Elevage de la Cazotte

Prélèvements pour la bactériologie

Les prélèvements aseptiques de lait pour les analyses bactériologiques sont effectués entre l’extraction des premiers jets (pour comptages cellulaires) et la traite complète. Un opérateur aux mains nettoyées et désinfectées met en œuvre l’antisepsie de l’apex du trayon avec une compresse imprégnée d’alcool à 85°C. Il fait ensuite jaillir un jet de lait dans un tube stérile ouvert au dernier moment par un deuxième opérateur, aux mains également désinfectées. Le tube est immédiatement refermé puis identifié (numéro de la brebis, côté G ou D, date). Les tubes ont ensuite été congelés à -70°C avant d’être analysés par PCR.

Stratégie diagnostique

Les échantillons de lait ainsi recueillis ont ensuite été analysés par PCR en temps réel. Dans un premier temps, nous avons recherché la présence de Staphylococcus spp., genre bactérien regroupant les agents étiologiques majoritairement responsables des mammites subcliniques chez les ovins.

Dans un deuxième temps, nous poursuivrons cette recherche d’agents infectieux suivant le résultat de la PCR Staphylococcus spp.. Dans le cas d’un résultat négatif, la présence d’autres germes responsables de mammites sub-cliniques sera recherchée (Figure 14). Dans le cas d’au moins un résultat positif avant et après tarissement pour Staphylococcus spp., des séquençages seront réalisés afin d’identifier et de comparer les espèces présentes (Figure 15). La suite des réactions d’amplification et de séquençage ne fait pas partie de la présente thèse, mais fera l’objet de futurs travaux.

Validation de la PCR Staphylococcus spp

Une partie des échantillons a été amplifiée une deuxième fois selon la méthode décrite ci-dessus (plaque 6). Les échantillons choisis pour cette amplification additionnelle correspondent :
– soit à des échantillons dont le contrôle interne n’a pas été amplifié lors de la première PCR (présence probable d’inhibiteurs de l’amplification). A partir de l’ADN extrait, une dilution au cinquième a été réalisée, puis la nouvelle amplification a été réalisée.
– soit à des échantillons choisis pour l’évaluation de la répétabilité des résultats. Nous avons sélectionné des échantillons ayant donné des résultats négatifs, faiblement, moyennement et fortement positifs lors de la première amplification. A partir de l’ADN extrait, nous avons réalisé une nouvelle amplification pour comparer les résultats obtenus entre les deux amplifications.

Modalités d’application

La solution iodée a été utilisé dans les jours précédents la mise-bas. L’objectif était d’appliquer ce traitement au moins trois fois avant la mise bas, à raison d’une fois par jour. Les applications ont systématiquement été réalisées le matin, lorsque les brebis étaient au cornadis (alimentation). Pour chaque brebis, le côté à traiter était indiqué par un marquage de couleur. Un trempage était alors réalisé du côté indiqué grâce à un gobelet anti-retour. Le produit, une fois appliqué, couvrait tout le trayon.

Comme toutes les mises-bas n’étaient pas groupées (retours), certaines brebis ont reçu plus d’applications que d’autres. De plus, en raison de mises bas précoces non anticipées, une partie des brebis n’a reçu aucune application de Io-Shield ® (Figure 18). Pour chaque brebis, nous avons arrêté les applications dès l’agnelage, afin éviter les interférences avec la tétée des agneaux.

I. Présentation de l’essai 
II. Elevage et animaux 
1. Elevage de la Cazotte
a. Reproduction
b. Production laitière
c. Bergerie
d. Alimentation
e. Essais nutritionnels
f. Machine à traire
g. Gestion des mammites
2. Critères de sélection des animaux
a. Critères de non inclusion
b. Critères d’exclusion
III. Méthodes cliniques et analytiques 
1. Données cliniques
a. Calendrier des interventions
b. Examen clinique extra-mammaire
c. Examen clinique mammaire
2. Données cellulaires et laitières
a. Données du contrôle laitier
b. Données des essais nutritionnels
3. Données bactériologiques
a. Calendrier des interventions
b. Prélèvements pour la bactériologie
c. Stratégie diagnostique
d. Recherche de Staphylococcus spp. par PCR en temps réel
e. Validation de la PCR Staphylococcus spp.
IV. Antibiothérapie intra-mammaire au tarissement
1. Identification des hémi-mamelles présumées « infectées » (campagne N)
2. Constitution des lots par stratification et randomisation
3. Stratégie de traitement de chaque lots et sélection des hémi-mamelles à traiter
a. Lot A
b. Lot B
c. Lot C
4. Date, nature et modalité du traitement intra-mammaire
V. Antisepsie des trayons en périodes de peripartum 
1. Sélection des hémi-mamelles à traiter
2. Nature et modalités de l’antisepsie
VI. Caractérisation du statut infectieux des animaux 
1. Critère 1
2. Critère 2
3. Critère 3
4. Critère 4
5. Critère 5
6. Critère 6
7. Synthèse des critères
8. Correspondance entre les statuts et la sélection des mamelles et des hémi-mamelles à traiter
9. Evolution des statuts entre N et N+1
VII. Analyses statistiques 
RESULTATS 
I. Validation de l’allotement et caractérisation des lots
1. Caractérisation zootechnique
2. Caractérisation clinique
3. Caractérisation cellulaire (à l’échelle de la mamelle)
4. Caractérisation cellulaire (à l’échelle de l’hémi-mamelle)
5. Caractérisation bactériologique
II. Efficacité curative et préventive de l’antibiothérapie et de l’antisepsie 
1. Tendance générale
2. Efficacité clinique (critère 1)
3. Efficacité laitière et cellulaire à l’échelle de la brebis (critères 2 et 3)
4. Efficacité cellulaire à l’échelle de l’hémi-mamelle

Télécharger le rapport complet