36 ± 0,57 ; 43,78 ± 0,64 et 18,9 ± 0,57 % et la CE50 augmente à 3×10-7,10-6 et 5×10-6M (figure 6). Cela montre que l’extrait est un antagoniste non compétitif de l’acétylcholine.

Table des matières

I. INTRODUCTION
II. MATÉRIELS ET MÉTHODES
A. PARTIE CHIMIQUE
1. Préparation de l’extrait
2. Criblage phytochimique
B. PARTIE BIOLOGIQUE
1. Animaux d’expérimentation
2. Étude de l’effet de l’extrait GIR 99 sur la diarrhée provoquée par le sulfate de magnésium
3. Étude de l’effet de l’extrait GIR 99 sur la motilité intestinale
a. Préparation et montage de l’iléon isolé
b. Étude de l’effet de l’extrait GIR 99 sur la contraction provoquée par l’Acétylcholine
c. Étude du mécanisme d’action de l’extrait GIR 99 vis-à-vis de l’Acétylcholine
C EXPRESSION ET ANALYSES DES RÉSULTATS
III. RÉSULTATS
A. PARTIE CHIMIQUE
1. Rendement de l’extraction
2. Résultats du criblage phytochimique
B. PARTIE BIOLOGIQUE
1. Effet de l’extrait sur la diarrhée provoquée par le sulfate de magnésium
2. Effet de l’extrait GIR 99 sur la motilité intestinale
3. Mécanisme d’action de l’extrait GIR99
IV. DISCUSSION
V. CONCLUSION
VI. BIBLIOGRAPHIE

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