Soutenance mémoire
Le diabète est une maladie considérée par l’OMS comme une épidémie et dont la prévalence a augmenté de façon très importante au cours de ces dernières années. (Auberval et al., 2010 ) Actuellement, plus de 150 millions de personnes dans le monde sont atteintes de diabète, Le diabète vient en deuxième position au classement des maladies chroniques en Algérie, dont plus de 4 millions de personnes souffrant de cette maladie dans le pays, selon les donnés du ministère de la santé. La maladie pourrait toucher 350 million de personnes dans le monde en 2030, selon système de comptage de l’Organisation mondiale de la santé (OMS).
Le diabète est une maladie potentiellement mortelle responsable chaque année dans le monde de près de 4 millions de décès. De plus, un mauvais équilibre du diabète est responsable de l’apparition de complications cardiovasculaires par altération des vaisseaux sanguins. De nombreuses études suggèrent que le diabète s’accompagne d’un stress oxydant qui favorise le développement de la maladie en perturbant l’insulino-sécrétion, en favorisant l’insulino- résistance et les complications cardiovasculaires qui y sont associées. Ce stress oxydant est dû à une rupture de l’équilibre physiologique qui existe dans l’organisme entre les molécules oxydantes et les systèmes de défenses antioxydants. En plus des défenses antioxydantes présentes dans l’organisme, l’alimentation apporte de nombreux antioxydants notamment par les oligo-éléments. Ainsi, une rupture de l’équilibre alimentaire (défaillance nutritionnelle, carence, alimentation trop riche) entraîne le développement du stress oxydant par diminution des systèmes de défense.
En 1869, Paul Langerhans montre que le pancréas contient non seulement des cellules secrétant du suc pancréatique, mais un autre type de cellules dont il ignore la fonction. Ces cellules porteront plus tard son nom. Ultérieurement, les travaux de Claude Bernard sur la fonction glycogénique du foie permettront à Oscar Minkowski et Joseph Von Mehring d’établir le rôle du pancréas en 1886 à l’université de Strasbourg. En fin, l’insuline sera découverte en 1921 par Frederick Banting et Charles Best (Vivot, 2012). Le diabète sucré est aujourd’hui considérée comme une maladie dégénérative majeure dans le monde, menaçant d’une manière croissante, la santé publique (Saha et al., 2012).
C’est un trouble métabolique caractérisé par la présence d’une hyperglycémie attribuable à un défaut de la sécrétion d’insuline et/ou de l’action de l’insuline. L’hyperglycémie chronique liée au diabète est associée à d’importantes séquelles à long terme, particulièrement à des lésions, des anomalies et une insuffisance de divers organes, surtout les reins, les yeux, les nerfs, le cœur et les vaisseaux sanguins (l’Association canadienne du diabète, 2008) Le diagnostic de diabète répond à une définition clinico-biologique : soit une glycémie veineuse aléatoire supérieure à 2 g/l et des signes cliniques (amaigrissement, soif intense, fatigue..), soit une glycémie veineuse à jeun supérieure à 1.26g/l à deux reprises (COPIL PRSP MCV, 2009).
MATERIEL ET METHODES
Matériel biologique
Animaux d’élevage
Le matériel biologique de base que nous avons choisi est la ratte blanche de la souche Wistar, provenant de l’Institut Pasteur d’Alger. Les rattes sont des mammifères nocturnes de l’ordre des rongeurs. La puberté survient entre 50 et 60 jours après la naissance chez les deux sexes. Une ratte en bonne santé peut vivre entre 2 ans et demi à 3 ans en fonction de la souche, des conditions environnementales et d’autres variables (Baker et al ., 1980). A leur arrivée, ces rattes pesaient en moyenne 180 grammes, et au moment de l’expérimentation, elles pesaient en moyenne 200± 20 grammes.
Condition d’élevage
Les animaux ont été élevés dans des cages en polyéthylène, tapissées d’une litière composée de copeaux de bois. Les cages ont été nettoyées et la litière changée une fois tout les deux jours. Ces animaux ont été acclimatés aux conditions de l’animalerie, à une température de 25 ± 2°C, une hygrométrie de 50% et une photopériode naturelle (printemps). La nourriture apportée aux animaux est confectionnée sous forme de bâtonnets constitués de maïs, d’orge, de lait et de compléments vitaminés (GAE : Groupe Agricole de l’Est, Bejaia). Quant à l’eau de boisson, elle est présentée dans des biberons adaptés aux cages. L’aliment et l’eau sont fournis ad libitum.
Lotissement des animaux
Après une période d’adaptation de trois semaines, nous avons choisi soixante douze (72) rattes en fonction du poids (approximativement 220 grammes) que nous avons séparées en 5 lots expérimentaux : lot témoin (T 8 rattes), lot contrôle (C) [n=16], lot diabétique (D) [n=16], lot stressé (S) [n=16] et lot diabétique stressé (DS) [n=16]. Chaque lot a été divisé en deux groupes dont huit (8) rattes reçoivent par gavage gastrique 1 ml/kg de solution saline d’NaCl 0.9 % (véhicule) et huit (8) autres rattes reçoivent par gavage gastrique 100 mg/kg d’hespéridine (antioxydant) dissoute dans la même solution d’ NaCl 0.9 %.
Méthodes
Identification œstrale et accouplement
Les rattes des différents groupes ont été séparées chacune dans une cage. L’identification œstrale s’effectue par des frottis vaginaux sur toutes les femelles afin d’identifier les phases du cycle œstrien tout en estimant leur réceptivité. La technique du frottis vaginal consiste à prélever, au moyen d’une anse métallique, le liquide visqueux retrouvé au niveau des parois du vagin de la ratte .Une fois prélevé, le frottis est étalé sur une lame pour procéder à la coloration selon la méthode d’Issac et Wurch (1966) qui consiste à appliquer quelques gouttes du bleu de méthylène sur la lame (solution alcoolique de 1‰) puis rincer à l’eau distillée.
Traitement des animaux
Administration de la streptozotocine
La streptozotocine (STZ) est une substance chimique soluble dans l’eau, le sérum physiologique et les solvants organiques avec un poids moléculaire de 265,2 Da. Isolée en 1956 à partir de Streptomyces utilisée pour la première fois en 1967, elle est couramment utilisée sur les modèles animaux pour l’étude du diabète (Frode et al ., 2008) (Figure 05). Elle est constituée d’un résidu de glucose auquel se lie, au carbone (2), un résidu nitro-urée méthylé. In vivo, sa demi-vie est de 5 à 15 minutes. Il est possible que l’entité glucidique de la molécule facilite son internalisation via les transporteurs GLUT2 membranaires des endocrinocytes β pancréatiques (White FR, 1963).
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Table des matières
1. INTRODUCTION
2. MATERIEL ET METHODES
2.1 Matériel biologique
2.1.1. Animaux d’élevage
2.1.2. Condition d’élevage
2.1.3. Lotissement des animaux
2.2. Méthodes
2.2.1. Identification œstrale et accouplement
2.2.2. Traitement des animaux
2.2.2.1. Administration de la streptozotocine
2.2.2.2. Administration de la solution glucosée
2.2.3. Traitement par un antioxydant (l’hespéridine)
2.2.3.1. Présentation de l’hespéridine
2.2.3.2. Administration de l’hespéridine
2.2.4. Tests comportementaux
2.2.4.1. Test du champ ouvert (open field; OF)
2.2.4.2. Test du labyrinthe en croix surélevé (Elevated plus maze)
2.2.4.3. Application du stress Water Avoidance (WA)
2.2.5. Détermination du profil glycémique durant la gestation
2.2.6. Préparation des prélèvements
2.2.6.1. Décapitation et prélèvement sanguin
2.2.6.2. Dissection et prélèvement des organes maternels
2.7. Hématologie
2.8. Dosages des paramètres du stress oxydatif
2.8.1. Préparation de l’homogénat
2.8.2. Dosage des protéines
2.8.3. Glutathion (GSH)
2.8.3.1. Principe
2.8.3.2. Mode opératoire
2.8.3.3. Calcul de la concentration
2.8.4. Glutathion-S-Transférase (GST)
2.8.4.1. Principe
2.8.4.2. Mode opératoire
2.8.4.3. Mesure de l’activité de la GST
2.9. Traitement statistique des résultats
3. RESULTATS
3.1. Expérimentation 1
Effets de l’hespéridine chez les rattes diabétiques
3.1.1. Changement pondéral
3.1.2. La glycémie
3.1.3. Le comportement anxieux dans l’Open Field test
3.1.4. Le comportement anxieux dans l’Elevated Plus-Maze test
3.1.5. Les mesures hématologiques gestationnelles
3.1.6. Teneur en glutathion réduit (GSH) et en glutathion S-transférase (GST)
3.1.6.1. Teneur hépatique en glutathion (GSH)
3.1.6.2. Mesure de l’activité hépatique de la glutathion S-transférase (GST)
3.1.6.3. Teneur cardiaque en glutathion (GSH)
3.1.6.4. Mesure de l’activité cardiaque de la glutathion S-transférase (GST)
3.2. Expérimentation 2
Effets de l’hespéridine chez les rattes diabétiques stressées
3.2.1. Changement pondéral
3.2.2. La glycémie
3.2.3. Le comportement anxieux dans l’Open Field test
3.2.4. Le comportement anxieux dans l’Elevated Plus-Maze test
3.2.5. Les mesures hématologiques gestationnelles
3.2.6. Taux de glutathion cérébral
3.2.7. Activité de la glutathion-S-transférase cérébrale
4. DISCUSSION
5. CONCLUSION ET PERSPECTIVES
REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES
PUBLICATIONS
COMMUNICATIONS
