Etude de l’activité analgésique périphérique de l’extrait PKM-14

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MATÉRIELS ET MÉTHODES A. ETUDE PHYTOCHIMIQUE

Préparation de l’extrait PKM-14

La partie aérienne (tiges, feuilles, fleurs) de laplante a été récoltée dans la région de DIANA, le 15 Octobre 2016. Elle a été séchée à l’air libre, à l’abri de la lumière, à la température ambiante, pendant 1 mois. Après séchage, 200 g desplantes séchées ont été broyés à l’aide d’un broyeur à marteau (BROOK CROMPTON), au Laborat oire de Pharmacologie Générale, de Pharmacocinétique et de Cosmétologie, à la Faculté des Sciences, Université d’Antananarivo.
La poudre obtenue a été macérée dans un mélange Ethanol-Eau (60 : 40), à la température ambiante pendant trois jours. Le macérât a été agité pendant 10 minutes par jour pendant les 3 jours.
Ensuite, il a été filtré sur un tissu en coton puisur du coton hydrophile. Le filtrat ainsi obtenu a été évaporé à l’aide d’un distillateur, laà température de 80°C, puis au bain-marie à la température de 100°C. L’extrait brut hydro-alcoolique obtenu a été codé PKM-14, puis pesé et le rendement de l’extraction a été calculéàpartir de la formule : ′ Rendement (%) = X 100 é é

Criblage phytochimique de l’extrait

Pour déterminer les différentes familles chimiquesprésentes dans l’extrait PKM14, des réactifs spécifiques à chaque famille chimique ont été utilisés. La présence d’une famille chimique est marquée par l’apparition de précipité,ou par un changement de coloration (FONG H. H. S. et coll., 1977).
Afin de quantifier la proportion relative des différentes familles, l’intensité des réactions a été observée, et les signes suivants ont été utilisés:
–: Absence de changement de couleur, de précipité ou de mousse.
+: Présence en faible coloration ou apparition de précipité.
++: Présence en moyenne coloration ou apparition deprécipité.
+++: Présence en forte coloration ou apparition deprécipité.

PARTIE PHARMACOLOGIQUE

L’activité de l’extrait PKM-14 a été étudiéein vivo sur des douleurs expérimentales provoquées chez la souris. Son activité analgésiquecentrale a été étudiée en plongeant la queue de la souris dans la l’eau chaude, tandis que celle de la périphérie a été évaluée en injectant une solution d’acide acétique à 0,6% dans la péritonéale de l’animale.

Animaux d’expérimentation

Pour étudier l’activité de l’extrait PKM-14, des souris de race SWISS âgées de 2 à 3 mois, pesant entre 20 à 30g et de sexe mâle ont été utilisées. Elles ont été élevées aux conditions locales du LPGPC de la Faculté des Sciences de l’Université d’Antananarivo. Les animaux ont été nourris avec de la provende LFL et ont eu ccèsa à de l’eau à volonté. Ils ont été soumis à un cycle de lumière et d’obscurité de 12h/12h, et une température ambiante de 20°C environ.
Avant chaque test, elles ont été mises à jeun pendant 18 h (JACKSON C. et coll., 2011).

Préparation des produits à tester et voie d’administration

L’extrait PKM-14 a été dissout dans l’eau distillée, et il a été administré par voie orale chez la souris (JACKSON C. et coll., 2011).

Etude de l’activité analgésique de l’extrait PKM-41

Deux tests in vivo ont été effectués pour étudier l’activité analgésique de l’extrait PKM-14 : un test pour étudier son activité analgésique périphérique, et un autre pour étudier son activité analgésique centrale.

Etude de l’activité analgésique périphérique de xtraitl’e PKM-14

L’activité analgésique périphérique de l’extrait étéa étudiée par son effet sur la douleur provoquée par l’injection d’une solution d’acide acétique à 0,6 %.
Des souris ont été mises à jeun pendant 18 h avantd’être utilisées. Elles ont été réparties en quatre lots : un lot témoin et trois lots traitésLes. souris du lot témoin ont reçu d’eau distillée 10 ml par kilogramme de la masse corporelle par voie orale, tandis que les trois autres lots ont reçu l’extrait PKM-14 aux doses respectives de 150, 300 et 600 mg par kilogramme de la masse corporelle dissout dans l’eau distillée de 10 ml par kilogramme de la masse corporelle, par voie orale.
Trente minutes après l’adminnistration de l’extrait, 10 ml/kg d’une solutioon d’a cide acétique (0,6%) ont été injectés paar voie intrapéritonéale (SAWADOGO W. R. et coll., 2006). Immédiatement après cette innjection, l’animal a étéplacé dans un bocal en verrede 14 cm de diamètre et de 30 cm de hautteur pendant 15 mn, et des mouvements d’éétirement des pattes postérieures et des contorsionss des muscles dorso-abdominaux ont été obsservées (HANG L. e coll., 2007).

Etude de l’activité analgésique centrale de l’extrait PKM-14

L’activité analgésique centrrale de l’extrait a étéétudiée par son effet sur la douleu expérimentale provoquée paar l’eau chade. Des souris mises à jeun peendant 18h ont été réparties en 4 lots de 4 souris : un lot témoin et trois lots traités. Les animauxdu lot témoin ont reçu 10 ml/kg d’eau distilllée par voie orale, dans un volume, tandis que les 3 autres lots ont reçu l’extrait PKM-14 auxx doses respectives de 150, 300 et 600 mg paar kilogramme de la masse corporelle, par voie orale, dissout dans l’eau distillé de 10 ml parr kilogramme de la masse corporelle (JACKSON C. et coll., 2011).

Après 15, 30, 45, 60, 90 et 120 mn de l’administration de ces produits, la queue de la souris a été plongée dans de l’eau chaude maintenue à la température de 50 °C (EZEJA M. I. et coll., 2011 ; REDDY S. K. et coll., 2012) (figure 4). Le temps maximal pur plonger la queue de la souris dans l’eau chaude a été fixé à 15 secondes fina d’éviter la lésion tissulaire (MISHRA D. et coll., 2011).

Traitements et analyses des résultats

Les résultats sont été exprimés sous forme de moyennes avec des écarts types réduits ( ± ). Les moyennes ont été comparées entre elles en utilisant le test « t » de Student avec le degré de signification fixé à P < 0,05.

RÉSULTATS

PARTIE PHYTOCHIMIQUE

Rendement de l’extraction

L’évaporation à sec du filtrat obtenu en macérant 200 g de poudre de la plante dans le mélange éthanol-eau (60 : 40) donne 22 g d’extrait sec, de couleur marron, hydrosoluble, soit un rendement de l’extraction de 11%.

Criblage phytochimique

Le criblage phytochimique effectué sur l’extrait PKM-14 révèle la présence d’alcaloïdes, de tanins et de stéroïdes en forte teneur. L’extrait renferme des flavonoïdes, des leuco-anthocyanes, des composés phénoliques et des terpénoïdes en teneur moyenne, tandis que les sucres réducteurs s’y trouvent en faible teneur (Tableau II).

PARTIE PHARMACOLOGIQUE

Activité analgésique périphérique de l’extrait PKM14-

La solution d’acide acétique injectée via intrapéritonéale à 0,6 % provoque des mouvements d’étirement des pattes postérieures et des contorsions des muscles dorso-abdominaux. Pendant les 15 mn d’observation, le nombre de contorsions observées chez les témoins est supérieur à celui des animaux traités avec l’extrait. Chez le lot témoin le nombre de contorsions dorso-abdominales est égal à 37,5 ± 0,75, contre 28 ± 0,75, 16,25 ± 0,87 et 4,5 ± 0,50 chez les souris traitées avec l’extrait aux doses de 150, 300 et 600 mg par kilogramme de la masse corporelle (P < 0,05) (Figure 5).

DISCUSSION

L’objectif de cette étude a été d’étudier l’activité de l’extrait PKM-14 sur la douleur expérimentale chez la souris.
L’acide acétique a été injecté par voie intrapéritonéale pour provoquer la douleur. Cette méthode est utilisée pour étudier l’effet analgésique périphérique d’un produit (ADEYEMI O.O. et coll., 2011). L’injection intrapéritonéale d’acide acétique irrite le tissu viscéral à l’origine de la douleur ressentie au niveau de l’abdomen, suite à la libération de différentes substances comme la bradykinine et les ions K+ qui contribuent à la transmission d’influx douloureux (ALAIN de B., 2005). Ces substances activent les fibres nociceptives de types C responsables de la transmission de cet influx nerveux au niveau du cerveau. La douleur provoquée par l’acide acétique est caractérisée par la contraction du muscle dorso abdominal (VERMA P. R. et coll., 2005 ; RATHI A. et coll., 2003).

D’après nos résultats, l’extrait PKM-14 pourrait inhiber la libération de ces substances algogènes, en inhibant la Cyclo-oxygénase 2 (COX2) et/ou la Lypo-oxigénase (LOX), ce qui réduirait le taux de prostaglandines libérée. Des flavonoïdes inhibent le COX2 (HATANO T. et coll., 1989 ; YOSHIDA T. et coll., 1989), et les saponines inhibent l’action des prostaglandines comme celle provoquée par l’extrait de Ximenia americana (Linné) (OLACACEAE) (SORO T. Y. et coll., 2015). Ces actions ont lieu dans le système nerveux périphérique, au niveau de la transduction ou de la transmission. Cela nous permet d’avancer une hypothèse que l’extrait PKM-14 possède une activité analgésique périphérique en inhibant la transduction ou la transmission. Soit en inhibant l’action de COX2 ou en inhibant l’action des prostaglandines, augmentant ainsi le seuil de la douleur, caractérisé par la diminution du nombre de contorsion abdominale.
Par ailleurs, le stimulus thermique a été utilisé pour étudier l’activité analgésique centrale de l’extrait PKM-14. Ce stimulus est perçu par les thermorécepteurs qui se trouvent au niveau de la terminaison de la fibre C non myélinisée qui transmet l’influx douloureux vers la moelle épinière (DELGADO O.‚ 2006). Cet influx est ensuite transmis au niveau du cerveau où il active les récepteurs opioïdes mu (µ), et perçu comme une douleur, provoquant un ensemble de réflexes comme le retrait de la queue (MONIRUZZAMAN M. et IMAM M. Z., 2014 ; HAYES A. G. et coll., 1987).

Selon les résultats que nous avions obtenus, l’extrait PKM-14 augmente le temps de latence de retirement de la queue hors de l`eau chaude en fonction de la dose administrée. Ceci nous permet d’avancer qu’il diminue la perception de la douleur. Cela pourrait être dû à son action14 au niveau des récepteurs opioïdes. D’après les études effectuées par HASAN M. et ses collaborateurs (2014) l’extrait brut de Mallotus repandus (EUPHORBIACEAE) augmente aussi le temps de retrait de la queue, et ils ont conclu qu’il possède une activité analgésique centrale. Cette activité est due aux alcaloïdes qu’il contient, ces molécules agiraient au niveau des récepteurs opioïdes (HASAN M. et coll., 2014). Les résultats de criblage phytochimie de notre extrait révèlent la présence de cette famille chimique. Nous émettons une hypothèse que PKM 14, possède aussi une activité analgésique centrale, et les alcaloïdes qu’il contient en seraient les responsables.
L’isolement du ou des principes actifs dans cet extrait permettra de donner plus de précision sur son mécanisme d’action.

Table des matières

LISTE DES FIGURES
LISTE DES SIGLES ET DES ABREVIATIONS
I. INTRODUCTION
II. MATÉRIELS ET MÉTHODES
A. ETUDE PHYTOCHIMIQUE
1. Préparation de l’extrait PKM-14
2. Criblage phytochimique de l’extrait
B. PARTIE PHARMACOLOGIQUE
1. Animaux d’expérimentation
2. Préparation des produits à tester et voie d’administration
3. Etude de l’activité analgésique de l’extrait PKM-14
a. Etude de l’activité analgésique périphérique de l’extrait PKM-14
b. Etude de l’activité analgésique centrale de l’extrait PKM-14
c. Traitements et analyses des résultats
III. RÉSULTATS
A. PARTIE PHYTOCHIMIQUE
1. Rendement de l’extraction
2. Criblage phytochimique
B. PARTIE PHARMACOLOGIQUE
1. Activité analgésique périphérique de l’extrait PKM-14
2. Activité analgésique centrale de l’extrait PKM14
IV. DISCUSSION
V. CONCLUSION
VI. BIBLIOGRAPHIE

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