Soutenance mémoire
L’ulcère gastroduodénal constitue un des problèmse de santé publique sur le plan mondial (IYYAM P.S. et coll., 2010). Il affecte environ près de 10% de la population mondiale, avec 60 000 à 80 000 nouveaux cas par an (TOGOLA A. et coll., 2014). Aux Etats Unis, environ 4 millions de personnes souffrent de cette maladie, et chaque année 350000 nouveaux cas sont diagnostiqués. Environ 180000 patients sont hospitalisés à cause de cette maladie et 5 000 en meurent chaque année (HASNATH S. R. A., 2014). Au Mali, cette maladie touche environ 11,5 % de la population (DIARRA M. et coll., 2009). Et en 1996, environ 5% de la population malgache ont été touchés par cette maladie, ce qui a permis de la classer au 12ème rang de pathologie dans la grande Ile. Il affecte autant les femmes que les hommes avec un pic de prévalence se situant entre 55 et 65 ans, et l’ulcère duodénaux surviennent le plus souvent chez les hommes avec un pic de prévalence entre 40 et 50 ans (AZZIZ A. et BONNET D., 2008).
La surface de l’estomac est ponctuée de millier de cryptes donnant accès aux glandes gastriques qui comprennent différents types de cellules : les cellules à mucus du collet, les cellules principales, les cellules pariétales et les cellules souches. Les cellules à mucus secrètent du mucus et du bicarbonate, tandis que les cellules principales sécrètent de la pepsinogène, et enfin les cellules pariétales sécrètent de l’acide chlorhydrique (MOURE N. et coll., 2006). Le mucus est composé de 95% d’eau et 5% de glycoprotéines. Il tapisse et protège l’épithélium gastrique de sa propre sécrétion d’ HCl et ralentit la migration des ions H+ vers la membrane apicale des cellules gastriques. Tandis que le bicarbonate neutralise l’acide gastrique (INHS Z. A. et coll., 2014 ; PRAJAPATI P. K. et coll., 2014). L’acide chlorhydrique confère au suc gastrique son pH très bas, généralement entre 1 à 2. Cette acidité est nécessaire dans la transformation du pepsinogène en pepsine, une enzyme protéolytique capable de digérer la muqueuse gastrique (MARIEB N. E., 1999 ; SALENA B.J. et HUNT R.H., 2002), elle protège également l’organisme contre l’invasion bactérienne par sa fonction bactériolytique. En outre, l’acide chlorhydrique favorise l’absorption intestinale de calcium et du fer (NEVIERE R., 2013).
PARTIE CHIMIQUE
Préparation de l’extrait
Les feuilles de la plante objet de travail ont été récoltées dans la région DIANA dans le district d’Ambilobe au mois de novembre 2016. Elles ont été séchées à l’abri du soleil, dans une salle aérée, à la température ambiante, pendant 14 jours. Une fois séchées, elles ont été broyées à l’aide d’un broyeur à marteau (BROOK CROMPTON © série 2000). Deux cent grammes de cette poudre ont été macérés dans 2 litres d’un mélange éthanol-eau (60 :40) dans un récipient en verre, à la température ambiante, pendant trois jours, en agitant tous les jours. Le macérât obtenu a été filtré sur du coton hydrophile, et le filtrat a été évaporé à l’aide d’un distillateur, à la température de 80°C, puis au bain marie à la température de 100°C .
Criblage phytochimique
Un criblage phytochimique a été effectué pour détecter les familles chimiques présentes dans l’extrait ML-22. Ce test a été réalisé selon la méthode décrite par FONG H. H. S et ses collaborateurs (1977) . La présence de la famille chimique est caractérisée par la formation d’un complexe soluble coloré (réaction de coloration) ou complexe insoluble (réaction de précipitation) en utilisant des réactifs spécifiques pour chaque famille chimique.
Les signes suivants ont été utilisés afin d’exprimer la teneur relative des différentes familles chimiques présentes dans l’extrait ML-22 :
(+ + +) : Réaction fortement positive, indiquant une forte teneur de la famille chimique
(+ +) : Réaction moyennement positive, indiquant la présence de la famille chimique en teneur moyenne
(+) : réaction faiblement positive, indiquant la présence de la famille chimique en faible teneur .
PARTIE PHARMACOLOGIQUE
La plante que nous avions choisie pourrait protéger la muqueuse gastrique contre l’agression d’acide ou diminuer l’acidité gastrique en inhibant la sécrétion de H+ . Pour étudier son activité sur la muqueuse gastrique, des tests in vivo ont été effectués chez le rat avec l’extrait hydro alcoolique ML-22 sur l’ulcère provoqué par l’indométacine (DJANANGUIRI B., 1969), et son activité sur la sécrétion acide provoquée par la ligature de pylore (SHAY H., et coll., 1945).
Animaux d’expérimentation
Des rats mâles et femelles de souche WISTAR, pesant entre 210 et 310 g, âgés de trois mois ont été utilisés. Ces animaux ont été élevés dans les mêmes conditions à l’animalerie de Laboratoire de Pharmacologie Générale, de Pharmacocinétique et de Cosmétologie (LPGPC) de la Faculté des Sciences, Université d’Antananarivo. Ils ont été nourris avec de la provende LFL 1420 et ont eu accès libre à de l’eau. Ils ont été soumis à un cycle de lumière et d’obscurité de 12 h/12 h, et à la température d’environ 22°C.
Etude de l’activité de l’extrait ML-22 sur la muqueuse gastrique
Cette manipulation a pour but d’étudier l’effet de l’extrait vis-à-vis de l’effet de l’indométacine sue la paroi gastrique (DJANANGUIRI B., 1969). Les rats ont été mis à jeun pendant 18 h avant l’expérience mais ont eu accès libre à de l’eau. Puis, ils ont été répartis en trois lots, chaque lot est composé de trois rats : un lot témoin et deux lots traités avec l’extrait ML-22 à différentes doses. Ces animaux ont reçu 30 mg/kg d’indométacine une fois par jour pendant 4 jours (KHARES et coll., 2008). Tous les jours, pendant 4 jours, 1 heure après l’administration de l’indométacine, les animaux du lot témoin ont reçu 10 ml/kg d’eau distillée (DIELH- HEINZ K., 2010), tandis que ceux des deux autres lots ont respectivement reçu, par voie orale, l’extrait aux doses de 150 et 300 mg/kg dans 10 ml/kg d’eau distillée (DIELH- HEINZ K., 2010). Au cinquième jour, les rats ont été sacrifiés, puis après une laparotomie, leur estomac a été prélevé et isolé, puis ouvert suivant sa grande courbure. Ensuite, il a été rincé avec de l’eau et étalé sur une surface plane. La surface des lésions provoquées par l’indométacine au niveau de la muqueuse gastrique a été mesurée par planimétrie directe. Un papier millimétré transparent a été placé sur l’estomac, puis le contour de chaque lésion a été tracé à l’aide d’un crayon à pointe fine, et le nombre de carreaux a été compté pour déterminer la surface de chaque lésion (NTSAYO F., 2011).
Etude de l’effet de l’extrait ML-22 sur la sécrétion gastrique
Dans le but d’étudier l’effet de ML-22 sur la sécrétion d’acide gastrique, le pylore a été ligaturé afin d’augmenter cette sécrétion (SHAY H. et coll., 1945). Les rats ont été mis à jeun pendant 18 h avant le test, puis répartis en trois lots composé trois rats: un lot témoin et deux lots traités avec l’extrait ML-22. Les animaux de lot témoin ont reçu 10 ml/kg d’eau distillée (DIELH- HEINZ K., 2010), tandis que les animaux des autres lots ont un reçu l’extrait aux doses de 150 et 300mg/kg respectivement dans 10 ml/kg d’eau distillée (DIELH-HEINZ., 2010).
Deux heures après l’administration de ces produits, les animaux ont été anesthésiés avec l’éther diéthylique (KUMAR K. et coll., 2013), puis sur la partie abdominale, entre les 2 dernières côtes, une incision de 1,5 cm de longueur a été effectuée (OFEM O.E. et coll., 2012). Ensuite le pylore a été repéré et ligaturé (SHAY H et coll., 1945). L’incision a ensuite été suturée, et les animaux ont été placés dans des cages individuelles, ils ont été privés d’eau et de nourriture pendant la période post opératoire (KUMAR K et coll., 2013).
Quatre heures après la ligature du pylore, les animaux ont été sacrifiés, et une laparotomie a été effectuée. L’estomac a été prélevé et le contenu gastrique a été récupéré, puis versé dans un tube à essai et centrifugé à 3000 tours/minute pendant dix minutes. Le surnageant a ensuite été récupéré, puis son pH a été mesuré à l’aide d’un pH-mètre (PIERRON®) (RANDRIANAVONY P. et coll., 2015).
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Table des matières
I. INTRODUCTION
II. MATÉRIELS ET MÉTHODES
A. PARTIE CHIMIQUE
1. Préparation de l’extrait
2. Criblage photochimique
B. PARTIE PHARMACOLOGIQUE
1. Animaux d’expérience
2.Étude de l’activité de l’extrait ML-22 sur la muqueuse gastrique
3. Étude de l’effet de l’extrait ML-22 sur la sécrétion gastrique
C. EXPRESSION ET ANALYSE DES RÉSULTATS
III. RÉSULTATS
A. PARTIE CHIMIQUE
1. Rendement de l’extraction
2. Résultats de criblage phytochimique
B. PARTIE PHARMACOLOGIQUE
1. Activité de l’extrait ML-22 sur la muqueuse gastrique
2. Activité de l’extrait ML-22 sur la sécrétion gastrique
IV. DISCUSSION
V. CONCLUSION
REFERENCES
