Soutenance mémoire
L’asthme est une maladie respiratoire chronique multifactorielle et hétérogène touchant les voies aériennes inférieures et les bronchioles, il est dû à l’inflammation et à l’obstruction des bronches (TAYTARD A., 2013). La crise d’asthme est un événement brutal caractérisé par trois mécanismes différents : une contraction des muscles lisses autour des bronches, une bronchoconstriction, une inflammation de la paroi interne des bronches et une hypersécrétion des mucus qui bloque les bronches (POSTON R. N.et coll., 1992). Cette obstruction des bronches entraine un essoufflement, une oppression thoracique, une respiration sifflante accompagnée d’une suffocation (MALE D. et BROSTOFF J., 2007). Il existe plusieurs facteurs déclenchant la crise d’asthme comme l’infection respiratoire provoquée par le rhume, la grippe, le stress émotionnel et agitation, l’exercice physique, les allergies provoquées par des allergènes tels que les moisissures, la poussière, les acariens, le pollen et la variation de la température de l’air (GILLES G., 2006).
PARTIE CHIMIQUE
Préparation de l’extrait
Les feuilles de la plante à étudier ont été récoltées à Tsiroanomandidy au mois de Novembre 2015. Deux cent cinquante grammes ont été séchées à l’abri de la lumière solaire et de l’humidité, dans une salle aérée à la température ambiante pendant 2 mois. Une fois séchées, elles ont été broyées à l’aide d’un broyeur à marteau au Laboratoire de Pharmacologie Générale, de Phamacocinétique et de Cosmétologie (LPGPC) à la Faculté des Sciences, Université d’Antananarivo. La poudre obtenue a été macérée dans un mélange éthanol-eau (60 :40) pendant 72h à la température ambiante. Le macérât a ensuite été filtré sur du coton hydrophile, puis le filtrat a été évaporé à l’aide d’un distillateur à la température de 85°C.
Criblage phytochimique
Le criblage phytochimique est un test qualitatif, il a pour objectif de détecter les différentes familles chimiques présentes dans un extrait et d’estimer leur teneur relative. Les tests utilisés sont basés sur l’utilisation de réactifs spécifiques et la présence de la famille correspondante est caractérisée par l’apparition de complexes insolubles se présentant sous forme de précipité et/ou d’un changement de coloration (FONG H.H.S. et coll., 1977) .
PARTIE PHARMACOLOGIQUE
L’activité de l’extrait RV33 a été étudiée chez le cobaye. Des tests in vivo et in vitro ont été effectués. Son effet sur la gêne respiratoire provoquée par l’histamine a été étudiée in vivo (COLOT M., 1972) .
Les animaux utilisés
Des cobayes tricolores sans distinction de sexe pesant de 240g à 320g âgées de 3 mois ont été utilisés. Ils ont été acclimatés à l’animalerie du LPGPC pendant 1 semaine avant les manipulations. Ils ont été élevés dans les conditions de l’animalerie, avec une alternance de lumière et d’obscurité de 12/12h et à la température de 25°C environ. Ils ont été nourris avec des feuilles fraîches de graminées, et ont été mis à jeun 12h avant chaque manipulation .
Etude de l’effet de RV33 sur la suffocation provoquée par l’histamine
L’activité de l’extrait RV33 a été étudiée in vivo sur la détresse respiratoire provoquée par l’histamine (PERRY W.F. et BOYD E.M., 1941).Pour réaliser ce test, les animaux ont été préalablement sélectionnés et seuls les animaux sensibles à l’histamine ont été utilisés. Les animaux sélectionnés ont été mis à jeun pendant 12h avant la manipulation puis répartis en 3 lots dont 1 lot témoin et 2 lots traités avec l’extrait à différentes doses (TROMBETTA D.et coll., 2005). Les animaux du lot témoin ont reçu 10 ml/kg d’eau distillée par voie orale. Tandis que les animaux des 2 lots ont reçu l’extrait RV33 aux doses respectives de 200 et 400mg/kg par voie orale dans un volume de 10 ml/kg (BRUNELLESCHI S. et coll., 2001). Une heure après l’administration de l’eau distillée et de l’extrait, un représentant de chaque lot ont été placés dans un dispositif expérimental de 26cm de diamètre et de 24cm de hauteur muni d’un couvercle, puis une solution d’histamine à 5% a été pulvérisée dans l’enceinte. Les animaux qui ont présenté une détresse respiratoire en moins de 3 minutes ont été retenus et sélectionnés pour le test biologique (KILADJIAN J.J., 2011). Le temps d’apparition de la détresse respiratoire ainsi que la durée de cette détresse respiratoire ont été chronométrés.
Etude de l’activité de l’extrait sur le muscle lisse bronchique
Pour étudier l’activité de l’extrait sur le muscle lisse bronchique, la trachée a été isolée et contractée avec de l’histamine. L’extrait a été injecté dans le bain contenant la trachée isolée (KO W.C. et coll., 2002).
a. Préparation de la trachée isolée
Le cobaye a été assommée avec un coup sec sur la nuque, puis exsanguiné en coupant les carotides, ensuite une thoracotomie a été effectuée, puis la trachée a été prélevée et placée dans une solution de Tyrode aérée avec de l’air à l’aide d’un aérateur électrique.
b. Montage de la trachée isolée et étude de l’activité de l’extrait
L’organe a été ensuite nettoyé, puis découpé en spirale, et monté dans une cuve à organe isolé contenant 20ml de solution de Tyrode aérée à l’aide d’un aérateur et maintenue à la température de 37°C. Ensuite, une de ses extrémités a été fixée au fond de la cuve à l’aide d’un fil de coton, tandis que l’autre extrémité a été reliée à un stylet de l’enregistreur avec un contre poids de 1,5g. L’organe a été laissé s’équilibrer pendant 45 minutes pendant lesquelles le bain a été renouvelé toutes les 15 minutes. Puis la viabilité de l’organe a été testé et il a été sensibilisé en injectant l’Histamine 10⁻⁷ M dans le bain. Après la contraction, l’organe a été rincé puis laissé de nouveau se stabiliser pendant 45 minutes. Pendant cette période, l’organe a été rincé toutes les 15 minutes. Après cette phase de stabilisation, l’histamine a été injectée dans le bain d’une manière cumulative pour obtenir des concentrations croissantes à partir de 10⁻¹⁰ M jusqu’à la contraction maximale. Puis, l’extrait a été injecté dans le bain d’une manière cumulative jusqu’au relâchement total de la trachée (VAN ROSSUN J.M., 1963 ; COLOT M., 1972). La contraction de la trachée a été enregistrée, son amplitude a été mesurée, puis exprimée en % par rapport à la contraction maximale provoquée par l’histamine seule qui a été considérée comme 100% de contraction.
Mécanisme d’action de l’extrait RV33
L’objectif de ce test a été d’étudier le mécanisme d’action de l’extrait RV33 sur la contraction de la trachée contractée par l’histamine. La trachée a été pré incubée dans un bain contenant l’extrait à différentes concentrations dans le bain avant de la contracter avec l’histamine. Après avoir monté la trachée isolée de cobaye dans la cuve, elle a été laissée se stabiliser pendant 45 minutes, puis sensibilisée avec l’histamine à 10⁻⁷ M dans le bain. Elle a été laissée se stabiliser de nouveau pendant 45 minutes. Durant cette période, la solution de Tyrode a été renouvelée 3 fois. Puis, l’Histamine a été injectée dans le bain de manière cumulative pour réaliser des concentrations croissantes à partir de la concentration 10⁻¹⁰ M dans le Tyrode jusqu’à l’obtention de la contraction maximale de la trachée. Ensuite, la préparation a été rincée, puis l’organe a été laissé se stabiliser de nouveau pendant 45 minutes en renouvelant fois la solution de survie. Après, la trachée a été laissée en contact avec l’extrait pendant 15 minutes. Après ce temps d’incubation, l’histamine a été injectée dans le bain d’une manière cumulative jusqu’à l’obtention de la contraction maximale de la trachée.
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Table des matières
I.INTRODUCTION
II.MATERIELS ET METHODES
A.PARTIE CHIMIQUE
1. Préparation de l’extrait l’extrait
2. Ciblage phytochimique
B. PARTIE PHARMACOLOGIQUE
1. Les animaux utilisés
2. Etude de l’effet de RV33 sur la suffocation provoquée par l’histamine
3. Etude de l’activité de l’extrait sur le muscle lisse bronchique
a) Préparation de la trachée isolée
b) Montage de la trachée isolée et étude de l’activité de l’extrait
4. Mécanisme d’action de l’extrait
C. EXPRESSION ET ANALYSES DES DONNEES
III.RESULTATS
A.PARTIE CHIMIQUE
1. Rendement de l’extraction
2. Résultats du criblage phytochimique
B.PARTIE PHARMACOLOGIQUES
1. Activité de l’extrait RV33 sur la suffocation provoquée par l’histamine
2. Activité de l’extrait RV33 sur la trachée contractée par l’histamine
3. Effet de l’extrait sur l’activité contracturant de l’histamine
IV.DISCUSSION
V.CONCLUSION
BIBLIOGRAPHIE
WEBOGRAPHIE
