Étude de l’activité de l’extrait RSNUF-18 sur la motilité intestinale

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PARTIE PHARMACOLOGIQUE

L’activité de l’extrait RSNUF-18 a été étudiée sur une diarrhée expérimentale provoquée par le sulfate de magnésium, administré par voie orale chez le cochon d’Inde (SIREERATAWONG et al., 2012), tandis que son effet sur la motilité intestinale a été étudié in vitro sur l’iléon isolé de cochon d’Inde, en utilisant l’acétylcholine comme agent contracturant.

Animaux d’expérimentation

Des cochons d’Inde mâles et femelles pesant entre 300 et 350 g ont été utilisés. Ils ont été élevés dans l’animalerie du Laboratoire de Pharmacologie Générale, de Pharmacocinétique et de Cosmétologie (LPGPC) sous un cycle de lumière et d’obscurité 12/12 heures à la température ambiante. Ces animaux ont été nourris avec des feuilles fraiches de graminées et ont été mis à jeun pendant 18 heures avant toutes les manipulations.

Étude de l’action de RSNUF-18 sur la diarrhée provoquée par le sulfate de magnésium

Le but de ce test est d’étudier l’activité de l’extrait RSNUF-18 sur la diarrhée sécrétoire provoquée par le MgSO4 (LIU et al., 2014).
Des cochons d’Inde mis à jeun pendant 18 heures ont été utilisés dans ce test. Ils ont été divisés en quatre lots : un lot témoin et trois lots traités avec l’extrait. Les animaux du lot témoin ont reçu 10 ml/kg d’eau distillée par voie orale, et les animaux des trois lots traités ont reçu par voie orale l’extrait, aux doses de 100, 200 et 400 mg/kg, dans 10 ml/kg d’eau distillée (TADESSE et al 2011). Puis 45 minutes après l’administration de l’eau distillée et de l’extrait, 2 g/kg de MgSO4 dissouts dans 10 ml/kg d’eau distillée ont été administrés par voie orale, chez tous les animaux (MIGUEL et al., 2002). Puis après 30 minutes, les animaux ont été anesthésiés par inhalation d’éther diéthylique, et une laparotomie a été effectuée. L’intestin grêle a été repéré, puis une ligature a été effectuée au niveau du pylore et de la jonction iléo coecale. Ensuite, l’intestin grêle a été prélevé et le fluide contenu dans cette portion a été recueilli, puis centrifugé à 3000 tours par minute, pendant 10 minutes. Le surnageant a ensuite été récupéré, puis son volume a été mesuré (YADAV, 2015).

Étude de l’activité de l’extrait RSNUF-18 sur la motilité intestinale.

Des cochons d’Inde de deux sexes ont été utilisés. Ils ont été mis à jeun pendant 18 heures avant l’expérience. Ces animaux ont été anesthésiés par inhalation d’éther diéthylique, puis exsanguinés en coupant les deux carotides. Ensuite, une laparotomie a été effectuée et l’iléon a été prélevé. Cet organe a tout de suite été plongé dans une boîte de Pétri contenant une solution de Tyrode (Tableau II), aérée avec de l’air à l’aide d’un aérateur électrique (KOKO-108), à la température ambiante (GANDHIMATHI et al., 2009).
Ensuite, les mésentères ont été enlevés, puis l’iléon a été coupé en morceaux de 1,5 cm de long. Un morceau de l’iléon a été monté dans une cuve à organe isolé contenant 20 ml de solution de Tyrode, maintenue à la température de 37° C, et aérée de l’air (GONG et al., 2017). Une des extrémités de l’iléon a été fixée au fond de la cuve à l’aide d’un fil inextensible, et l’autre a été reliée à un capteur isométrique (Statham Gould©) sous une tension de 1,5 g (GUTIERREZ et al., 2013).
La préparation a ensuite été laissée se stabiliser pendant 45 min. Pendant cette période, la préparation a été rincée toutes les 15 min. après cette stabilisation, de l’acétylcholine a été injectée dans le bain à la concentration finale de 10-5 M pour tester la viabilité de l’iléon et pour le sensibiliser (SARALAYA et al., 2010). Puis, l’organe a été rincé et laissé se stabiliser de nouveau pendant 30 min. Pendant cette période, il a été rincé toutes les 15 minutes. Après cette période, l’acétylcholine a été injectée dans le bain, d’une manière cumulative à partir de 10-9 M, jusqu’à l’obtention de la contraction maximale. Au plateau de la contraction, l’extrait RSNUF-18 a été injecté dans le bain d’une manière cumulative, jusqu’au relâchement total de l’organe (BOYINA et al., 2014).

Étude du mécanisme d’action de l’extrait RSNUF-18

Une portion d’iléon isolé de cochon d’Inde débarrassé de ses mésentères a été montée dans une cuve à organe isolé contenant une solution de Tyrode maintenue à la température de 37° C et aérée avec de l’air. La préparation a été laissée se stabiliser pendant 45 minutes. Pendant cette période la solution de survie a été renouvelée toutes les 15 minutes. Puis, l’acétylcholine a été injectée dans le bain à la concentration finale dans le bain de 10-5 M pour s’assurer de la viabilité de l’organe et pour le sensibiliser (OH et al., 2011). Ensuite, l’organe a été rincé et laissé se stabiliser de nouveau pendant 30 min pendant lesquelles, il a été rincé toutes les 15 minutes. Après cette période, l’acétylcholine a été injectée dans le bain d’une façon cumulative à partir de 10-9 M, jusqu’à l’obtention de la contraction maximale. Puis l’organe a été rincé de nouveau. Après, il a été incubé dans un bain contenant l’extrait RSNUF-18 à la concentration de 0,25 mg/ml pendant 10 minutes. Puis de l’acétylcholine a été injecté dans le bain d’une manière cumulative jusqu’à l’obtention de la contraction maximale. Ensuite il a été rincé et laissé se stabiliser de nouveau pendant 45 minutes. Pendant cette période, il a été rincé 3 fois.
La même manipulation a été refaite en pré incubant l’organe dans un bain contenant RSNUF-18 aux concentrations de 0,5 puis 0,75 mg/ml. L’amplitude des contractions provoquées par l’acétylcholine en absence et en présence de l’extrait RSNUF-18 a été mesurée puis transformée en pourcentage par rapport à la contraction maximale provoquée par l’acétylcholine seule. Ces amplitudes ont ensuite été rapportées sur une échelle semi logarithmique en fonction de la concentration en acétylcholine dans le bain, puis la CE50 de l’acétylcholine a été déterminée graphiquement à partir de cette courbe (MOTGHARE et al., 2017).

PARTIE PHARMACOLOGIE

Effet de l’extrait RSNUF18 sur la diarrhée provoquée par MgSO4

L’administration de sulfate de magnésium (MgSO4), par voie orale, chez les cochons d’Inde provoque une accumulation de fluide dans la lumière intestinale. Cependant, le volume de fluide dans la lumière intestinale des animaux traités avec l’extrait est inférieur à celui des animaux du lot témoin. Ce volume diminue en augmentant la dose de l’extrait administrée. Le volume du fluide intestinal des animaux du lot témoin est égal à 4,83 ± 0,17 ml contre 3,23 ± 0,09, 2,3 ± 0,11 et 1,26 ± 0,12 ml chez les animaux traités avec l’extrait aux doses de 100, 200 et 400 mg /kg (P<0,05) (figure 1). Cela montre que l’extrait RSNUF18 possède une activité anti sécrétoire.
Figure 1. Variation du volume du fluide intestinal provoqué par 2 ml de MgSO4 administré par voie orale chez les cochons d’Inde témoins et traités avec l’extrait, administré par voie orale, aux doses de ( ) 100, ( ) 200, ( ) 400 mg/ml ( ± ; n=3, P<0,05).

Effet de l’extrait sur la motilité intestinale

L’injection d’acétylcholine dans le bain contracte l’iléon. L’amplitude de cette contraction augmente avec sa concentration dans le bain. A des concentrations croissantes, allant de 10-9 à 10-3 M, l’amplitude passe de 20,84 à 100 %. La détermination graphique de la CE50 de l’acétylcholine donne une valeur de 2 .10-6 M. En injectant l’extrait dans le bain, l’iléon isolé se relâche en présence d’une concentration croissante de l’extrait dans le bain. La CE50 de l’extrait est égale à 0,5 mg/ml. D’après ces résultats, l’extrait RSNUF18, relâche l’iléon contracté avec l’acétylcholine, et diminue la motilité intestinale.
Figure 2. Variation de la contraction de l’iléon isolé de cochon d’Inde provoqué par l’acétylcholine en présence de l’extrait injecté dans le bain de façon cumulative ( ± ; n = 3, P < 0,05).

Mécanisme d’action de l’extrait RSNUF-18

En pré incubant l’iléon isolé de cochon d’inde dans le bain contenant de l’extrait RSNUF-18, l’effet de l’acétylcholine diminue, l’amplitude de la contraction maximale diminue et sa CE50 augmente. L’amplitude maximale de 100 % en absence de l’extrait passe à 83,39 ± 3,5, 45,94 ± 1,54 et 25,5 ± 0,77 % en présence de RSNUF-18 aux concentrations de 0,25, 0,5 et 0,75mg/ml dans le bain (P<0,05). En plus, la CE50 de l’acétylcholine passe de 2 × 10-6 M , en absence de l’extrait, à 3×10-6 M 4×10-5 et 6×10-5 M en présence de l’extrait aux concentrations de 0,25, 0,5 et 0,75mg/ml dans le bain (P < 0,05) (figure 3). Ces résultats montrent que l’extrait inhibe l’action de l’acétylcholine d’une façon non compétitive.

DISCUSSION

Notre objectif a été d’étudier l’effet de l’extrait RSNUF-18 sur la diarrhée. Nos résultats montrent que cet extrait diminue la sécrétion et la motilité intestinales.
Le MgSO4 est une substance, non absorbable par les entérocytes. Son administration par voie orale attire l’eau dans la lumière intestinale et entraîne une accumulation de fluide dans cette lumière intestinale, provoquant ainsi une diarrhée osmotique (SADRAEI et al., 2018). Or, l’extrait RSNUF-18 diminue le volume du fluide dans la lumière intestinale provoquée par le sulfate de magnésium. Cela pourrait être dû à la diminution de la sécrétion d’eau et d’électrolytes vers la lumière intestinale. Il se peut que cela soit dû à la fermeture des aquaporines au niveau des entérocytes (RAO et al., 2012) provoquée par les tanins présents dans l’extrait. Ces molécules dénaturent les protéines, en formant un complexe tannates protéiques, et ferment les canaux au niveau de la membrane cellulaire. Ce complexe recouvre aussi la muqueuse intestinale, la rendant plus résistante ce qui diminue la sécrétion vers la lumière intestinale (EMUDAINOHWO et al., 2015). Les flavonoïdes diminuent la aussi la sécrétion intestinale en inhibant le cyclo-oxygenase, l’enzyme qui transforme l’acide arachidonique en prostaglandine, un médiateur inflammatoire qui provoque une diarrhée sécrétrice. C’est le cas des flavonoïdes de Justicia hypocrateriformis (GHAYUR et al., 2007). Comme l’extrait RSNUF-18 contient des flavonoïdes, il est fort possible que des molécules de cette famille pourraient inhiber la sécrétion d’eau expliquant son action sur la diarrhée provoquée par le MgSO4.
Les résultats obtenus lors des tests in vitro montrent que l’extrait relâche l’iléon contracté par l’acétylcholine. Ce relâchement diminue la motilité intestinale, et augmente le temps de contact entre le contenu intestinal et les entérocytes, ce qui donne le temps aux éléctrolytes et l’eau de se réabsorber (DIAZ et al., 2014). Mais puisque l’extrait diminue l’effet maximal de l’acétylcholine et augmente la valeur de sa CE50, nous avançons une hypothèse qu’une molécule présente dans RSNUF-18 diminue la contraction en se fixant à un récepteur différent des récepteurs cholinergiques comme les récepteurs adrénergiques de type α2 existant dans le muscle lisse intestinal. La stimulation de ce récepteur provoque le relâchement de l’iléon isolé. Il se pourrait que les flavonoïdes soient les responsables de cette activité en se fixant sur ces récepteurs (DEGU et al., 2016). Par ailleurs, la dénaturation des récepteurs cholinergiques par les tanins pourrait aussi expliquer le fait que l’acétylcholine ne pourrait plus se fixer sur ses récepteurs, diminuant ainsi son action contracturant.
L’activité anti-diarrhéique de l’extrait RSNUF-18 pourrait donc être due à la présence des tanins et/ou des flavonoïdes. Le mécanisme d’action de l’extrait pourrait être associé à deux effets : l’un sur la sécrétion d’eau et des électrolytes et l’autre sur la motilité intestinale. Pour préciser son mécanisme d’action, l’isolement du ou des principes actifs de cet extrait est indispensable.

Table des matières

LISTE DES SIGLES ET DES ABRÉVIATIONS
I. INTRODUCTION
II. MATÉRIELS ET MÉTHODES
A-PARTIE CHIMIQUE
1-)Extraction
2-)Criblage phytochimique
B-) PARTIE PHARMACOLOGIQUE
1-) Animaux d’expérimentation
2-) Étude de l’activité anti-sécrétoire de l’extrait RSNUF-18
3-) Étude de l’activité de l’extrait RSNUF-18 sur la motilité intestinale
4-) Étude du mécanisme d’action de l’extrait RSNUF-18
C-) EXPRESSION ET ANALYSE DES RÉSULTATS
III-) RÉSULTATS
A-) PARTIE CHIMIQUE
1-)Rendement de l’extraction
2-) Résultats du criblage phytochimique
B-) PARTIE PHARMACOLOGIQUE
1-) Effet de l’extrait RSNUF18 sur la diarrhée provoquée par MgSO4
2-) Effet de l’extrait RSNUF-18 sur la motilité intestinale
3-) Mécanisme d’action de l’extrait RSNUF-18
DISCUSSION
CONLUSION
BIBLIOGRAPHIE

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