Soutenance mémoire
De nos jours, les conditions et le mode de vie rendent souvent difficile la maîtrise individuelle des facteurs de risque d’apparition de l’hypertension artérielle (HTA). Un régime hypercalorique et/ou riche en sel et en matières grasses, l’abus d’alcool, le stress et l’insuffisance des activités physiques en sont les premiers facteurs responsables .
D’après le rapport de l’OMS, l’hypertension artérielle est le trouble cardio-vasculaire le plus fréquent qui touche environ 20% de la population mondiale [6]. A elle seule, l’HTA est responsable de près de la moitié des maladies cardiovasculaires dans le monde [6]. L’HTA est une maladie chronique et évolutive dont les risques de retentissements cérébro-vasculaires, rénaux et cardiaque constituent un grave problème pour le patient [7]. A Madagascar, 17,7% de la population adulte souffrent d’HTA (rapport du MINSAN en juillet 2011). Mais cette prévalence est beaucoup plus importante dans les grandes villes comme à Antananarivo où elle atteint 20% et on a dénombré plus de femmes hypertendues que d’hommes .
Chez l’homme adulte, l’HTA est définie par une pression artérielle systolique (PAS) permanente supérieure ou égale à 140 mm Hg et/ou une pression artérielle diastolique (PAD) permanente supérieure ou égale à 90 mm Hg [10]. Une considération particulière a été réservée pour les diabétiques afin d’éviter les complications cardiovasculaires et rénales du diabète car chez eux l’HTA est définie par une PAS ≥ 130 mm Hg et/ou une PAD ≥ 85 mm Hg [11]. Ces pressions doivent être prises en position décubitus ou en position assise, au repos et répétées au moins deux fois [12, 13]. Cliniquement, il y a deux façons de classifier l’HTA.
Etude phytochimique
Extraction
Mille sept cent cinquante gramme (1750g) de poudre de barbe de maïs séchée ont été macérés dans l’éthanol (90°) à la température ambiante pendant 24h, avec agitation permanente. La macération a été répétée 3 fois pour avoir un rendement maximal. Le macérât a été ensuite filtré sur un papier Joseph pour éliminer la poudre. Le filtrat obtenu a été évaporé sous vide à l’aide d’un évaporateur rotatif (Büchi) pour obtenir l’extrait brut (EB).
Puis, 40 g de l’extrait brut a été solubilisé dans 5 ml de méthanol avant d’ajouter 95 ml d’eau distillée et fractionné par partage liquide-liquide avec 100 ml d’hexane (MeOH-EauHexane : 5/95/100 ; v/v/v) afin de dépigmenter l’extrait brut. Après agitation, le mélange a été laissé se décanter pendant des heures. 3 phases ont été ensuite distinguées : une phase supérieure organique et une phase inférieure aqueuse séparée par une phase intermédiaire sous forme d’émulsion. Les deux phases inférieures et la phase supérieure organique ont été récupérées séparément. Et les phases inférieures ont été reprises avec 100 ml d’hexane.
L’opération a été répétée 3 fois pour augmenter le rendement. Les phases inférieures ont été regroupées et évaporées sous pression réduite à l’aide d’un évaporateur rotatif (Büchi) pour donner la fraction aqueuse (FA) tandis que les phases organiques après évaporation ont donné la fraction hexanique (FH).
Fractionnement
La méthode de fractionnement guidée par l’activité vaso-relaxante de chaque fraction sur l’aorte isolée de rat pré-contractée à la phényléphrine (PE) a été appliquée pour la détermination de la fraction active. La phase hexanique a été ensuite fractionnée sur une colonne chromatographique à pression atmosphérique, chargée de gel de silice 60 (40-63 µm de granulométrie) de marque Merck. La chromatographie sur colonne est une méthode de séparation des différents constituants dans un extrait par entraînement de la phase mobile le long de la phase stationnaire en fonction de leur affinité pour la phase mobile et de la force de rétention exercée par la phase stationnaire .
Des chromatographies sur couche mince (CCM) ont été réalisées avec des systèmes de solvants différents pour déterminer le système d’élution permettant une meilleure séparation. Ainsi, l’élution a été effectuée avec un mélange de dichlorométhane (DCM) et d’acétate d’éthyle en polarité croissante (DCM-Acétate d’éthyle: 100/0, 95/5, 90/10, 85/15). Les fractions ainsi obtenues ont été regroupées en 3 fractions (FH1, FH2, FH3) en fonction de leur profil chimique sur CCM.
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Table des matières
INTRODUCTION
A. MATERIEL ET METHODES
I- Matériel végétal
II- Etude phytochimique
1- Extraction
2- Fractionnement
3- Criblage phytochimique
III- Etudes pharmacologiques
1- Matériels biologiques
2- Appareillages et milieu physiologique
3- Produits de références
4- Tests pharmacologiques
4.1- Etude des effets diurétique et anti-hypertensif de l’EB, FH et FA chez le rat
4.2- Tests in vitro
a- Etude de l’activité vaso-relaxante
i. Préparation et montage de l’aorte isolée de rat
ii. Mise en évidence de l’effet vaso-relaxant
iii. Analyse de l’activité vaso-relaxante de FH
Effet du propranolol sur l’activité vaso-relaxante de FH
Rôle de l’endothélium dans l’activité vaso-relaxante de FH
Effet de L-NAME sur l’activité vaso-relaxante de FH
b- Etude de l’activité cardiaque
i- Préparation et montage des oreillettes isolées de cobaye
ii- Effet cardiaque de l’extrait brut
5. Etude de la toxicité aigüe
5.1- Voie orale
5.2- Voie intraveineuse rapide
IV- Expression des résultats et analyse statistique
B. RESULTATS
I- Etude phytochimique
1- Rendement de l’extraction et des fractionnements
2- Familles chimiques présentes
3- Analyses comparatives par CCM des extraits et des fractions
II- Tests pharmacologiques
1- Tests in vivo
1.1- Effet diurétique de barbe de maïs chez le rat
1.2- Effet anti-hypertensif des différents extraits de barbe de maïs chez le rat
1.3- Effet du régime hyper-sodé et du traitement sur la croissance pondérale
2- Tests in vitro
2.1- Effet vaso-relaxant sur l’aorte isolée de rat pré-contractée à la phényléphrine
a- Extrait brut (EB) et ses deux fractions (FH et FA)
b- FH et ses deux fractions (FH2, FH 3)
2.2- Analyse de l’activité vaso-relaxante de FH
a- Effet vaso-relaxant de FH en absence et en présence du propranolol
b- Implication de l’endothélium dans l’activité vaso-relaxante de FH
c- Effet vaso-relaxant de FH en absence et en présence de L-NAME
2.3- Effet d’EB sur les oreillettes isolées de cochon d’Inde
a- Effet chronotropique
b- Effet inotropique
III- Toxicité aigüe
C. DISCUSSION
CONCLUSION
REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES ET WEBOGRAPHIE
ANNEXES
