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PARTIE PHARMACOLOGIQUE
Animaux d’expérimentation
Des souris de race SWISS mâles et femelles pesant entre 25 et 50 g, et âgées entre 6 à 9 semaines ont été utilisées. Ces souris ont été élevées à l’animalerie du LPGPC à la Faculté des sciences, Université d’Antananarivo. Elles ont été soumises à un cycle de lumière et d’obscurité de 12 h/12 h, et la température de la salle a été aux environs de 20°C. Elles ont été nourries avec de la provende LFL 14/20, et ont eu un accès libre à l’eau.
Étude de l’activité anti inflammatoire de HAWK07
Afin d’étudier l’activité anti-inflammatoire de l’extrait HAWK07, des tests in vivo ont été effectués en utilisant deux modèles d’inflammation : un modèle d’inflammation aiguë et un modèle d’inflammation subchronique.
Étude de l’effet de l’extrait HAWK07 sur l’inflammation aiguë
L’effet de HAWK07 sur l’inflammation aiguë a été étudié par son effet sur la perméabilité vasculaire provoquée par l’acide acétique (KOU J. et coll., 2006).
Les souris ont été mis à jeun pendant 16 h et réparties en 3 lots : un lot témoin et 2 lots traités avec l’extrait HAWK07. Le lot témoin a reçu de l’eau distillée, tandis que les deux autres lots ont reçu respectivement 400 mg/kg et 800 mg/kg de l’extrait HAWK07 par voie orale. Trente minutes après l’administration de l’eau et de l’extrait, une solution de Bleu d’Evans (1 %) a été injectée par voie intraveineuse au niveau de la queue de la souris à raison de 10 ml/kg (figure 1) ; et 15 minutes après l’injection du bleu d’Evans, de l’acide acétique (0,7 %) a été injecté par voie intra péritonéale à raison de 10 ml/kg (Figure 2). Quinze minutes après l’injection de l’acide, les souris ont été sacrifiées, puis une laparotomie a été effectuée et la cavité péritonéale a été lavée avec 10 ml de sérum physiologique. Le liquide de lavage a été recueilli puis centrifugé à 1500 tours par minute pendant 10 min, et la densité optique du surnageant a ensuite été lue à l’aide d’un colorimètre PIERRON® à 520 nm (KOU J. et coll., 2006).
Étude de l’effet de l’extrait HAWK07 sur l’inflammation subchronique
L’effet de HAWK07 sur l’inflammation subchronique a été étudié par son effet sur la formation du granulome inflammatoire (EDWARDS J. C. W. et coll., 1981).
Trois lots de 3 souris ont été utilisés : 1 lot témoin et 2 lots traités avec l’extrait HAWK07. Les souris ont été anesthésiées avec de l’éther diéthylique, puis le dos de l’animal, au niveau de la région scapulaire, a été incisé sur une longueur de 5 mm. Une boule de coton de 10 mg imbibée de carragénine a ensuite été insérée sous la peau, et l’incision a été suturée (figure 3). Pendant 7 jours à la même heure, les animaux du lot témoin ont reçu de l’eau distillée, tandis que ceux des 2 autres lots ont reçu respectivement l’extrait HAWK07 aux doses de 400 mg/kg et 800 mg/kg par voie orale (figure 4). Au huitième jour, les souris ont été anesthésiées avec de l’éther diéthylique, puis les boules de coton ont été retirées et ont été séchées dans une étuve à la température de 40°C pendant 2 h. Après séchage, les boules de coton ont été pesées (EDWARDS J. C. W. et coll., 1981).
EXPRESSION ET ANALYSES DES RÉSULTATS
Les résultats ont été exprimés en moyenne ± écart type réduit (Moyenne ± e.s.m), et les moyennes ont été comparées entre elles en utilisant le test « t » de Student avec un dégrée de signification p < 0,05.
PARTIE PHARMACOLOGIQUE
Effet de l’extrait HAWK07 sur l’inflammation aiguë
L’effet de HAWK07 sur l’inflammation aiguë a été étudié par sa capacité d’inhiber la perméabilité vasculaire provoquée par l’injection intra péritonéale de l’acide acétique chez la souris. La perméabilité vasculaire se traduit par la sortie du bleu d’Evans dans la cavité péritonéale. L’administration de HAWK07 par voie orale, diminue la densité optique du bleu d’Evans dans le liquide intrapéritonéal par rapport au témoin. La densité optique du liquide intrapéritonéal des animaux du lot témoin est de 2,309 ± 0,03 contre 1,392 ± 0,04 et 0,865 ± 0,021 chez les animaux traités avec HAWK07 aux doses de 400 mg/kg et 800 mg/Kg (P<0,05) (figure 5).
Effet de l’extrait HAWK07 sur l’inflammation subchronique
L’effet de HAWK07 sur l’inflammation chronique a été étudié par son effet sur la formation du granulome inflammatoire. Cette dernière a été provoquée par des boules de coton imbibées de carragénine insérées sous la peau des souris. Les résultats montrent que l’extrait inhibe la formation du granulome inflammatoire, et cette inhibition augmente en fonction de la dose. Le poids des boules de coton chez les souris traitées avec l’extrait est inférieur à celui du lot témoin. Chez le lot témoin les boules de coton pèsent 53,85 ± 0,62 mg contre 40,42 ± 0,49 mg et 29, 82 ± 0,26 mg chez les animaux traités avec HAWK07 aux doses de 400 mg/kg et 800 mg/Kg respectivement (P<0,05) (figure 6).
DISCUSSION
L’objectif de notre étude a été d’étudier l’activité anti-inflammatoire de l’extrait HAWK07 in vivo chez la souris. Puisque l’inflammation présente 2 phases : la phase vasculaire et la phase tissulaire, deux tests ont été effectués pour étudier l’activité anti-inflammatoire de HAWK07. Le premier test consiste à étudier l’effet de l’extrait sur la perméabilité vasculaire, et le deuxième sur la formation du granulome. Pour étudier son effet sur la phase vasculaire, l’acide acétique a été administré par voie intrapéritonéale, et le bleu d’Evans injecté par voie intra veineuse a été utilisé pour mettre en évidence cette perméabilité vasculaire (KOU J. et coll., 2006). En effet, l’injection intra-péritonéale de l’acide acétique provoque la libération de l’histamine, de la sérotonine et des prostaglandines dans la cavité péritonéale. Ces médiateurs provoquent une vasodilatation, à l’origine de l’augmentation de la perméabilité vasculaire et la sortie d’eau et de protéines plasmatiques dans la cavité péritonéale (CAREYL W. M. et coll., 2008). Comme le bleu d’Evans se lie aux protéines plasmatiques, l’importance de l’exsudation vasculaire est caractérisée par l’importance de la quantité de bleu d’Evans qui se trouve dans la cavité intra péritonéale (DALLAL M. M. et coll., 1994). Or la densité optique du bleu d’Evans dans le liquide péritonéal des souris traitées avec l’extrait est inférieure à celle des souris témoins. Cela montre que peu de bleu d’Evans est passé dans la cavité intra péritonéale, ce qui veut dire que la perméabilité vasculaire a diminué, empêchant ainsi l’exsudation plasmatique vers les tissus et la formation de l’œdème.
D’après la littérature les anthocyanes sont capables d’inhiber la libération de la sérotonine, de l’histamine et des prostaglandines, et réduisent ainsi la vasodilatation et l’augmentation perméabilité vasculaire (FERRADJI A., 2011). En outre, les alcaloïdes diminuent aussi la perméabilité vasculaire en inhibant la libération des prostaglandines (AUGUSTO L. S. et coll., 2011). Par ailleurs des recherches effectuées sur Eupatorium arnottianum montrent que les flavonoïdes sont également capables de diminuer la perméabilité vasculaire (CLAVIN M. et coll., 2007). Cette diminution de la vasodilatation et de la perméabilité vasculaire diminue l’exsudation de plasma vers les tissus interstitiels.
Or les résultats du criblage phytochimique effectué sur l’extrait HAWK07 montrent la présence d’anthocyanes, d’alcaloïdes et de flavonoïdes. En se basant sur les résultats de ces chercheurs, on pourrait avancer une hypothèse que ces mêmes familles chimiques qui se trouvent dans l’extrait HAWK07 seraient responsables de la diminution de la perméabilité vasculaire observée dans cette étude sur l’effet de l’extrait sur la phase vasculaire de l’inflammation.
En ce qui concerne l’activité de l’extrait sur la formation du granulome inflammatoire, des boules de coton imbibées de carragénine ont été insérées sous la peau de la souris. Dans un premier temps, les polynucléaires s’accumulent dans les boules de coton, puis ils sont remplacés par les mononucléaires et forment le granulome (HAMBLETON P. et MILLER P., 1989). Un produit anti-inflammatoire qui possède une activité tissulaire est capable de réduire ce granulome (MAHESH S. P. et coll., 2009).
Or nos résultats montrent que le poids des boules de coton chez les souris traitées avec l’extrait est inférieur à celui des souris témoins, ceci veut dire que l’extrait inhibe la formation du granulome inflammatoire. Notre extrait pourrait inhiber le recrutement des polynucléaires et des mononucléaires vers le foyer inflammatoire (OLALEYE S. B. et coll., 2004). Cela pourrait être dû à l’inhibition de l’adhésion des leucocytes aux cellules endothéliales en inhibant les molécules d’adhésion ce qui les empêche de migrer vers le foyer inflammatoire. Cette activité pourrait être due aux flavonoïdes présents dans l’extrait (MANTHEY J. M., 2000). Comme, les anthocyanes inhibent la libération de TNF-α, une cytokine chimio-attractante, ce qui bloque la migration des leucocytes vers le foyer inflammatoire (CALIXTO J. B. et coll., 2003), ils empêchent la formation du granulome.
Avec l’extrait HAWK07 il se pourrait aussi que l’inhibition de la perméabilité vasculaire empêche la formation du granulome, car l’œdème inflammatoire est indispensable à la migration des cellules immunitaires vers le foyer inflammatoire.
CONCLUSION
Les tests effectués sur l’extrait HAWK07 montrent que l’extrait HAWK07 possède une activité anti-inflammatoire. Il diminue la perméabilité vasculaire et la formation du granulome. Cet effet anti-inflammatoire pourrait être dû à la présence des anthocyanes, flavonoïdes ou alcaloïdes dans l’extrait.
Des études complémentaires devraient être effectuées pour expliquer le mécanisme d’action de l’activité anti-inflammatoire de l’extrait, et aussi pour déterminer les composés actifs responsables de cette activité.
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Table des matières
LISTE DES ABREVIATIONS
I. INTRODUCTION
II. MATERIELS ET METHODES
A. PARTIE CHIMIQUE
1. Extraction
2. Criblage phytochimique
B. PARTIE PHARMACOLOGIQUE
1. Animaux d’expérimentation
2. Étude de l’activité anti-inflammatoire de l’extrait HAWK07
a. Étude de l’effet de l’extrait HAWKO7 sur l’inflammation aigue
b. Étude de l’effet de l’extrait HAWKO7 sur l’inflammation subchronique
C. EXPRESSION ET ANALYSE DES RÉSULTATS
III. RÉSULTATS
A. PARTIE CHIMIQUE
1. Rendement de l’extraction
2. Criblage phytochimique
B. PARTIE PHARMACOLOGIQUE
1. Effet de l’extrait HAWK07 sur l’inflammation aigue
2. Effet de l’extrait HAWK07 sur l’inflammation subchronique
IV. DISCUSSIONS
V. CONCLUSION
BIBLIOGRAPHIES
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