Etude de l’activité de l’extrait RAH25 sur la contraction provoquée par l’acétylcholine

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PARTIE PHARMACOLOGIQUE

Un anti-diarrhéique diminue l’émission de selles liquides ou molles trop fréquente en diminuant la motilité intestinale, ou l’hypersécrétion intestinale (CARRE D. et coll., 2001). Pour étudier l’activité anti diarrhéique de RAH25, ses effets sur la sécrétion ainsi que sur la motilité intestinale ont été étudiés.

Étude de l’effet de l’extrait RAH25 sur la sécrétion intestinale

Pour étudier l’effet de l’extrait sur la sécrétion intestinale, le MgSO4, un agent osmotiquement actif a été utilisé pour provoquer l’accumulation d’eau dans la lumière intestinale chez les cobayes (DOHERTY N.S., 1981).
Des cobayes mâles et femelles pesant de 250 g à 300 g ont été utilisés. Ils ont été élevés à l’animalerie du Laboratoire de ¨Pharmacologie Générale de Pharmacocinétique et de Cosmétologie à la Faculté des Sciences, Université d’Antananarivo. Ils ont été nourris avec des feuilles de graminée fraîches et ont eu de l’eau à volonté. Ils ont été mis à jeun 18 h avant le test, mais ont eu un accès libre à l’eau. Ils ont ensuite été répartis en 3 lots, un lot témoin, et 2 lots traités avec l’extrait. Les animaux du lot témoin ont reçu de l’eau distillée, tandis que ceux des 2 autres lots ont reçu de l’extrait aux doses respectives de 200 mg/kg et 400 mg/kg. Ces produits ont été administrés par voie orale dans un volume de 10 ml/kg (ZAVALA M.A.et coll., 1998).
Trente minutes après l’administration de l’extrait, les animaux de chaque lot ont été reçu 2 g /kg de solution de sulfate de magnésium dissout dans de l’eau distillée 50 ml/kg par voie orale pour provoquer la diarrhée sécrétoire (LAKSHMINARAYANA M. et coll., 2011).
Après 30 min, l’animal a été euthanasié et une laparotomie a ensuite été pratiquée et deux ligatures ont été effectuées : l’une au niveau du pylore et l’autre au niveau de la jonction iléo-caecale. La portion entre ces deux ligatures a été prélevée et le liquide intestinal dans cette portion a été recueilli dans des récipients gradués pour mesurer son volume (GALVEZ J. ,1993).
L’effet anti-sécrétoire de l’extrait a été exprimé en pourcentage et calculé selon la formule :
E= Vt−VT Vt
E : effet de l’extrait sur l’accumulation de liquide intestinal.
Vt : volume de liquide intestinal du lot témoin.
VT : volume du liquide intestinal du lot traité.

Étude de l’effet de l’extrait RAH25 sur la motilité intestinale

L’émission de selles fréquentes et liquides lors de la diarrhée est entre autre due à l’accélération du transit intestinale provoquée par l’Acétylcholine (RAJAMANICKA M. et coll., 2010). L’effet de l’activité de RAH25 sur la motilité a été étudié sur l’activité de l’extrait RAH25 sur la contraction de l’iléon provoquée par l’Acétylcholine.
Des cobayes des deux sexes pesant entre 250 g et 300 g ont été utilisés. Ces animaux ont été élevés à l’animalerie du Laboratoire de Pharmacologie Générale de Pharmacocinétique et de Cosmétologie de la Faculté des Sciences, Université d’Antananarivo. Ils ont été nourris avec des feuilles de graminée fraîches et ont eu de l’eau à volonté. Ils ont été mis à jeun 18 h avant le test, mais avec libre accès à l’eau. Ils ont ensuite été sacrifiés puis exsanguinés en coupant les deux carotides. Après une laparotomie, une portion de 6 cm de duodénum proche du pylore a été prélevée. Cet organe a été placé dans une solution de Tyrode aéré avec un aérateur, maintenue à la température de 37°C et dont la composition est la suivante (mM): KCl: 2,7; NaCl: 136,9 ;MgCl2: 1,1; NaHCO3: 11; NaH2PO4:0,4; glucose: 85,6; et CaCl2: 1,8; eau distillée: 1 litre KAGBO H.D. et EYARU S.G., 2012 ; UKWUANI A.N. et coll., 2012 ; PRASHANT B. et coll., 2013). Les mésentères ont été ensuite enlevés.
L’iléon a été coupé en petits morceaux de 2 cm, cette portion a ensuite été montée dans une cuve à organe isolé de 20 ml contenant une solution de Tyrode maintenue à la température de 37°C et aérée à l’aide d’un aérateur.
A l’aide d’un fil en coton inextensible, une des deux extrémités a été fixée au fond de la cuve et l’autre reliée au stylet enregistreur avec un contrepoids de 1 g.
La préparation a été laissée se stabiliser pendant 45 minutes en la rinçant toutes les 15 minutes. Puis l’organe a été sensibilisé avec de l’acétylcholine à la concentration de − M dans le bain, puis la préparation a été rincée trois fois pendant la période d’équilibration de 45 minutes.
Après cette période, l’acétylcholine a été injectée dans le bain d’une manière cumulative afin de réaliser des concentrations croissantes à partir de 10-8 M jusqu’à l’obtention d’un plateau de contraction considérée comme l’effet maximal de l’acétylcholine. Les contractions de l’organe ont été enregistrées à l’aide d’un kymographe tournant à la vitesse de 5 mm/s.
Au plateau de la contraction, l’extrait RAH25 a été injecté dans le bain d’une manière cumulative de manière à obtenir des concentrations croissantes dans le bain, jusqu’au relâchement total de l’organe contracté par l’acétylcholine.
Calcul de pourcentage de relâchement R=Emax−Eex100 Emax
Avec R : relâchement en pourcentage
Emax : effet maximal de l’acétylcholine
Ee : effet de l’extrait RAH25

Etude de l’activité de l’extrait RAH25 sur la contraction provoquée par l’acétylcholine

L’iléon isolé de cobaye a été contracté avec de l’acétylcholine injectée dans le bain d’une manière cumulative à partir de la concentration de 10-8 M jusqu’à l’obtention de la contraction maximale. L’amplitude des contractions a été mesurée et reportée sur une échelle semi logarithmique en fonction de la concentration de l’acétylcholine dans le bain, et la CE 50 a été déterminée graphiquement.
Après l’obtention de la contraction maximale, la préparation a été rincée et laissée se stabiliser pendant 45 minutes. Pendant cette période, la préparation a été rincée toutes les 15 minutes. Ensuite, l’organe a été pré-incubé 10 minutes dans un bain contenant de l’extrait RAH25 à la concentration de 0,125 mg / ml avant de le contracter de nouveau avec l’acétylcholine.
Au plateau de la contraction, l’organe a été de nouveau rincé, puis laissée se stabiliser pendant 45 minutes et rincé toutes les 15 minutes. Et après la période de stabilisation, l’organe a été pré incubé dans un bain contenant 0,25 mg/ml de l’extrait avant de le contracter avec l’acétylcholine. Après 10 minutes d’incubation, l’acétylcholine a été injectée de nouveau dans le bain d’une manière cumulative à partir de − M jusqu’à l’obtention de la contraction maximale.

PARTIE PHARMACOLOGIQUE

Activité de l’extrait RAH25 sur la sécrétion intestinale

L’administration du sulfate de magnésium chez les cobayes provoque une accumulation de liquide intestinal. L’accumulation de liquide intestinal chez les animaux traités avec l’extrait RAH25 administré par voie orale diminue par rapport à celle des animaux du lot témoin. Le volume du liquide intestinal des animaux du lot témoin est de 3,23 ± 0,06 ml contre 2,4 ± 0,07 ml, et 1,7 ± 0,15 ml respectivement chez les animaux traités avec 200 mg/kg et 400 mg/kg (p<0,05) (figure1)..

Effet de l’extrait RAH25 sur la motilité intestinale

Les concentrations croissantes de l’acétylcholine allant de 10-8 M à 10-4 M dans le bainprovoquent des contractions croissantes de l’iléon. L’administration de l’extrait RAH25 dans le bain au plateau de la contraction d’une manière cumulative relâche complètement l’iléon contracté par l’acétylcholine (figure 2).

DISCUSSION

La diarrhée est une maladie caractérisée par une accélération du transit intestinal et une augmentation de la sécrétion d’eau dans la lumière intestinale (BELAICHE J., 2000; PLUCHE A.F., 2009). Un anti-diarrhéique est un produit qui ralentit le transit intestinal et inhibe la sécrétion d’eau dans la lumière intestinale (CARRE D. et coll., 2001; CESARD J. P. et coll., 2002).
Les résultats obtenus des tests in vivo montrent que l’extrait diminue l’accumulation de fluide intestinal provoquée par le MgSO4. D’autre part, les tests in vitro montrent qu’il inhibe la contraction de l’iléon provoquée par l’acétylcholine.
En effet, l’administration du MgSO4 par voie orale provoque une accumulation du fluide dans la lumière intestinale à cause de sa propriété osmotique (AHMADU A.A. et coll., 2007), il instaure ainsi une diarrhée osmotique. La diminution du volume du fluide intestinale provoquée par l’extrait correspond à une diminution de la sortie d’eau vers la lumière intestinale en fermant l’aquaporine au niveau de la muqueuse intestinale (KENT A. J. et BANKS M. R., 2010).
Les flavonoïdes modifieraient la perméabilité de la muqueuse intestinale (MAHA Y.A. et coll., 2013) et les tannins, par leur propriété astringente rendent la paroi intestinale moins perméable au passage de l’eau vers la lumière intestinale (MOHAMMED A., AHMED H. et coll., 2009). Ce qui nous permet de dire que l’extrait RAH25 aurait une activité anti-sécrétoire.
Tandis que les résultats obtenus lors des tests in vitro montrent que l’extrait relâche l’iléon isolé contracté par l’acétylcholine, il diminue ainsi l’hyperstaltisme intestinal et prolonge la durée du transit intestinal. L’augmentation de la durée du transit intestinal donne du temps à l’organisme d’absorber l’eau dans la lumière intestinale. Ce qui aboutit à une réduction du volume d’eau dans les selles (CARRE D. et coll., 2001; CESARD J. P. et coll., 2002).
Puisque l’extrait diminue l’effet maximal de l’acétylcholine et augmente la valeur de sa CE50, nous pouvons dire que RAH25 inhibe l’effet contracturant de l’acétylcholine d’une manière non compétitive. C’est à dire RAH25 pourrait se lier à un récepteur différent de celui de l’acétylcholine (HEINZ L. et coll., 2003), ce qui provoque le relâchement du muscle intestinal à l’origine de la baisse de la contraction de l’iléon isolé (RAJAMANICKA M. et coll., 2010). Les flavonoïdes pourraient être responsables de cette activité, car ils sont capables d’inhiber la contraction du muscle lisse provoquée par l’acétylcholine (VENKATESAN N., et coll., 2005).
La diminution de la vitesse du transit intestinal ainsi que la baisse de la sécrétion intestinale expliquerait la diminution de l’accumulation du fluide intestinal, à l’origine de l’activité anti-diarrhéique de l’extrait. Des études sur des produits purifiés pourraient expliquer le mécanisme d’action exacte de l’extrait.

CONCLUSION

Nos résultats montrent que l’extrait RAH25 possède une activité anti-diarrhéique. Il diminue l’accumulation du fluide intestinal provoquée par le sulfate de magnésium et inhibe le péristaltisme intestinal provoqué par l’acétylcholine. L’activité anti-sécrétoire pourrait être due à la présence des tanins par leur propriété astringente, tandis que les flavonoïdes diminuent le péristaltisme et les saponines favorisent la réabsorption au niveau des cellules pariétales. Des études ultérieures pourraient donner plus de précision sur le mécanisme d’action de cet extrait.

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Table des matières

LES SIGNES ET LES ABREVIATIONS
INTRODUCTION
MATERIELS ET METHODES
I. PARTIE CHIMIQUE
1. Extraction
2. Criblage phytochimique
II. PARTIE PHARMACOLOGIQUE
1. Étude de l’effet de l’extrait RAH25 sur la sécrétion intestinale
2. Étude de l’effet de l’extrait RAH25 sur la motilité intestinale
3. Etude de l’activité de l’extrait RAH25 sur la contraction provoquée par l’acétylcholine
RESULTATS
I. PARTIE CHIMIQUE
I. PARTIE PHARMACOLOGIQUE
1. Activité de l’extrait RAH25 sur la sécrétion intestinale
2. Effet de l’extrait RAH25 sur la motilité intestinale
3. Effet de l’extrait RAH25 vis-à-vis de l’effet de l’Acétylcholine
DISCUSSION
CONCLUSION
BIBLIOGRAPHIES