Etude de l’activité mucoprotectrice de LIS-014

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Criblage phytochimique (IBEH B. O. et coll., 2013)

Pour déterminer les différentes familles chimiques présentes dans l’extrait LIS-014 et d’évaluer leur abondance relative, un criblage phytochimique a été effectué selon les méthodes décrites par FONG H. H. S. et ses collaborateurs (1977). Ce test est basé sur l’utilisation des réactifs spécifiques qui réagissent avec les familles chimiques correspondantes en formant un complexe soluble coloré (réaction de coloration) ou un complexe insoluble (réaction de précipitation) (Tableau I).
Les signes suivants ont été utilisés afin de quantifier la teneur relative des différentes familles présentes dans l’extrait LIS-014 :
± : présence en faible teneur
+: présence en faible teneur
++ : présence en teneur moyenne
+++ : présence en forte teneur

PARTIE PHARMACOLOGIQUE

Pour étudier l’activité l’extrait LIS-014 sur l’ulcère provoqué par l’indométacine (DJAHANGUIRI B., 1969), et son activité sur la sécrétion d’acide provoquée par la ligature du pylore (SHAY H. et coll., 1945) et enfin son effet sur l’acidité, l’étude a été effectuée in vivo chez le rat.

Animaux d’expérimentation

Des rats de souche WISTAR des deux sexes, âgés de 3 mois, pesant entre 150 g et 200 g ont été utilisés. Ces animaux ont été élevés à l’animalerie du LPGPC. Ils ont été soumis à un cycle de lumière et d’obscurité de 12h/12h, et à la température moyenne de 20 °C. Ils ont été nourris avec de la provende LFL 1420 et ont eu un accès libre à l’eau. Ces animaux ont été mis à jeun pendant 24 heures avant chaque expérience mais ont eu un accès libre à l’eau (SATOH H. et coll., 1983).

Etude de l’activité mucoprotectrice de LIS-014

L’activité de l’extrait LIS-014 a été étudiée sur sa capacité à protéger la muqueuse gastrique contre l’agression de l’indométacine chez le rat (DJAHANGUIRI B., 1969).
Les rats ont été mis à jeun pendant 24 heures avant l’expérience mais ont eu accès libre à l’eau. Les animaux ont été répartis en trois lots : un lot témoin et deux lots traités avec LIS-014 à différentes doses. Le lot témoin a reçu 10 ml/kg d’eau distillée, tandis que les 2 autres lots ont reçu l’extrait aux doses de 300 et 600 mg/kg respectivement par voie orale (KUMAR K. et coll., 2013) dans un volume de 10 ml/kg (DIELH-HEINZ K., 2010).
Une heure après l’administration de l’extrait et de l’eau distillée, tous les animaux ont reçu 30 mg/kg d’indométacine par voie orale (SATOH H. et coll., 1983). La même manipulation a été effectuée tous les matins, à la même heure, pendant 5 jours. Au 6ème jour, les rats ont été sacrifiés, puis une laparotomie a été effectuée et leur estomac a été prélevé, ensuite ouvert suivant sa grande courbure. En outre, il a été rincé avec de l’eau et étalé sur une surface plane. La surface des lésions ulcéreuses au niveau de sa paroi a été mesurée par planimétrie directe. Un papier millimétré transparent a été placé sur l’estomac étalé, puis le contour de chaque lésion a été tracé à l’aide d’un crayon fin sur le papier millimétré transparent (RANDRIANAVONY P. et coll., 2015).

Etude de l’activité antisécrétoire de LIS-014

La ligature de Shay a été effectuée pour étudier la propriété antisécrétoire de l’extrait LIS-014 (SHAY H. et coll., 1945). Des rats de souche WISTAR, âgés de 3mois, pesant entre 150 et 200 g ont été utilisés. Ils ont été mis à jeun pendant 24 heures avant l’expérience (SATOH H. et coll., 1983), puis répartis en 3 lots : un lot témoin et 2 lots traités avec LIS-014 à différentes doses (OFEM O. E. et coll., 2012). Les animaux du lot témoin ont reçu 10 ml/kg d’eau distillée (MANJUSHA K. et coll., 2013), tandis que les animaux des 2 autres lots ont reçu l’extrait aux doses de 300 et 600 mg/kg respectivement (KUMAR K. et coll., 2013) dans un volume de 10 ml/kg (DIELH-HEINZ., 2010).
Deux heures après l’administration de ces produits, les animaux ont été anesthésiés par inhalation d’éther diéthylique (KUMAR K. et coll., 2013), puis la partie supérieure de l’abdomen entre les dernières côtes a été incisée sur une longueur de 1 cm (OFEM O. E. et coll., 2012). Ensuite, le pylore a été ligaturé. Après la ligature du pylore, la paroi abdominale a été fermée par des points de suture, puis les animaux ont été laissés pour se rétablir dans des cages individuelles. Pendant la période post-opératoire, les animaux ont été privés de nourriture et d’eau (KUMAR K. et coll., 2013).
Quatre heures après la ligature du pylore, les animaux ont été sacrifiés. Une laparotomie a été effectuée. Ensuite, leur estomac a été prélevé. Le contenu gastrique a été récupéré et versé dans un tube à essai puis centrifugé à 3000 tours par minute pendant 10 minutes (Figure 1), ensuite le pH du surnageant a été mesuré à l’aide d’un pH-mètre (Figure 2) (PIERRON®) (RANDRIANAVONY P. et coll., 2015).

Etude de l’activité antiacide de LIS-014

L’activité antiacide de LIS-014 a été étudiée par la réaction de neutralisation entre le contenu gastrique et l’extrait. Après la ligature du pylore, 4 tubes à essai ont été utilisés : le contenu gastrique du lot témoin a été versé dans le 1er tube ; l’extrait à la concentration de 600 mg/ml a été versé dans le 2ème tube ; le mélange du contenu gastrique du lot témoin et l’extrait à la concentration de 600 mg/ml a été versé dans le 3ème tube, et enfin, le contenu gastrique du lot traité avec l’extrait à la dose de 600 mg/kg a été versé dans le 4ème tube à essai. Le pH du contenu de chaque tube a été mesuré à l’aide d’un pH-mètre.

PARTIE PHARMACOLOGIQUE

Activité mucoprotectrice de LIS-014

La capacité de l’extrait LIS-014 à protéger la muqueuse gastrique contre l’agression de l’indométacine a été étudiée en mesurant la surface des lésions provoquées par celle-ci, en administrant pendant 5 jours consécutifs par voie orale. Les résultats de ce test montrent que la surface des lésions au niveau des animaux traités avec l’extrait LIS-014 est inférieure à celle observée chez les animaux du lot témoin (figure 3).
La surface des lésions provoquées par l’indométacine diminue en fonction de la dose de l’extrait administré par voie orale. Chez les animaux témoins, la surface des lésions est égale à 6,2 ± 0,5 mm² contre 2,4 ± 0,41 mm² et 1,19 ± 0,07 mm² chez les animaux traités avec l’extrait aux doses de 300 et 600 mg/kg (P < 0,05) (figure 4).

DISCUSSION

D’après les enquêtes ethnopharmacologiques que nous avions effectuées, la plante à partir de laquelle l’extrait LIS-014 a été préparé, soulage les douleurs épigastriques. Nous avons émis une hypothèse que cette plante pourrait avoir une propriété antiulcéreuse. Les résultats obtenus montrent que la surface des lésions provoquées par l’administration répétée de l’indométacine chez les animaux témoins, et l’acidité du contenu gastrique des animaux traités avec l’extrait est également inférieure à celle des animaux témoins après la ligature du pylore.
L’indométacine a été utilisée pour étudier l’activité mucoprotectrice de l’extrait, car son administration répétée provoque des lésions ulcéreuses au niveau de la muqueuse gastrique. Or, l’indométacine est un anti-inflammatoire non stéroïdien, elle inhibe l’enzyme cyclooxygénase responsable de la synthèse des prostaglandines. Ces dernières maintiennent le flux sanguin dans la muqueuse et stimulent la production de mucus et de bicarbonate, responsables de la protection de la muqueuse. L’inhibition de la synthèse des prostaglandines laisse la muqueuse sans défense, et permet à l’acide gastrique d’attaquer la paroi gastrique et de générer des lésions (INAS Z. A. et coll., 2011). Les résultats que nous avions obtenus montrent que l’administration de l’extrait LIS-014 diminue la surface de ces lésions par rapport aux animaux du lot témoin. Cette diminution de la surface des lésions ulcéreuses en fonction de la dose administrée montre que l’extrait contribue à la protection de la paroi gastroduodénale. Cette activité pourrait être due à un effet topique de l’extrait, ou à son effet antiacide ou antisécrétoire, et enfin, elle pourrait être due à l’augmentation de la production du mucus et/ou du bicarbonate (D’SOUZA R. S. D. et DHUME V. G., 1991). En augmentant le taux de prostaglandines, les flavonoïdes augmentent la sécrétion de mucus, premier responsable de l’activité mucoprotectrice de l’extrait comme celui rapporté par CHOUDHARY M. et ces collaborateurs (2014) sur l’extrait de Plumeria alba où les flavonoïdes diminuent la surface des lésions observées sur la paroi gastrique des animaux ayant reçu l’indométacine et traités avec l’extrait. Les anthocyanes pourraient aussi participer à la protection de la muqueuse car ils augmentent la quantité de mucus en stimulant la biosynthèse des mucopolysaccharides, un composant du mucus comme celle observée avec l’extrait de Vaccinium myrtillus (MAGISTRETTI M. J. et coll., 1988). Comme l’extrait LIS-014 contient toutes ces familles chimiques, nous pouvons émettre une hypothèse que LIS-014 à un effet mucoprotecteur.
Une des causes de l’ulcère est l’augmentation et l’accumulation de l’acide dans l’estomac (GARG S. et coll., 2014), ce qui nous a incités à étudier l’activité antisécrétoire de l’extrait LIS-014. Cette activité a été étudiée en ligaturant le pylore des animaux. Cette ligature est un puissant stimulant de la sécrétion acide, elle stimule mécaniquement le nerf pneumogastrique et libère ainsi l’acétylcholine. A son tour, ce neuromédiateur se fixe sur le récepteur cholinergique et stimule la sécrétion acide. En plus, la ligature du pylore provoque l’accumulation d’acide dans l’estomac et favorise ainsi la formation des lésions au niveau de la paroi gastrique (SHAY H. et coll., 1945). Nos résultats montrent que l’extrait diminue l’acidité du contenu gastrique des animaux après la ligature du pylore. Ceci pourrait être dû à son effet antisécrétoire ou à son effet antiacide. Pour vérifier cette hypothèse, nous avons mélangé le contenu gastrique des animaux témoins avec l’extrait et comparé son pH avec le contenu gastrique des animaux traités avec l’extrait, et nous n’avons pas trouvé de différence entre les valeurs de leur pH. D’autre part, le pH de l’extrait est un peu élevé, ce qui expliquerait l’augmentation du pH du contenu gastrique des animaux. Cet effet antiacide pourrait être dû aux alcaloïdes qui sont présents en forte teneur dans l’extrait, car ils sont capables de neutraliser l’acidité gastrique (N’GUESSAN K., 2009). Cette baisse de l’acidité pourrait aussi s’expliquer par la baisse de la sécrétion acide due à la présence des tanins dans l’extrait. Les tanins par leur propriété astringente sont capables de serrer les pores et diminuent ainsi la sécrétion acide ou de précipiter les protéines de la muqueuse la rendant résistant aux agents irritants comme dans l’extrait Vitex doniana (STEVEN O. O. et coll., 2016). Par ailleurs, les flavonoïdes augmentent le taux de prostaglandines. Or, elles sont responsables de la sécrétion de bicarbonate (GARG S. et coll., 2014). Cet ion neutralise l’acide sécrété lors de la ligature de pylore comme avec l’extrait de Tephrosia calophylla (SANDHYA S. et coll., 2015).
Vu la multitude de familles chimiques dans l’extrait, nous ne pouvons pas dire son mécanisme d’action exact. Il se peut que les différentes molécules agissent en synergie. Des études sur des molécules isolées donneront plus de précision sur son mécanisme d’action.

CONCLUSION

Les résultats de nos tests montrent que LIS-014 protège la paroi gastrique et diminue l’acidité au niveau de l’estomac. Ceci nous permet de dire qu’il possède une activité mucoprotectrice et antisécrétoire et/ou antiacide. Il possède une activité antiulcéreuse. Cette activité pourrait être due à la présence des flavonoïdes, des anthocyanes, des tanins ou des alcaloïdes.
Afin de préciser le ou (les) principe(s) actif(s) et le(s) mécanisme(s) d’action de cet extrait, il faudrait isoler les molécules actives et effectuer des études avec des molécules isolées.

Table des matières

LISTE DES FIGURES
SIGLES ET ABREAVIATION
I. INTRODUCTION
II. MATERIELS ET METHODES
A. PARTIE CHIMIQUE
1. Extraction
2. Criblage phytochimique
B. PARTIE PHARMACOLOGIQUE
1. Animaux d’expérimentation
2. Etude de l’activité mucoprotectrice de LIS-014
3. Etude de l’activité antisécrétoire de LIS-014
4. Etude de l’activité antiacide de LIS-014
C. EXPRESSION ET ANALYSES DES RESULTATS
III. RESULTATS
A. PARTIE CHIMIQUE
1. Rendement de l’extraction
2. Résultats du criblage phytochimique
B. PARTIE PHARMACOLOGIQUE
1. Activité mucoprotectrice de LIS-014
2. Activité antisécrétoire de LIS-014
3. Effet antiacide de LIS-014
IV. DISCUSSION
V. CONCLUSION
VI. REFERENCES

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