Soutenance mémoire
L’ulcère gastro-duodénal est un problème de santé majeur avec une étiologie multifactorielle, entre autres il est dû à la hausse du taux de l’acide intra gastrique et/ou à la baisse de la défense de la muqueuse (BHAVE A.L., 2006). Aux Etats-Unis, environ 4 millions de personnes souffrent de l’ulcère gastro-duodénal en 2002et chaque année, environ 350000 nouveaux cas sont diagnostiqués. Environ 100.000 patients sont hospitalisés à cause de l’ulcère gastro duodénal et au moins environ 3000 personnes en meurent (CRAWFORD A. S. et WHITE J.G., 2002). En 1996, les douleurs épigastriques représentent une symptomatologie fréquente et la maladie ulcéreuse touche environ 5 % de la population malgache y compris les enfants et les jeunes. Cette maladie se trouve au 12ème rang dans la classification des pathologies de la Grande Ile (CASSEL-BERAUDA.M. et coll., 1996).
L’ulcère gastrique est une perte de substance de la muqueuse de l’estomac consécutive à l’effondrement de l’équilibre entre les facteurs protecteurs et les facteurs agresseurs .
L’estomac sécrète environ 1 à 1,5l de suc gastrique par jour : un liquide incolore, visqueux, très acide qui contient des éléments hydrominéraux : acide chlorhydrique, bicarbonate et des éléments organiques : mucus, pepsinogène, lipase gastrique et des facteurs intrinsèques. A l’état normal, l’acide gastrique (HCl) facilite la digestion des protéines en favorisant l’activation de la pepsinogène en pepsine qui se passe dans un milieu acide ; il facilite également l’absorption du fer, du calcium, de la vitamine B12 et certains médicaments et enfin, il ralentit la prolifération bactérienne au niveau de l’estomac (NEVIER R., 2013).
L’acide chlorhydrique est sécrété par les cellules pariétales, et cette sécrétion est soumise à la régulation du système parasympathique, des hormones, des paracrines (l’histamine) et des bactéries (Helicobacter pylori) (KONTUREK S.J., 2003). La fixation de l’acétylcholine sur les récepteurs muscariniques type 3 (RM3) au niveau de la membrane des cellules pariétales provoque la libération des ions H+ , tandis que sa fixation sur les récepteurs de type 1 (RM1) au niveau de la membrane des cellules entérochromaffines like (ECL) provoque la libération de l’histamine (SUNIL K. et coll., 2012).
Par ailleurs, la fixation de la gastrine sur ses récepteurs (R CCK2) augmente la concentration intracellulaire en Ca2+ , qui forment un complexe Calcium- Calmoduline (Ca2+ – CaM), ce qui déclenche la phosphorylation de l’enzyme (H+ -K+ ) ATPase responsable de l’activation de la pompe responsable de la sortie de l’ion H+ vers la lumière gastrique (ARIYPHISI I.et coll., 1986).
Quant à l’histamine, il se fixe sur les récepteurs histaminiques type 2 couplés à l’adénylatecyclase au niveau de la membrane des cellules pariétales. L’activation de l’adénylcyclase provoque la production de l’adénosine monophosphate cyclique (AMPc) qui est avec le complexe Ca-calmoduline active la protéine kinase. A son tour la protéine kinase active l’enzyme H+/K+ -ATPase responsable du fonctionnement de la pompe qui expulse l’ion H+ vers la lumière gastrique (ARIYPHISI I.et coll., 1986).
ETUDE PHYTOCHIMIQUE
Préparation de l’extrait
Les feuilles de la plante objets de ce travail ont été récoltées dans la région d’Analamanga au mois de juillet 2014. Elles ont été séchées à l’ombre à la température ambiante et à l’air libre pendant trois mois. Les feuilles ainsi séchées ont été broyées à l’aide d’un broyeur à marteau, et 500 g de la poudre obtenue ont été macérées dans 3L d’un mélange éthanol – eau (60 : 40) à la température ambiante pendant une semaine. Le macérât a ensuite été filtré à l’aide d’un papier filtre, et le filtrat obtenu a été évaporé sous vide à la température de 80°C à l’aide d’un rotavapor BÜCHI ® .
Criblage phytochimique
Pour déterminer les différentes familles chimiques présentes dans l’extrait d’EJC007, un criblage phytochimique a été effectué selon les méthodes décrites par FONG H. H.S. (1977). Ce test a été basé sur la formation de complexes insolubles (réaction de précipitation) ou sur la formation de complexes colorés (réaction de coloration), entre les réactifs spécifiques et les familles chimiques correspondantes . Pour quantifier les familles chimiques présentes dans l’extrait, les signes suivant ont été utilisés :
– (-) : absence
– (+) : présence en faible quantité
– (++) : présence en moyenne quantité
– (+++) : présence en forte quantité .
TESTS BIOLOGIQUES
L’effet de l’extrait EJC007 a été étudié sur la sécrétion d’ions H+ et de mucus. Ces études ont été menées chez des rats de race Wistar des deux sexes, âgés de 5 à 9 semaines et pesant entre 110 et 250 g. Les animaux ont été élevés dans l’animalerie du laboratoire de Pharmacologie Générale, de Pharmacocinétique et de Cosmétologie, du département de Physiologie Animale et de Pharmacologie, de la Faculté des Sciences, Université d’Antananarivo. Ils ont été nourris avec de la provende LFL 1420 et ont eu un accès libre à l’eau. Ils ont été soumis à un cycle de lumière et d’obscurité de 12h/12h et à la température de 27°C environ. Avant les tests, les animaux ont été mis à jeun pendant 12 heures mais ont eu accès libre à l’eau.
Etude de l’effet anti sécrétoire de l’extrait EJC007
Le but de cette expérience a été d’étudier activité de l’extrait EJC007 sur la sécrétion de l’acide chlorhydrique dans la lumière gastrique provoquée expérimentalement en ligaturant le pylore suivant la méthode de Shay (SHAY H.et coll., 1945). Des rats de race Wistar, des deux sexes, âgés de neuf semaines, ayant un poids moyen entre 110 et 250g, ont été utilisés. Ils ont été répartis en trois lots de trois rats : un lot témoin et deux lots traités avec l’extrait. Les différents produits à tester ont été administrés par voie orale dans un volume de 10 ml/kg (DIELH- HEINZ K., 2010): les animaux du lot témoin (I) ont reçu de l’eau distillée, les deux lots (II et III) ont reçu l’extrait EJC007 aux doses 300mg/kg, 600mg/kg respectivement. Deux heures après l’administration de ces produits, les animaux ont été anesthésiés par inhalation d’éther diéthylique. Une ouverture de l’abdomen de 0,5 cm a été effectuée afin que l’intestin ne déborde pas à l’extérieur (GOVIND P. et SAURABH J., 2010). Ensuite le pylore a été identifié et ligaturé suivant la technique de SHAY et ses collaborateurs (1945), l’abdomen a ensuite été fermé avec des points de suture. Pendant la période post opératoire, les animaux ont été placés dans des cages individuelles et ont été privés de nourriture et de l’eau.
Quatre heures après la ligature du pylore, les animaux ont été euthanasiés par inhalation d’éther diéthylique. Une laparotomie a été effectuée, le cardia et le pylore ont été ligaturés, ensuite l’estomac a été prélevé et son contenu a été recueilli dans un récipient et centrifugé à 3000 tours /mn pendant 10mn, ensuite le pH du surnageant a été mesuré à l’aide d’un pHmètre (PIERRON®).
Etude de l’effet antiacide de l’extrait EJC007
Pour étudier l’effet de l’extrait sur l’acidité gastrique, le pH du suc gastrique seul a été mesuré ainsi que celui de l’extrait EJC007 seul. Ensuite, le pH du suc gastrique additionné avec l’extrait EJC007 à la concentration de 600mg/ml a été mesuré. Puis, le pH du suc gastrique des animaux traités avec l’extrait au dose 600mg/kg a été mesuré et les valeurs du pH des différents lots ont été comparées entre elles.
Etude de l’effet mucoprotecteurde l’extrait EJC 007
Les mucoprotecteurs font partie des produits anti ulcéreux. Cet effet a été étudié sur la capacité de l’extrait EJC007 à protéger la muqueuse gastrique contre l’agression l’indométacine. Cet anti inflammatoire non stéroïdien provoque des lésions au niveau de la muqueuse gastrique (DJAHANGURI B., 1969). L’effet mucoprotecteur de l’extrait a été étudié en mesurant la surface des lésions provoquées par l’indométacine chez les lots traités par rapport aux témoins. Des rats de race Wistar des deux sexes, âgés de six semaines ayant un poids moyen compris entre 110et 250 g ont été utilisés. Ils ont été mis à jeun 12 heures avant la manipulation et ont eu accès libre à l’eau. Ensuite, ils ont été répartis en trois lots de trois rats : un lot témoin et deux lots traités avec l’extrait à différentes doses (SAYANTI B. et coll., 2007). L’indométacine a été administrée à la dose de 30mg/kg par voie orale (ODE O.J.et coll., 2011). Quatre heures après l’administration de l’indométacine, le lot témoin a reçu 10ml/kg de l’eau distillée, et les deux lots ont reçu l’extrait EJC007, par voie orale, à la dose respective de 300mg/kg et 600mg/kg. Tous les jours, pendant cinq jours et à la même heure, les animaux ont reçu les mêmes doses d’indométacine et de l’extrait dans un volume de 10 ml/kg (DIELH -HEINZ K., 2010). Au sixième jour, les animaux ont été sacrifiés et leur estomac a été prélevé, puis ouvert suivant sa grande courbure, rincé et étalé sur une surface plane pour mesurer la surface des lésions avec la méthode planimétrie directe. Un papier millimétré transparent a été placé sur l’estomac et le contour de chaque lésion a été tracé sur le papier. L’effet cicatrisant de l’extrait a été évalué suivant les surfaces des lésions observées au niveau de la muqueuse.
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Table des matières
INTRODUCTION
MATERIELS ET DES METHODES
ETUDE PHYTOCHIMIQUE
1. Préparation de l’extrait
2. Criblage phytochimique
TESTS BIOLOGIQUES
1. Etude de l’effet anti sécrétoire de l’extrait EJC007
2. Etude de l’effet antiacide de l’extrait EJC007
3. Etude de l’effet mucoprotecteurde l’extrait EJC 007
EXPRESSION ET ANALYSES DES RESULTATS
RESULTATS
A. PARTIE CHIMIQUE
B. PARTIE BIOLOGIQUE
1. Effet de l’extrait EJC007sur la sécrétion acide de l’estomac
2. Effet antiacide de l’extrait EJC007
3. Effet de l’extrait EJC007 sur laprotection de la muqueuse gastrique
DISCUSSIONS
CONCLUSION
BIBLIOGRAPHIES
WEBOGRAPHIES
